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《西北农林科技大学》 2005年
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朱鹮消化道正常菌群的分离鉴定及微生态制剂的研究

史怀平  
【摘要】:无菌采集健康朱鹮的新鲜粪便,分别接种于普通肉汤和厌氧肉肝汤内,37 ℃培养24~48 h。将液体培养物稀释到同一梯度,定量接种于固体培养基上(绵羊血琼脂平板和特殊培养基),分别进行需氧和厌氧培养24~48 h。根据培养基上的不同类细菌进行划线分离挑纯,直到分离出纯培养物,并且进行显微镜观察,初步确定了G~+ 芽胞杆菌、G~+ 无芽胞杆菌、G+ 球菌及G- 杆菌。然后分别对纯培养物进行生化试验,包括需氧性鉴定、淀粉液化能力、MR 与VP、O/F 测定、接触酶试验、明胶试验、硝酸盐还原试验、吲哚试验、糖醇发酵试验、丙二酸盐和柠檬酸盐利用试验、苯丙氨酸试验、运动性监测、嗜盐性试验、耐酸性试验等,结果从朱鹮粪便中分离鉴定了22 种细菌,依次为两歧双歧杆菌、最小双歧杆菌、口乳杆菌、短乳杆菌、面包乳杆菌、马里乳杆菌、瑞士乳杆菌、嗜酸乳杆菌、丙酸丙酸杆菌、蜡状芽胞杆菌、环状芽胞杆菌、凝结芽胞杆菌、泛酸芽胞杆菌、粪肠球菌、类肠膜明串球菌、少酸链球菌、肠膜链球菌、乳链球菌、克雷伯菌属、柠檬酸菌属、变形菌属和粪拟杆菌。对其中的9 种乳酸菌进行抑制大肠杆菌试验,发现两歧双歧杆菌、最小双歧杆菌、马里乳杆菌、瑞士乳杆菌及乳酸链球菌对大肠杆菌有明显的抑制作用,其中最小双歧杆菌抑菌效果最好,可适合选做微生态制剂的菌种。在定性试验中,48 h后最小双歧杆菌对大肠杆菌出现明显的抑制现象;在定量试验中,最小双歧杆菌代谢物对大肠杆菌抑制趋势一直递增,大肠杆菌原初浓度为2.25×10~8  cfu/ ml,在36 h后大肠杆菌浓度低于5×10~5  cfu/ ml。通过对所有分离菌株进行动物致病性试验,结果表明环状芽胞杆菌、泛酸芽胞杆菌和一株未定球菌对动物有致病性,其他分离菌对动物无明显的致病性。 选择增殖培养基培养最小双歧杆菌和两歧双歧杆菌,确定改良肉汤是朱鹮双歧杆菌良好的培养基。药敏试验中两歧双歧杆菌和最小双歧杆菌均对头胞唑啉、红霉素、链霉素、四环素、丁胺卡那霉素和卡那霉素敏感,对青霉素和氨苄青霉素等具有耐药性。另外,对两歧双歧杆菌和最小双歧杆菌进行了耐温驯化,结果表明两株朱鹮双歧杆菌在牛乳培养基中增殖很快,凝乳时间随温度上升明显缩短,在42 ℃时凝乳时间缩短至3~ 5 h。  在制作微生态制剂时,本试验选用最小双歧杆菌作为菌种,改良肉汤为增殖培养基,海藻酸钠作为胶囊化载体,玉米淀粉作为保护剂。通过增殖培养最小双歧杆菌,菌液离心,浓度测定,在超净工作台上制备出了微胶囊。微胶囊棕褐色,颗粒状,直径在0.5~1.0mm。通过质量检测结果表明,该微胶囊包埋效率为64.05%,包埋产率为50.6%,活菌数达到8.6×1011  cfu/ g;能抵抗胃酸;在人工肠液中肠溶性很好,45 min 基本全部溶解,释放细菌几率为94.5%;贮存稳定性良好,在4 ℃冰箱中保存90 d 后测定,
【学位授予单位】:西北农林科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:S852.6

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【引证文献】
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