收藏本站
《西北农林科技大学》 2003年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

AEV结构蛋白基因的克隆、序列分析及在大肠杆菌中的表达

张立成  
【摘要】:根据已发表的禽脑脊髓炎病毒1143株特异性结构蛋白VP0、VP1、VP3基因序列,分别设计三对引物,利用反转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,在体外从AEVVan-Roekel株感染的SPF鸡胚胚脑和内脏器官组织中成功扩增出各结构基因片段。将其回收、纯化后,以VP0、VP1、VP3基因连接到线状克隆载体PMD18-Teasy Vector,转化JM109感受态细胞。在含氨苄青霉素的LB平板上筛选阳性克隆,扩大培养,提取质粒,经酶切和PCR鉴定,取阳性质粒用Sangers双脱氧末端终止法对核酸序列进行测定,推算其氨基酸序列;并将其与已发表的AEV 1143株相关基因以及小RNA病毒科其它病毒属在对应位置的核苷酸和氨基酸的同源性进行比较、分析。 将VP0基因克隆到原核高效表达载体PET30α,构建重组表达质粒PET30α-VP0,转化PET30α表达宿主菌BL21;经IPTG和42℃升温诱导表达,收获菌体沉淀,经菌体全细胞裂解和提取包涵体后进行SDS-PAGE和Western-blot电泳分析表明,重组质粒能在大肠杆菌中获得表达,表达产物主要以包涵体形式存在于菌体中。蛋白印迹试验检测表达蛋白分子量PET-VP0为52Ku;经薄层扫描测定,蛋白相对含量为26.3%。上述表达产物能与AEV阳性血清发生特异性反应。
【学位授予单位】:西北农林科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:S852.65

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 张淑霞,杨增岐,李金钧,赵余放,李东成,薛登民;禽脑脊髓炎琼扩抗原的研制和应用[J];动物医学进展;2001年02期
2 赵心力,郭金贵,马学恩,李润清,吉仁泰,赵振华,斯琴,苏日娜;禽脑脊髓炎琼脂扩散沉淀抗原制备与应用的研究[J];中国兽医科技;1995年02期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘爵,刘有昌,姚炜光,周蛟,崔京春,张方亮,刘尚高;禽传染性脑脊髓炎病毒的分离鉴定[J];北京农业科学;1998年01期
2 王纯洁,马学恩,赵振华;禽脑脊髓炎研究进展[J];动物医学进展;2003年02期
3 刘爵,张杰,刘有昌,张方亮,周蛟;禽脑脊髓炎病毒在BGM-70传代细胞系上培养特性的初步研究[J];华北农学报;1999年03期
4 刘丽华,马学恩,顾玉芳,赵振华;应用差速离心法提纯禽脑脊髓炎病毒及电镜观察[J];内蒙古工业大学学报(自然科学版);2005年03期
5 赵立红,陈德威,李军,秦秀慧;“全胚双氟碳法”制备禽脑脊髓炎琼扩抗原的研究[J];中国农业大学学报;2001年01期
6 王劭;胡奇林;林锋强;程晓霞;欧阳岁东;陈仕龙;;禽脑脊髓炎病毒检测技术研究进展[J];畜牧兽医科技信息;2007年02期
7 徐建生;唐波;成大荣;董国雄;王小波;;用改进的方法提纯禽脑脊髓炎病毒[J];畜牧与兽医;2005年12期
8 赵继勋,秦卓明,姚永秀,张秀美,张世栋,高峰;禽脑脊髓炎琼扩抗原的研制与应用[J];中国家禽;1997年04期
9 潘长江,杨淑芳;禽脑脊髓炎(AE)流行新特点、未来发展态势与防制对策[J];中国预防兽医学报;2000年S1期
10 孟佩俊;刘丽华;张丽萍;王嘉慧;陈富荣;何翠;赵娜;;双向凝胶电泳分析感染禽脑脊髓炎病毒鸡脑组织蛋白表达图谱[J];中国预防兽医学报;2008年02期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 赵振华;李向宇;关平原;日穆德玛;赵心力;顾玉芳;吉仁泰;吴钟灵;成子强;;禽脑脊髓炎油乳剂灭活疫苗效力检验和免疫期试验研究报告[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十一次兽医病理学、第十次动物病理生理学学术研讨会论文集[C];2001年
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 王纯洁;实验性禽脑脊髓炎分子发病学及分子免疫机理的研究[D];内蒙古农业大学;2002年
2 刘丽华;关于禽脑脊髓炎病毒内蒙分离株基因组的研究[D];内蒙古农业大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前8条
1 张淑霞;陕西省禽脑脊髓炎的调查、病毒分离鉴定及其诊断与防制研究[D];西北农林科技大学;2002年
2 徐耀辉;禽脑脊髓炎病毒河南株的分离鉴定与VP0基因的克隆与序列分析[D];河南农业大学;2002年
3 昭日格图;SPF雏鸡感染禽脑脊髓炎病毒内蒙株早期IgM与IgG变化规律的研究[D];内蒙古农业大学;2003年
4 张二芹;禽脑脊髓炎病毒Van Roekel株Vp0、Vp1、Vp3蛋白基因的克隆、表达与活性检测[D];内蒙古农业大学;2003年
5 张艳艳;禽脑脊髓炎病毒的鉴定与弱毒疫苗的研制[D];西北农林科技大学;2005年
6 王秋娟;禽脑脊髓炎病毒VP1基因的克隆、表达及其单克隆抗体的制备[D];扬州大学;2006年
7 王嘉慧;禽脑脊髓炎病毒VP1、VP3、VP0基因pcDNA4/HisMax表达载体的构建[D];内蒙古工业大学;2007年
8 郝华芳;禽脑脊髓炎病毒陕西分离株VP1基因的克隆表达及ELISA检测方法的初步建立[D];西北农林科技大学;2012年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 李云岗,张淑霞,薛登民,杨增岐,赵余放;禽脑脊髓炎的诊断及病原初步鉴定[J];中国畜禽传染病;1998年05期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 曹殿军,刘培欣,闫丽辉,孙建宏;鸡新城疫病毒强弱毒株RT-PCR鉴别诊断方法[J];中国预防兽医学报;2000年06期
2 黄兵,王莉莉,宋敏训,艾武,田夫林,梁成珠;一步法RT-PCR快速检测鸡新城疫病毒强毒株[J];山东家禽;2004年12期
3 花群义,金宁一,周晓黎,董俊,杨云庆,徐自忠;应用实时荧光定量TaqManRT-PCR检测口蹄疫病毒[J];中国兽医学报;2005年02期
4 张源淑,邹思湘;胃泌素RT-PCR方法的建立及同源性分析[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2005年09期
5 徐晔;王恒安;姚火春;邱列群;陈家华;;禽流感病毒A/Duck/Shanghai/02/99(H9)HA基因的克隆及序列分析[J];上海交通大学学报(农业科学版);2006年05期
6 高存福;秦建华;赵月兰;左玉柱;包永占;李艳琴;;牛病毒性腹泻病毒RT-PCR检测方法研究[J];中国农学通报;2007年03期
7 唐青海;乔宪凤;何维明;郑新民;华文君;刘西梅;陈果亮;马秋明;;长距离RT-PCR非特异性扩增的鉴定与排除[J];安徽农业科学;2007年15期
8 杨受保;王建明;徐胜威;;淡水育珠蚌的RNA提取与RT-PCR分析[J];水利渔业;2007年03期
9 孟继红;陈跃华;林萍;顾元国;范玲;;KCR、HCD基因在高芥酸芥菜型油菜(Brassica Juncea)生育期内的量化表达[J];新疆农业科学;2007年04期
10 李强;李磊;田志坚;邢俊杰;崔玲玲;曹孟良;;三种野生稻候选抗病基因的克隆与分析[J];分子植物育种;2007年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 陈云霞;侯韶毅;卢桂娟;陆有飞;高永锐;王成业;黄伟坚;;牛病毒性腹泻病毒RT-PCR方法的建立及应用[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集(下册)[C];2009年
2 郭巍;戴伶俐;李雪峰;闫妍;王英原;周建华;相文华;;马流感病毒多重RT-PCR检测方法的建立[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会论文集[C];2008年
3 明艳林;郑国华;陈良华;吴琦;苏勇波;;二温式RT-PCR快速检测兰花斑点病毒技术的研究[A];中国植物病理学会2010年学术年会论文集[C];2010年
4 王忠发;顾松叶;施慧;沈飚;;快速荧光定量RT-PCR定量检测对虾Taura综合症病毒(TSV)的方法建立与应用[A];2011年浙江省医学会医学病毒学分会、医学微生物与免疫学分会学术年会论文汇编[C];2011年
5 南松剑;沈志强;刘吉山;陈继春;;山东省猪繁殖与呼吸综合征的RT-PCR检测与分析[A];第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会——2005中国畜牧兽医学会学术年会论文集[C];2005年
6 栾婧婧;高运东;仲跻峰;赵宏坤;;半巢式RT-PCR快速检测犊牛轮状病毒方法的建立[A];第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会论文集(下)[C];2005年
7 孔繁德;王荣;陈琼;吴德峰;徐淑菲;;多重RT-PCR一步法技术同时检测猪瘟病毒和蓝耳病病毒方法的建立以及初步应用[A];2008年中国微生物学会学术年会论文摘要集[C];2008年
8 曾伟伟;王庆;王英英;张乐生;刘宝芹;石存斌;吴淑勤;;草鱼呼肠孤病毒三重RT-PCR检测方法的建立及其初步应用[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
9 战勇;喻德跃;;大豆花叶病毒的组织印迹与RT-PCR检测[A];江苏省遗传学会第八届会员代表大会暨学术研讨会论文集[C];2010年
10 王劭;陈少莺;陈仕龙;程晓霞;林锋强;朱小丽;江斌;李兆龙;;新型鸭呼肠孤病毒RT-PCR方法的建立与应用[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
中国重要报纸全文数据库 前8条
1 周锦帆 罗荣杰;世上无难事只要肯登攀[N];中国国门时报;2003年
2 夏树让;生物技术提升果蔬产业效益[N];中华合作时报;2003年
3 本报记者 谈琳 刘晓军;创新源于自由的空气[N];科技日报;2011年
4 姚保泰;吴敏;王博;黄连小檗碱抗胃癌机制新阐述[N];中国医药报;2005年
5 本报采访组;准是生命 快是效率[N];中国国门时报(中国出入境检验疫报);2002年
6 董敬民;国内诺沃克病毒检测方法首创成功[N];中国海洋报;2004年
7 记者 董敬民;食品中诺沃克病毒检测方法通过鉴定[N];中国国门时报;2004年
8 陈杨荣;任文英;江明;补肾清热毒方可保护肾组织[N];中国医药报;2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘丽华;关于禽脑脊髓炎病毒内蒙分离株基因组的研究[D];内蒙古农业大学;2003年
2 董秀梅;牛副流感病毒3型山东分离株致病性研究及荧光定量RT-PCR的建立[D];中国农业科学院;2012年
3 翟小龙;EZH2基因与上皮性卵巢癌相关性的研究[D];四川大学;2004年
4 李江;角蛋白降解菌Streptomyces fradiae var.k-11中蛋白酶基因的克隆及表达[D];中国农业科学院;2005年
5 宋振梅;Clusterin在食管鳞癌中表达的研究与应用[D];山东大学;2005年
6 何嘉;涎腺粘液表皮样癌的耐药相关因素及其产生机理和基因芯片的检测分析研究[D];四川大学;2004年
7 张久松;西尼罗病毒感染病原体检测方法与流行病学调查研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年
8 周美宏;hnRNPA2/B1在人非小细胞肺癌组织中的表达研究[D];四川大学;2004年
9 孙京臣;家蚕质多角体病毒RDRP的基因克隆、表达及定位研究[D];中山大学;2004年
10 温鹏飞;葡萄与葡萄酒中黄烷醇类多酚和果实原花色素合成相关酶表达规律的研究[D];中国农业大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张立成;AEV结构蛋白基因的克隆、序列分析及在大肠杆菌中的表达[D];西北农林科技大学;2003年
2 马腾;难治性癫痫患者外周血中MRP1表达的研究[D];青岛大学;2005年
3 冯旺琴;SLP-2基因在子宫内膜癌组织中的表达及其功能研究[D];青岛大学;2005年
4 段红军;人类p73基因TAp73αcDNA片段扩增及鉴定[D];江西医学院;2005年
5 陈泠;Tritordeum花粉特异性启动子的克隆与研究[D];华中科技大学;2005年
6 王世振;核因子-κB及ICAM-1mRNA在变应性鼻炎鼻粘膜中的表达及意义[D];山东大学;2006年
7 丁林灿;涎腺腺样囊性癌细胞株ACC-2和ACC-M基因差异表达的初步研究[D];福建医科大学;2006年
8 谭伟成;新城疫病毒玉林株的分离鉴定与油乳剂灭活疫苗的研制[D];南京农业大学;2007年
9 鲁晓娟;黑曲霉A-25产木聚糖酶的变温发酵研究[D];河南农业大学;2007年
10 李芸;P2Y_2受体mRNA在慢性神经痛大鼠背根神经节表达的研究[D];华中科技大学;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026