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《西北农林科技大学》 2005年
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美国花旗松组织培养及再生系统建立的研究

陆燕元  
【摘要】:美国花旗松[Pseudotsuga menziesii (Mirb.) Franco]是世界著名用材兼观赏树种。它抗逆性强,材质优良,树姿优美,是世界有名的“圣诞树”,也是美国、加拿大等国主要的造林树种。目前已经在我国的许多地区引种成功,但由于结实间期长,种子产量低,远远不能满足实际需要,而且采用扦插技术繁殖时生根特别困难,采用的材料一般要是小于十年生的枝条,这都限制了花旗松的的进一步推广繁殖。因此,进行美国花旗松离体培养和植株再生研究在理论和实践上均有重要意义。它不仅在短期内扩大繁殖现有的优质材料,为生产提供大量的优质苗木,而且为花旗松农杆菌介导的遗传转化体系、改良松树遗传品质提供了必要前提和条件。  本文以美国花旗松成熟胚和实生苗为材料,研究其组织培养技术及再生体系的建立。其主要研究结果如下:  (1)以美国花旗松成熟合子胚为外植体进行愈伤组织的诱导时,基本培养基对其有一定的影响。高盐浓度的培养基有利于愈伤组织的诱导;降低盐浓度,则会减少愈伤组织的形成量。激素在愈伤组织的诱导中起关键作用。单独使用细胞分裂素6-BA  2.0mg/L 就可以诱导出质量较好的愈伤组织,配合使用一定浓度的NAA,愈伤组织形成量增加,NAA 浓度过高,在继代中褐化严重。改良DCR+2.0mg/L6-BA+0.01 mg/L NAA 为诱导美国花旗松愈伤组织最佳的培养基组合。蔗糖对愈伤组织的诱导也有很大的作用。2%-3%浓度的蔗糖诱导效果最好。  (2)以美国花旗松成熟合子胚为外植体进行不定芽的诱导时,基本培养基和激素均有重要的影响。供试的6 种基本培养基中,改良DCR最好,WPM、SH 次之,GD 较差,MS 和N6 则不适用。单独添加2.0mg/L细胞分裂素6-BA 对不定芽的诱导效果最好。较为适宜的培养基组合为改良DCR+2.0mg/L 6-BA,诱导率可达到74%,平均增殖系数为6,最大的增殖系数可达到11。 (3)外植体的处理方式对不定芽诱导有很大的影响。预先用高浓度(50mg/L)的细胞分裂素6-BA 进行浸泡处理,胚的萌发率及诱导率都较低,污染率也很高,但通过此方式却可以获得少量不经愈伤组织而直接分化出的不定芽。而直接接种到诱导芽培养基的成熟胚只能从愈伤组织中分化出不定芽。  (4)以带子叶顶芽为外植体建立美国花旗松组织培养的再生体系相对较难。在最适合带子叶顶芽不定芽诱导的培养基组合改良DCR+3.0mg/L 6-BA 中,带子叶顶芽的无菌苗和实生苗不定芽的诱导率都较低。而在两者中以实生苗最低,诱导率只有22.6%,分化系数为3.6, 无菌苗可达到42.8%,分化系数为3.8。 
【学位授予单位】:西北农林科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:S791.161

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