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《西北农林科技大学》 2004年
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利用转基因胡萝卜表达口蹄疫病毒结构蛋白VP1

张娅  
【摘要】:口蹄疫(foot-and-mouth disease ,FMD)是偶蹄动物一种急性、发热性、高度接 触性传染病,目前尚无一种十分有效的方法进行防治。利用转基因植物生产可以直接口 服的疫苗来防治该病具有十分广阔的前景。胡萝卜种植广泛,易于组织培养和转化,可 以生食,对人类特别是婴幼儿较为理想,是生产口服疫苗理想的“生物反应器”。本实 验以胡萝卜为转化受体,研究了口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV) 结构蛋白 VP1 基因在转基因胡萝卜中的表达情况,为进一步研究利用转基因植物生产口 服疫苗和研制防御口蹄疫的新型疫苗提供了一条新途径。 本实验选用三个胡萝卜(Daucus carota L.var.sativa)栽培品种金笋五寸、Carol 和改良黑田七寸,以它们的下胚轴和子叶为外植体,首先建立了高效的再生体系。 在此基础上,以 Carol 的下胚轴和愈伤组织为受体材料,利用根癌农杆菌 LBA4404 介导,转化质粒 pBI121,实现了外源报告基因 GUS 在胡萝卜中的瞬间表达和稳定表达。 在成功地构建了携带有 FMDV 结构蛋白 VP1 基因的植物表达载体 pBFMDV 后,利用根 癌农杆菌 LBA4404 介导,将 FMDV VP1 基因导入胡萝卜细胞中,经 PCR 和 PCR-Southern 杂交等方法的鉴定,确认 FMDV VP1 基因已整合到胡萝卜染色体中。SDS-PAGE 实验结果 初步证明了在转化苗中有目的基因的表达。Western-blotting 结果进一步确认了目的基 因在转化苗中的表达。Dot-ELISA 和 ELISA 实验证明在转化苗中表达的目的抗原可以和 抗口蹄疫病毒的抗体特异性地结合。以上实验结果证明口蹄疫病毒结构蛋白 VP1 在转基 因胡萝卜中表达成功,而且表达的目的蛋白具有活性。 本实验是第一个以胡萝卜为受体材料生产口蹄疫疫苗的研究,以上的实验结果为转 基因植物生产口蹄疫疫苗提供了新的思路和发展前景。
【学位授予单位】:西北农林科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:Q78

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