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大白菜温度敏感细胞质雄性不育系同工酶分析

张少丽  
【摘要】:本实验通过对大白菜细胞质雄性不育系CMS3411-7,CMS7311 及其保持系的同工酶进行了比较研究分析,为探究其温敏型雄性不育和育性转化的内在机理提供必要的线索。  论文分别对两套不育系及相应的保持系6 叶苗期叶片和根、花期花蕾的POD(过氧化物)同工酶、EST(酯酶)同工酶、ATPase( 腺苷三磷酸酶)同工酶、AMY(淀粉酶)同工酶进行了垂直不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。对经9℃左右低温诱导、3000lux 光照条件下生长的CMS7311 育性转化(不育变可育)及回复(育性又由可育转变成处理前的不育态)整个过程进行了连续取样及花器育性观察 ,追踪β-EST同工酶随雄蕊育性转化的动态变化过程。并进一步对与雄蕊育性密切相关的特异酶带进行了回收、测序。取得了以下主要结果:  1 通过对不育系CMS3411-7、CMS7311 及其保持系不同器官多种同工酶的比较研究,认为花蕾的酯酶同工酶与大白菜雄蕊的育性表达及转化有密切关系。 2 初步发现大白菜小花蕾中Rf为0.718、0.742 的β-EST同工酶酶带的消失与CMS7311 和CMS3411-7 雄性不育性关系密切。 3 首次发现小花蕾(小于1.5mm)中Rf 为0.759 的β-EST 同工酶酶带的出现与温度敏感不育系的育性转化关系十分密切。 4 通过SDS 分析发现,Rf 为0.718、0.742 和0.759 的EST 同工酶分子量均为14KD 的蛋白质,初步判断它们可能有相似的核心亚基结构。 5 建立了适合大白菜同工酶回收的简便方法,用电洗脱法对凝胶中的酯酶进行回收时,凝胶不能预先染色。应于电泳完毕后切取胶两边各0.5cm 的胶条进行染色,染色完毕将染色胶条放回原来位置,以指示目的条带的位置,然后切取目的条带,进行电洗脱回收。


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