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《西北农林科技大学》 2004年
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山羊体细胞核移植的研究

刘凤军  
【摘要】:为了优化山羊体细胞核移植体系,本论文研究了体细胞核移植操作过程中的几个影 响因素:(1)体外培养体系对山羊胚胎早期发育的影响;(2)胞质去除及CB处理对山羊 孤雌胚和核移植胚早期发育的影响;(3)供体细胞类型、重组胚构建方法及细胞冷冻对 山羊体细胞核移植胚早期发育的影响。 1.在SOFaa、CR1aa、mCR1aa三种培养液中添加不同浓度的成年山羊血清(NGS),观 察其对山羊孤雌胚胎进行体外培养的效果。结果表明,山羊孤雌胚胎在这三种培养液中, 以添加10%的NGS对早期发育效果较好,囊胚率分别可达62.79%, 53.52%, 13.64%; mCR1aa组囊胚发育率和囊胚细胞数显著低于SOFaa组和CR1aa组,SOFaa组和CR1aa组间无 显著差异,SOFaa组优于CR1aa组。 2.将MII期的卵母细胞用CB处理(试验组I)或去除部分细胞质不去核(试验组II) 或在CB处理后再去除部分胞质不去核(试验组III),以及不做任何处理(对照组),经 孤雌激活和体外培养观察发育情况。结果:试验组I、II、III以及对照组均获得了较高 的囊胚期发育率 (依次为55.50%、37.43%、39.78%、59.82%),及较高的卵裂率(分别 为72.35%、71.55%、64.87%、86.15%),但试验组I、II的分裂球不均匀的卵裂率明显高 于试验组III与对照组。 3.以乳腺细胞、胎儿成纤维细胞和颗粒细胞作为供体进行核移植,对比了细胞冷冻 及核移植的重建方法(胞质内注射、电融合)对重组胚早期发育的影响。结果:(1)乳 腺细胞支持重组胚的发育能力(囊胚率,7.14%)显著低于成纤维细胞(16.19%)和颗 粒细胞(19.01%)(P0.05),卵裂率无显著差异(P.05);(2)以上三种体细胞在冷 冻-解冻后支持重组胚发育力方面无显著差异(P0.05);(3)乳腺上皮细胞构建重组胚 的效率电融合组(69.52%)极显著高于胞质注射组(59.20%)(P0.01),囊胚发育率无 显著差异(P.05)。成纤维细胞的重组成功率、卵裂率和囊胚率在两组间均无显著差 异(P0.05)。颗粒细胞重组成功率胞质内注射组(82.17%)显著高于电融合组(50.99%) (P0.05),囊胚发育率无显著差异(P.05),胞质内注射组稍高于电融组。 结论: (1)在本实验条件下,山羊孤雌胚胎的体外培养以SOFaa为培养液,在培养的第72h 时加入10%的NGS的发育效果较好,囊胚率可达62.79%。 (2)CB处理对孤雌胚发育无影响,胞质去控制在CB结合去除1/3以内对孤雌胚的发 育影响不大,CB处理与胞质联合对山羊孤雌胚早期发育起协调作用,提高卵母细胞孤雌 胚发育力,并降低卵裂异常现象。 (3)在山羊体细胞核中,上述三种细胞支持重组胚的发育力以成纤维细胞和颗粒 细胞较好;细胞冷冻对其无显著影响;在构建重组胚方法上,乳腺细胞以电融合法为宜, 颗粒细胞是胞质内注射法优于电融合法,而成纤维细胞两种方法均可。
【学位授予单位】:西北农林科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:Q813

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