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RAPD技术在苦瓜、辣椒一代杂种种子纯度鉴定上的应用研究

张菊平  
【摘要】: 本文分析了国内外关于分子标记鉴定蔬菜作物种子纯度的研究进展,RAPD技术以方便快捷,反应灵敏,标记数量多,所用引物没有种属限制,所需模板数量少等优点,较适合在种子纯度检测中应用。 以碧绿2号、碧绿3号两个苦瓜品种为材料,研究了含糖量较高的植物材料的DNA提取方法,采用四种CTAB法对苦瓜的基因组DNA进行提取,四种CTAB法都适合苦瓜DNA的提取,提取的DNA具有天然DNA的特性,可成功进行RAPD-PCR扩增,尤以改良CTAB法最为简便、快速,适合商业化苦瓜杂种纯度鉴定,并且建立了适合苦瓜RAPD分析的优化体系,即在25μL反应体系中,DNA模板的量为20ng,Mg~(2+)浓度为1.5mmol/L,dNTP浓度为0.2mmol/L,Taq DNA聚合酶的最适用量为1.0U。并以此优化体系为基础对碧绿3号苦瓜两个亲本的基因组DNA进行了RAPD分析,发现引物OPQ-01可在碧绿3号及其亲本的RAPD图谱中形成多态性差异,可应用于碧绿3号苦瓜种子纯度的检测,对1份种子样品进行了RAPD检测,其结果与田间种子纯度检测结果完全一致。 利用RAPD技术,通过对60个随机引物的筛选,获得能区分粤椒4号及其亲本的引物OPS-01,并得到单株验证。


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