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《西北农林科技大学》 2005年
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肉苁蓉组织培养及毛状根诱导的初步研究

徐亮胜  
【摘要】:肉苁蓉(Cistanche deserticols Ma)为列当科肉苁蓉属植物。其主要活性成分为苯乙醇甙类化合物。为解决肉苁蓉资源匮乏,满足人们需求,本文开展了利用肉苁蓉细胞培养技术生产苯乙醇甙类化合物的可行性研究,以及对肉苁蓉悬浮培养体系中苯乙醇甙合成的调控研究,并对肉苁蓉毛状根的培养进行了初步研究。 利用细胞团克隆法筛选出稳定的肉苁蓉高产愈伤组织,培养基配方为B5+CH(500mg/L)+IAA(2 mg/L)+BA(1 mg/L),生长周期为25d,干重达到13.2g/L,其苯乙醇甙含量达到干重的12.9%。HPLC 检测结果表明其苯乙醇甙类化合物各成分与野生中一致,均有所提高。 建立了肉苁蓉细胞悬浮培养体系,培养基配方为MS+GA3 (10mg/L)+BA(0.5mg/L) +CH( 800 mg/L),生长周期为36d,生长曲线呈“S 型”。干重达到15.4g/L,其苯乙醇甙含量达到干重的2.4%,与野生中含量几乎相等。HPLC 检测结果表明其主要成分较野生肉苁蓉复杂。 两种非生物诱导子茉莉酸甲酯和水杨酸都能诱导肉苁蓉悬浮培养细胞苯乙醇甙的生物合成。诱导子的作用效果与诱导子的浓度和添加时间有关。与未经诱导子处理的细胞培养结果相比,MJ 在对数生长初期(培养14d),添加浓度为5μmol/L 条件下,对细胞干重无抑制作用,可使肉苁蓉悬浮细胞系中PeG 含量提高2.59 倍;而SA 在对数生长后期(培养28d),添加浓度为50μmol/L 条件下,对细胞干重有抑制作用,但可使PeG含量提高2.71 倍。经两种诱导子处理的肉苁蓉细胞中,PAL 酶活性均明显增强。 利用发根农杆菌感染肉苁蓉愈伤组织,诱导出了毛状根,但其诱导率低,且生长慢,无分支。PCR 检测结果表明,此毛状根是由TL-DNA 转化所产生。本试验表明,利用毛状根技术生产肉苁蓉中苯乙醇甙类化合物,还需进一步探讨。
【学位授予单位】:西北农林科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:S567.239

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