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《西北农林科技大学》 2003年
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ETEC定居因子CS3对胡萝卜的转化及肠毒素LTB-ST病毒表达载体的构建

陈书霞  
【摘要】: ETEC(Enterotoxigenic Escherichia Coli,肠毒性大肠杆菌)是引起腹泻的一种主要病原菌,其主要致病因子是定居因子抗原(Colonization Factor Antigens,CFAs)和肠毒素(Enterotoxin,LT)。它在致病时是通过定居因子蛋白表面结构粘附到肠上皮细胞表面,然后分泌肠毒素致病。一个有效的ETEC口服疫苗必须能够激起抗定居以及抗毒素两方面的免疫反应。如果一个疫苗包含有定居因子抗原和LT肠毒素,则理论上可使服食者免受80%的ETEC菌株的侵害。CS3是ETEC定居因子之一,临床研究结果表明口服CS3可引起免疫应答。本研究期望通过农杆菌转化系统将CTB(霍乱毒素B亚基,可作为佐剂和载体)基因和CTB-CS3融合基因分别转入胡萝卜植株,使CTB和CTB—CS3融合基因稳定整合到胡萝卜基因组内,希望以此获得以胡萝卜为受体的ETEC口服疫苗,使服食者在进食的同时就可获得腹泻免疫。通过研究ETEC定居因子基因对胡萝卜的稳定转化探索了转基因口服疫苗生产的潜在途径,这对国内研究廉价实用腹泻口服疫苗具有重大的理论和实践意义。同时本研究还通过构建LTB—ST融合基因PVX病毒表达载体,并用农感染法转化植物,探索了暂态表达系统生产疫苗的可能性。 在胡萝卜的再生体系建立阶段,从4个品种中筛选出了适合于本实验的2个胡萝卜品种“新透心红”和“AC93”,并确定了它们通过胚状体发生途径的激素条件及培养基类型。“新透心红”品种是通过MS_0+0.1mg/L 2,4-D诱导愈伤组织,然后转到MS_0培养基上诱导胚状体的发生;而“AC93”是通过B_5+0.2mg/L 2,4-D诱导胚性愈伤组织,然后转至B_(50)培养基上诱导胚状体的形成。两品种愈伤组织上发生的胚状体接种到不含激素的基本培养基上后都能长成健康小植株。同时还研究了本实验激素组合条件下胡萝卜胚的发生情况。2,4—D浓度相同KT浓度不同的激素组合随着KT浓度的升高,诱导的胚性愈伤转至不含激素的培养基上后胚状体发生量及发生胚状体的块数都随KT浓度增加而减少,但愈伤组织块的生长量却随KT的浓度升高而增加。 为了对转化苗加以较为严格的筛选,界定了“新透心红”组培过程中各个阶段的 Kan筛选压。把愈伤组织诱导阶段的Kan浓度定为somg/L;愈伤组织继代的Kan浓 度定为100m叭;小植株长根的培养基的Kan浓度定为SOm叭。在所进行的转化实 验中,分别对幼苗进行4oC不同天数的处理,观察抗性愈伤组织的形成情况。其中幼 苗经4aC处理4天,从其下胚轴所获得的抗性愈伤最多,其抗性愈伤组织的诱导频率 为80%,高于其它各处理的抗性愈伤组织的诱导频率。说明外植体的不同生理状态对 农杆菌转化有一定的影响。 以“新透心红,,品种无菌苗的下胚轴切段和农杆菌PBinCTBS为试材进行了共培 养天数的确定。将“新透心红”品种无菌苗的下胚轴切段和农杆菌PBinCTBS分别共培 养ld、3d、sd、7d,以确定本研究中共培养的天数。发现外植体在共培养2一3d四 周出现较明显的菌液时在含有抗生素的培养基上生长良好,所以确定了共培养2一3d 为本实验较适宜的共培养时间。分别研究了胡萝卜不同苗龄(7d、lld、30d)的抗性 愈伤形成率。在相同条件下的转化实验中,发现不同苗龄的外植体的抗性愈伤的诱导 频率基本相同:还进一步研究了胡萝卜同一苗龄不同部位的抗性愈伤形成率,同时用 3Od苗龄(照光3周)的叶柄和下胚轴做转化实验,发现叶柄的抗性愈伤形成率高于 下胚轴的抗性愈伤形成率,进一步的实验发现,由叶柄诱导的苗子的阳性率高于由下 胚轴诱导的苗子的阳性率,此结果和Pawlicki的结论是一致的。 经过PCR一Southem检测以及southem杂交等实验手段初步证明CTB一CS3和CTB 基因己分别整合到部分胡萝卜基因组中去,RT一PCR可分别证明外源基因在RNA的 水平上有初步转录。 另外,构建了LTB一ST的PVX病毒表达载体的重组克隆,并将重组质粒转化 入农杆菌MOG101和LBA4404中,利用农感染法侵染烟草,得到发病的植株,通过 RT一PCR检测了目的基因表达,对利用病毒表达系统表达外源基因作了初步的探索 和研究。
【学位授予单位】:西北农林科技大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:Q789

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 崔德凤,张永红;肠毒素型大肠杆菌菌毛的研究进展[J];北京农学院学报;2001年03期
2 马兴元;动物口服疫苗研究进展[J];动物医学进展;1998年02期
3 张兆山,徐兵,李淑琴,舒东,俞守义,黄翠芬;大肠杆菌热敏肠毒素和耐热肠毒素基因融合及其免疫原性研究[J];高技术通讯;2000年01期
4 毛旭虎,邹全明;大肠杆菌不耐热肠毒素的粘膜免疫机理[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;2000年01期
5 刘玉乐,王晋芳,邱并生,赵淑珍,田波;人乙肝病毒表面抗原基因在转基因烟草中的表达[J];中国科学(B辑 化学 生命科学 地学);1993年03期
6 王玉炯,许崇波;大肠杆菌耐热性肠毒素(ST)的分子生物学研究进展[J];宁夏大学学报(自然科学版);2001年03期
7 赵春晖,王荣,赵长生,王关林,田波;含与不含前导序列的乙肝病毒表面抗原在转基因番茄中表达的研究[J];农业生物技术学报;2000年02期
8 徐兵,张兆山,李淑琴,舒东,俞守义,黄翠芬;产肠毒素大肠杆菌的热敏肠毒素B亚基(LT-B)和耐热肠毒素(ST)基因融合及其表达[J];生物工程学报;1999年04期
9 朱国萍,徐冲;植物生物反应器生产绿色疫苗研究进展[J];生物工程进展;2002年02期
10 熊凌霜,马清钧,张艳红;工程菌产霍乱肠毒素B亚单位的纯化[J];生物化学杂志;1990年01期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 于惠敏;侯丙凯;;番茄基因工程及生物反应器研究与开发进展[J];山东农业科学;2007年02期
2 魏国芹;戴洪义;孙玉刚;梁美霞;安淼;;榅桲离体培养繁殖的研究[J];山东农业科学;2010年01期
3 刘媛媛;张春庆;吴承来;;LeJA2基因沉默表达载体导入番茄转化系统的建立[J];山东农业科学;2010年02期
4 吴志平;植物转基因方法在桑树上的应用[J];安徽农学通报;2003年04期
5 徐忠东,余庆来;植物生物技术的应用现状及其发展前景[J];安徽农学通报;2003年05期
6 张宝琼;范眸天;屈云慧;于丽霞;李涵;;利用卡那霉素筛选非洲菊转基因植株的技术研究[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年03期
7 夏珣;闫明旭;李名扬;眭顺照;;Metallothionein克隆载体及表达载体的构建及转化矮牵牛的初步研究[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年07期
8 黄磊;唐光绪;田东;何庆元;;新型分子标记的开发和利用[J];安徽农学通报(上半月刊);2010年23期
9 张霞;刘敦菊;徐立;眭顺照;李名扬;;白兰叶挥发油提取方法及工艺条件研究[J];安徽农学通报(上半月刊);2011年03期
10 张希太;;高粱DNA导入小麦“矮早8”引起后代变异的研究及SSR分析[J];安徽农学通报(上半月刊);2011年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 黄月琴;薛建平;;植物抗病分子机制及抗病基因工程研究进展[A];现代农业理论与实践——安徽现代农业博士科技论坛论文集[C];2007年
2 张鹤龄;;我国马铃薯品质改良,抗真菌细菌病害基因工程进展[A];中国马铃薯学术研讨会与第五届世界马铃薯大会论文集[C];2004年
3 尹钧;任江萍;李志岗;李磊;周苏玫;卫丽;宋丽;;转基因抗穗发芽小麦的获得[A];中国作物学会2007年全国作物遗传育种学术研讨会论文集[C];2007年
4 吴洁;周宇;张雪梅;阎文昭;;幽门螺杆菌热休克蛋白基因HspB-C对甘薯遗传转化的研究[A];中国核科学技术进展报告——中国核学会2009年学术年会论文集(第一卷·第8册)[C];2009年
5 邵宏波;;山葡萄生物技术研究的现状[A];植物组织培养与脱毒快繁技术——全国植物组培、脱毒快繁及工厂化生产技术学术研讨会论文集[C];2001年
6 陈书霞;程智慧;李霞;;胡萝卜转化再生的激素条件研究[A];中国园艺学会第六届青年学术讨论会论文集[C];2004年
7 张素勤;邹志荣;耿广东;;转基因蔬菜疫苗研究进展[A];中国园艺学会第六届青年学术讨论会论文集[C];2004年
8 齐靖;申连英;毛永民;曹柳青;兰海波;陈亮;;枣转基因研究前景展望[A];第五届全国干果生产、科研进展学术研讨会论文集[C];2007年
9 马艳芝;张玉星;;梨属植物基因组DNA提取部位对RAPD扩增的影响[A];第二届全国果树分子生物学学术研讨会论文集[C];2009年
10 冯怀蓉;王炜;常玮;茆军;余荭;;Ri质粒研究进展[A];新世纪(首届)全国绿色环保农药技术论坛暨产品展示会论文集[C];2002年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 郭宪;抑制素基因工程疫苗的研究与应用[D];甘肃农业大学;2010年
2 李惠华;龙眼体胚发生过程中激素代谢和信号转导相关基因的克隆与表达[D];福建农林大学;2010年
3 李望丰;SsNHX1基因在紫花苜蓿中的表达及其耐盐性研究[D];东北师范大学;2010年
4 关正君;樱桃番茄的HBsAg基因转化及其突变体特性研究[D];西北大学;2011年
5 冯守千;红梨着色机理的研究[D];山东农业大学;2011年
6 马进;水稻条纹病毒(RSV)RNA3、RNA4的克隆与抗RSV转基因水稻的培育[D];山东农业大学;2011年
7 张艳华;根癌农杆菌介导申克氏孢子丝菌T-DNA插入突变的研究[D];吉林大学;2011年
8 郝金凤;无载体无选择标记转基因耐贮藏甜瓜的培育[D];内蒙古大学;2010年
9 佘茂云;小麦组织培养再生相关基因克隆及分子特性分析[D];中国农业科学院;2011年
10 杜振国;三种水稻病毒基因沉默抑制子的鉴定和研究[D];福建农林大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张庆福;枳精氨酸脱羧酶基因(PtADC)转化烟草提高抗脱水研究[D];华中农业大学;2010年
2 魏礼玲;MYB转录因子家族相关EST干涉载体构建及遗传转化的研究[D];华中农业大学;2010年
3 张鲁军;离子束诱导普通小麦小偃81 HMW-GS 1Ax1缺失突变家系突变机制研究[D];郑州大学;2010年
4 刘无双;拟南芥种子特异表达基因启动子分析[D];山东农业大学;2010年
5 李晓东;茶树体细胞胚发生的影响因素及超微结构和几种内含物质变化的研究[D];山东农业大学;2010年
6 于军伟;苹果α-法尼烯合成酶基因转化番茄研究[D];山东农业大学;2010年
7 王京梅;叶籽银杏叶生雌性生殖器官发育相关基因的克隆与序列分析[D];山东农业大学;2010年
8 郭梁;甜樱桃实生后代品质性状的遗传变异及远缘杂种根癌病抗性鉴定[D];山东农业大学;2010年
9 赵云霞;马铃薯L-半乳糖-1,4-内酯脱氢酶基因在番茄中的功能分析[D];山东农业大学;2010年
10 洪艳艳;黄瓜液泡膜H~+-PPase基因的cDNA克隆与表达分析[D];山东农业大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 任贵方,张一鸣,阮薇琴,杨安道,梅雅芳,平立华,杨芙蓉,王申,温晓燕,朱既明;乙型肝炎病毒表面抗原基因在中国地鼠卵巢细胞中的高效表达及纯化抗原免疫原性的研究[J];病毒学报;1987年04期
2 张玉勤;;狂犬病和轮状病毒的DNA疫苗取得进展[J];国外医学情报;1999年01期
3 周光前,Sten Hammarstrm;DNA疫苗接种的免疫学机理、优越性及安全性[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;1997年02期
4 马清钧,周建光,于秀琴,刘传暄,熊凌霜,徐永强,黄翠芬;霍乱弧菌无毒肠毒素A~-B~+基因在大肠杆菌的表达[J];中国科学(B辑 化学 生物学 农学 医学 地学);1988年05期
5 吴世宣,赵淑珍,王革娇,杨希才,张春霞,王昕,田波;由卫星互补DNA单体构建的抗黄瓜花叶病毒的烟草基因工程植株[J];中国科学(B辑 化学 生命科学 地学);1989年09期
6 陈炬,孙勇如,李向辉,曾伟强,李玉英,侯云德;人α-干扰素cDNA在转化的烟草植株中表达[J];中国科学(B辑 化学 生命科学 地学);1990年03期
7 刘玉乐,王晋芳,邱并生,赵淑珍,田波;人乙肝病毒表面抗原基因在转基因烟草中的表达[J];中国科学(B辑 化学 生命科学 地学);1993年03期
8 赵春晖,冯斌,王关林,王荣,田波;乙肝病毒表面抗原基因植物表达载体的构建[J];辽宁师范大学学报(自然科学版);1999年03期
9 欧阳权;彭海忠;李启泉;;桉树愈伤组织发生胚状体的研究[J];林业科学;1981年01期
10 颜慕勤;人工诱导油茶体细胞胚状体实验成功[J];林业科技通讯;1980年12期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 雷祚荣;金黄色葡萄球菌肠毒素的研究进展[J];微生物学免疫学进展;1986年01期
2 董邦全,李恩善,汪美先,田方,许辉,雷祚荣;金黄色葡萄球菌A型肠毒素单克隆抗体的制备[J];细胞与分子免疫学杂志;1992年02期
3 陈靖,陈叶;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测金黄色葡萄球菌肠毒素[J];中国食用菌;1999年05期
4 吴光先;来自羊和羊酪的产生肠毒素的葡萄球菌的鉴定[J];国外医学.卫生学分册;1979年06期
5 吴光先;;卵磷脂酶阳性和阴性的产气荚膜梭菌肠毒素的检出[J];国外医学.卫生学分册;1981年03期
6 植村兴;贾延库;;产气荚膜杆菌和蜡样芽胞杆菌肠毒素[J];解放军预防医学杂志;1987年04期
7 刘晓明,冯书章;大肠杆菌耐热性肠毒素(ST)的检测[J];中国人兽共患病杂志;1992年01期
8 徐艳丽,宋雨水,秦莉;肠毒素性大肠菌(ETEC)的分离与鉴定研究[J];现代预防医学;1999年04期
9 ;你是胡萝卜 是鸡蛋 还是咖啡豆[J];青少年科学探索;2004年07期
10 赵建,丁水军,陆扁,傅丹青;48株金黄色葡萄球菌的肠毒素分布及其耐药性研究[J];中国卫生检验杂志;2005年07期
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1 宋明辉;史贤明;;20种金黄色葡萄球菌肠毒素基因进化分析[A];中国食品科学技术学会第八届年会暨第六届东西方食品业高层论坛论文摘要集[C];2011年
2 王勇;陈源闽;梁艳荣;张艳萍;杜刚强;廉勇;;胡萝卜育种研究进展[A];全国蔬菜遗传育种学术讨论会论文集[C];2002年
3 尹立荣;管长志;陈磊;付任胜;;胡萝卜游离小孢子培养技术研究[A];庆祝中国园艺学会创建80周年暨第11次全国会员代表大会论文摘要集[C];2009年
4 刘敏;于志红;富晶;王彦;吕鹏;冯仲珉;孙卫兵;;金黄色葡萄球菌与肠毒素联合对白细胞水平恢复的研究[A];第七届全国肿瘤生物治疗学术会议论文集[C];2001年
5 王勇;陈源闽;梁艳荣;张艳萍;杜刚强;廉勇;;胡萝卜育种研究进展[A];2003年内蒙古自治区自然科学学术年会优秀论文集[C];2003年
6 王佩綱;彭洪福;蒋幼和;謝仰洲;肖锦腾;王成发;;营养物质与动物急性缺氧的关系 Ⅰ.胡萝卜对大白鼠急性缺氧的影响[A];中国生理科学会学术会议论文摘要汇编(营养)[C];1964年
7 郭宝元;袁蕾;王会利;李建中;;阿维菌素在北京土壤和胡萝卜中的降解行为研究[A];中国化学会第十五届全国有机分析及生物分析学术研讨会论文集[C];2009年
8 章乐怡;李毅;马雪莲;;食物中毒及食品中金黄色葡萄球菌的肠毒素及基因的研究[A];2009年卫生检验新技术学术研讨会会刊[C];2009年
9 傅行军;华泽钊;李云飞;;施压方式对胡萝卜冷冻干燥影响的实验研究[A];上海市制冷学会一九九九年学术年会论文集[C];1999年
10 项鹏宇;刘欣;刘茂荣;任贵贤;云兴福;;沙地栽培条件下胡萝卜生长特性的研究[A];2008中国设施园艺工程学术年会论文集[C];2008年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;新拨乡发展胡萝卜产业实现富民增收[N];承德日报;2007年
2 美国加州大学研究员 薛东;为胡萝卜争第一[N];保健时报;2005年
3 ;胡萝卜施肥技术[N];河北农民报;2005年
4 东海县农技推广中心 花文苏 蒋明德 赵宁桂;棉花、胡萝卜高效套种[N];江苏农业科技报;2007年
5 保定定州市农牧局 王虎;土窑贮藏胡萝卜4要点[N];河北农民报;2007年
6 张小林;如何种好胡萝卜[N];瓜果蔬菜报.农业信息周刊;2006年
7 谢雪芳;胡萝卜常规良种要注意提纯复壮[N];云南科技报;2007年
8 上蔡县大路李乡政府 付中雨;胡萝卜高产栽培技术要点[N];驻马店日报;2008年
9 胡启山;胡萝卜需肥特点与施肥技术[N];农资导报;2009年
10 本报记者 徐瑞哲;“小白菜”心犹在 “胡萝卜”根更深[N];解放日报;2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 陈书霞;ETEC定居因子CS3对胡萝卜的转化及肠毒素LTB-ST病毒表达载体的构建[D];西北农林科技大学;2003年
2 郑继平;肠毒素大肠杆菌口服多价疫苗的研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年
3 尹明安;胡萝卜(Daucus carota)抗冻蛋白基因的克隆及其对番茄(Lycopersicon esculentum)的转化[D];西北农林科技大学;2001年
4 司家钢;利用原生质体非对称融合转移胡萝卜瓣化型细胞质不育性的研究[D];中国农业科学院;2001年
5 张丽华;药用多肽基因植物表达载体的构建及其对胡萝卜和番茄的遗传转化[D];西北农林科技大学;2002年
6 郑回勇;人乳铁蛋白基因在胡萝卜(Daucus carota L.)中的表达及其功能研究[D];福建农林大学;2002年
7 Fofana Nana;[D];浙江大学;2004年
8 黄必旺;苏云金芽孢杆菌的肠毒素及其安全性研究[D];福建农林大学;2005年
9 唐俊妮;金黄色葡萄球菌耐热核酸酶相关基因的功能与特征分析[D];华中农业大学;2007年
10 姚伟;部分农药及肠毒素分子印迹聚合物制备及应用[D];中国人民解放军军事医学科学院;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 郭云云;胡萝卜天然活性物质含量变化的研究[D];石河子大学;2009年
2 张其骏;胡萝卜类胡萝卜素及其品质的研究[D];浙江大学;2002年
3 杨慧;胡萝卜、番茄对D-半乳糖致大鼠拟衰老模型影响的实验研究[D];中国医科大学;2004年
4 安岩;胡萝卜雄性不育系生理生化特性的研究[D];中国农业大学;2004年
5 陈源闽;胡萝卜雄性不育研究及利用[D];内蒙古农业大学;2004年
6 商承伟;胡萝卜(Daucus carota.L.)细胞外周糖蛋白结构及翻译后修饰的研究[D];苏州大学;2002年
7 范晓岚;胡萝卜、番茄拮抗D-半乳糖大鼠氧化损伤的实验研究[D];第三军医大学;2004年
8 曾献春;番茄、胡萝卜乳酸菌发酵饮料的研制及其发酵液对免疫功能的影响[D];新疆医科大学;2004年
9 黄贤荣;中药柴胡与胡萝卜的体细胞杂交与杂种鉴定[D];山东中医药大学;2002年
10 龙军;金黄色葡萄球菌B型肠毒素单克隆抗体的制备及初步应用研究[D];第一军医大学;2004年
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