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《西北农林科技大学》 2004年
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西农萨能奶山羊经济性状的DNA分子标记及5个山羊品种DNA多态性研究

蓝贤勇  
【摘要】:本研究采用了PCR-RFLP、PCR-SSCP、RMAPD、DNA序列分析和微卫星等标记技术分析了西农萨能奶山羊CSN1S2基因、CSN3基因、IGFBP3基因、POU1F1基因、GH基因、FSHR基因的基因座多态及其与经济性状(产奶量、产羔数、初生重、成年体重和体尺指标)的相关性,为奶山羊的改良、开发和利用提供DNA水平的理论依据;同时,还利用PCR-RFLP和PCR-SSCP方法分别检测了西农萨能奶山羊、关中奶山羊、陕南白山羊、安哥拉山羊和布尔山羊5个山羊品种共计175个个体的10个基因座的遗传多态性,为山羊品种资源保护和畜牧业的发展提供资料。本论文通过上述研究首次取得了以下结果: 西农萨能奶山羊的PCR-RFLP研究 1.1.1 CSN1S2基因:①群体等位基因F/N的频率为0.087/0.913且处于Hardy-Wenberg平衡状态;②西农萨能羊CSN1S2基因座F等位基因与高产奶量呈负相关,如FF基因型个体在平均产奶量、第二胎产奶量上显著或极显著地低于NN型个体(P0.05,P0.01);③作者首次发现CSN1S2基因对产羔数有显著影响(P 0.05),该基因的产羔效应是由与之连锁FecB基因产生的;FF、NF基因型个体第一胎产羔数较NN型多(P 0.05);在第四胎产羔数上,NN基因型个体产羔数较NF型和FF型多(P 0.01);④在初生重、体高指标上,NF、FF基因型和NN型间差异显著(P 0.05)。 1.1.2 CSN3基因:①CSN3-HaeIII基因座未发现多态性。②CSN3-HindIII和CSN3-TaqI基因位点对产奶量没有显著影响(P 0.05)。③作者第一次证实CSN3、CSN1S2等酪蛋白基因与控制羊产羔数的主效基因FecB连锁,而且它们之间遗传距离很小;CSN3-TaqI位点与FecB位点一样对产羔数有显著影响:AB和BB基因型第一、二胎产羔数均值差异显著或极显著(P 0.05和P 0.01);CSN3、CSN1S2等酪蛋白基因可作为产羔性状分子标记的有效侯选基因④CSN3基因对初生重和成年体重等指标上有显著差异(P0.05,P0.01)。 1.1.3 IGFBP3基因:①利用HaeIII、Alw26I、TaqI分析西农萨能羊IGFBP3基因多态性,结果表明均为单态。作者认为山羊IGFBP3基因第299→302位序列没有丢失酶切位点是导致了山羊未出现HaeIII酶切多态性的根本原因。②IGFBP3 WP=8 基因经酶切后表现明显的山羊、绵羊、水牛和普通牛等的物种间多态性。 1.1.4 POU1F1基因:69只西农萨能奶山羊和62只关中奶山羊POU1F1基因的HinfI酶切结果表明,在2个山羊品种种未发现多态性。 2 西农萨能羊SNP位点多态的PCR-SSCP检测及与经济性状的相关分析 ①PCR-SSCP检测表明FSHRexon10基因座无基因多态性;GHexonII基因座处于Hardy-Weinberg平衡态状态,GHexonV基因座存在BB型、AC型、AB型和BC型,处于Hardy-Weinberg非平衡态状态。②GHexonII位点与产奶量不相关(P0.05);GHexonV位点与产奶量相关,如不同基因型在第三、四、五、六、七胎产奶量和平均产奶量上存在显著差异(P 0.1,P 0.05,P 0.01)。③GHexonII基因座AB型个体第五胎产羔数显著多于BB型个体(P0.01),BB型个体第七胎产羔数优于AB型(P 0.05);GHexonV基因座BC型个体第三胎产羔数分别比AB、AC型个体多0.250只(P 0.1)。④GHexonII和GHexonV 基因位点对体尺指标没有影响(P .05)。⑤与牛杂合子类型序列进行DNA序列分析,西农萨能奶山羊FSHRexon10基因座杂合子序列第54位(A→G)的转换导致了Gln→His的氨基酸的变化。⑥经DNA序列分析表明:GHexonV基因座存在SNP位点,其分子机理是该基因座位存在11个位点的转换或者颠换等遗传变化。 微卫星标记 利用2对微卫星引物对萨能羊进行微卫星分析,结果未发现多态性。 4. RMAPD与西农萨能奶山羊经济性状的相关性研究 ①RMAPD(随机微卫星引物扩增多态DNA)标记是一种新型的分子标记。②RMAPD与西农萨能奶山羊经济性状存在一定的相关性:HEL1-2+F09标记、MFW20-1+F09、HEL1-1+F09标记对产奶、产羔性状和初生重、体高等体尺指标均有显著影响(P0.05)。 5 5山羊品种遗传多态性的PCR-RFLP检测 ①CSN1S2、CSN3-HindIII、CSN3-TaqI、CSN3-HaeIII、IGFBP3-HaeIII和β-1g等6个基因座的PCR-RFLP检测结果表明:CSN3-HaeIII和IGFBP3-HaeIII基因座未表现多态性,而CSN3-HinfI基因座的A等位基因为稀有基因仅在关中奶山羊中低频率表现;②对6个乳蛋白基因座进行数据分析,得到结果:关中奶山羊的遗传多样性最高,其次是西农萨能奶山羊,陕南白山羊和布尔山羊的遗传多态性最低; 6 5山羊品种遗传多态性的PCR-SSCP检测 WP=9 GHexonII、GHexonV 和FSHRexon10以及CSN3exonIV等4个基因座位的PCR-SSCP检测结果表明:5个山羊品种PIC均值在0.1805-0.3281之间,其中西农萨能奶山羊遗传多态性最丰富,其PIC值最高达到0.3281,其次是关中奶山羊(PIC=0.3000),最低的是安哥拉山羊和布尔山羊(PIC分别为0.1805和0.1875);
【学位授予单位】:西北农林科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:S827

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