收藏本站
《西北农林科技大学》 2005年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

小鼠体细胞克隆胚的ES细胞研究

曹鸿国  
【摘要】:体细胞核移植同ES 细胞研究与组织工程相结合,诞生治疗性克隆的新疗法,修复人体病变的组织或器官,不仅可以解决移植物与受体间的免疫排斥反应问题,还可以解决移植物的来源问题。本次研究通过对体细胞核移植克隆胚适宜构建条件、激活方法、不同供体细胞在体细胞核移植中的应用、ES 细胞的适宜分离方法、克隆胚ES 细胞的分离培养、诱导分化等进行系列研究,为人类治疗性克隆的临床应用积累知识和经验。 1、小鼠卵母细胞经乙醇和氯化锶激活同小鼠输卵管上皮细胞饲养层共培养,胚胎发育较为一致,卵裂均匀;小鼠孤雌胚的激活率乙醇加饲养层组最高97.15 %;小鼠孤雌胚的2-细胞率乙醇加饲养层组最高93.14 %;小鼠孤雌胚的桑椹胚率乙醇加饲养层组最高80.38 %;小鼠孤雌胚的囊胚率氯化锶加饲养层组最高76.21 %;孤雌胚的ICM 孵出率氯化锶加饲养层组最高75.28 %;孤雌胚ES 细胞孵出率氯化锶加饲养层组最高29.21 %,同乙醇加饲养层组、氯化锶组之间差异极显著(p0.01)。表明氯化锶激活的昆明小鼠孤雌胚体外具有较强的发育能力。 2、LIF 和大鼠心肌条件培养基在小鼠ES 细胞分离培养过程中,昆明小鼠ICM 孵出率心肌条件培养基为76.30 %,LIF 条件液为59.35 %,两者差异极显著(p0.01); LIF条件液比心肌条件培养基能较早地分离出小鼠ICM,平均时间差为11.2 h;ES 细胞集落培养48 h时周边出现分化现象的集落所占比例在心肌条件培养基中为51.55 %, LIF条件液中为31.69 %, 两者差异极显著(p0.01);第5 代小鼠ES 细胞核型正常率在心肌细胞条件培养基中为78.60 %,稍高于LIF 条件液中的76.00 %。表明大鼠心肌条件培养基较LIF 条件液更能成功分离培养昆明小鼠ES 细胞。 3、小鼠在注射hCG 后14~16 h 间进行去核,去核成功率最高80.09 %;注射hCG后的20~22 h 间去核的卵母细胞,重构胚激活率最高85.14 %;注射hCG 后14~16 h去核重构胚囊胚率最高13.94 %,同16~18 h 间的差异显著(p 0.05),同18~20 h、20~22 h 间的差异极显著(p 0.01)。表明小鼠卵母细胞适宜在注射hCG 后14~16 h 间进行去核。 4、小鼠卵丘细胞核移植重构胚氯化锶加饲养层组325 枚,195 枚发育到2-细胞阶段,71 枚发育到桑椹胚阶段,38 枚发育到囊胚阶段,9 枚重构囊胚分离出ES 细胞,5枚囊胚分离的ES 细胞集落可稳定传代;分离出ES 细胞集落呈鸟巢状突起,生长旺盛的ES 细胞集落周围可见到分化的上皮样或梭形细胞;ES 细胞碱性磷酸酶染色强阳性;体外形成类胚体。核移植重构胚氯化锶组289 枚,162 枚重构胚发育到2-细胞阶段,10
【学位授予单位】:西北农林科技大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:Q813

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 廛洪武,李荣凤,旭日干;提高牛体外受精核移植胚胎发育率的研究[J];动物学杂志;1995年06期
2 周琪,谭景和,贺桂馨,张秋明,刘瑞祥;家兔胚胎细胞核移植的研究[J];东北农业大学学报;1995年03期
3 秦茂林,蔡文琴,姚忠祥;昆明种系小鼠胚胎干细胞的分离培养及特性鉴定[J];第三军医大学学报;2001年09期
4 周德山,蔡文琴;干细胞基础与应用研究的一些进展[J];第三军医大学学报;2003年01期
5 肖丽,宋关斌;干细胞的研究现状及应用前景[J];国外医学.生物医学工程分册;2003年03期
6 顾霞;干细胞、肿瘤干细胞与造血系统肿瘤[J];国外医学(肿瘤学分册);2003年04期
7 钱海燕,李庚山,徐红新,吕菁君,蒋雯,王晶;诱导胚胎干细胞分化为心肌细胞的实验研究[J];武汉大学学报(医学版);2004年04期
8 徐忠烨;胚胎干细胞及其在神经疾病治疗中的应用[J];神经疾病与精神卫生;2003年02期
9 陈大元,孙青原,刘冀珑,李光鹏,廉莉,王敏康,韩之明,宋祥芬,李劲松,孙强,陈玉村,张亚平,丁波;大熊猫供核体细胞在兔卵胞质中可去分化而支持早期重构胚发育[J];中国科学C辑:生命科学;1999年03期
10 郭继彤,李煜,安志兴,李雪峰,李裕强,郭泽坤,张涌;成年耳细胞克隆山羊(Capra hircus)[J];中国科学(C辑:生命科学);2002年01期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 常万存,窦忠英,仲跻峰,宋杰,刘文浩,张蓉;胚胎干细胞研究进展与应用价值[J];山东农业科学;1999年05期
2 李松,窦忠英,华进联,屈雷,苗增民;哺乳动物胚胎干细胞相关细胞因子研究进展[J];山东农业科学;2000年06期
3 韩伟;陶勇;章美玲;方俊顺;刘建明;邱志芳;张锐;陈华;朱必龙;章孝荣;;表皮生长因子、成熟时间和牛卵泡液对山羊卵母细胞体外成熟的影响[J];安徽农学通报;2006年05期
4 杨丽芬;王清华;韩芬霞;项智锋;张晓建;;哺乳动物胚胎干细胞分离与培养的研究进展[J];安徽农业科学;2006年12期
5 孙志宏;邱瑞;李延清;周茂林;;哺乳动物核移植研究[J];安徽农业科学;2008年07期
6 王轶敏;王新庄;李金辉;李义书;冯勋伟;;不同培养系统和传代方法对昆明白小鼠原始生殖细胞分离培养的影响[J];安徽农业科学;2008年12期
7 杨素芳;崔奎青;陈华海;韦精卫;韦兰锋;石德顺;;兔皮肤成纤维细胞的体外培养和NESTED-PCR支原体污染检测[J];安徽农业科学;2008年13期
8 刘萍;王海飞;汪劲能;陆艳凤;赵西彪;丁家桐;;Kiss-1基因在猪初情期下丘脑-垂体-卵巢轴中的定位研究[J];安徽农业科学;2008年15期
9 董社琴;李冰雯;;对节白蜡愈伤组织诱导的研究[J];安徽农业科学;2008年26期
10 廖清华;赵广伟;何若钢;潘天彪;李孟军;赵彦玲;;动物异种核移植的研究进展[J];安徽农业科学;2008年30期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王治国;袁耀明;;乳腺上皮细胞体外培养的研究进展[A];第三届中国奶牛发展大会论文集[C];2008年
2 王滇;张春燕;刘松柏;杨利国;;不同化学激活剂对牛卵丘细胞重构胚发育的影响[A];中国奶业协会年会论文集2008(上册)[C];2008年
3 郭勇;张西正;魏严;张永红;;新生大鼠心肌细胞的体外培养和工程化心肌组织的初步构建[A];第八届全国生物力学学术会议论文集[C];2006年
4 严泉剑;李六金;;核移植的现在和未来[A];中国实验动物学会青年科技协会第二届学术研讨会论文汇编[C];2001年
5 徐小明;窦忠英;华进联;葛秀国;;免疫外科法分离克隆BALB/c小鼠胚胎干细胞[A];中国实验动物学会第六届学术年会论文集[C];2004年
6 辛晓玲;徐照学;金仁桃;程立子;李彬;;以兔卵母细胞为核受体的牛体细胞克隆[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
7 敬晓棋;雷安民;窦忠英;;核移植胚胎核仁超微结构变化[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
8 李彦欣;李宁;;哺乳动物种克隆的研究进展[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
9 李裕强;张涌;;我国动物胚胎工程技术的产业化战略分析[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
10 黄雅娟;柏学进;李建栋;程明;;牛ntES细胞核在MetaphaseⅡ去核卵中重排及其核移植融合卵的发育[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 殷慧群;猪诱导性多潜能干细胞的建立[D];安徽农业大学;2010年
2 邵凌健;槐糖脂补料发酵及抗真菌、抗肿瘤活性的研究[D];山东大学;2010年
3 林源吉;K562及其耐药株K562/A02细胞膜蛋白与耐药机理的研究[D];浙江大学;2010年
4 吴月红;诱导新生狨猴皮肤成纤维细胞来源的多潜能干细胞的研究[D];西北农林科技大学;2010年
5 杜瑞平;t10,c12-CLA对猪皮下和背最长肌脂肪沉积的差异性调控机理研究[D];内蒙古农业大学;2010年
6 李东杰;人脐带间充质干细胞促进创面愈合及体外诱导分化为表皮样细胞的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
7 胡淑婷;慢性心衰大鼠心肌细胞钙调控异常及药物干预的研究[D];第二军医大学;2011年
8 袁烁;化瘀消癥杀胚法对输卵管妊娠影响的临床与实验研究[D];广州中医药大学;2011年
9 梁洋;蜘蛛拖丝蛋白基因Spidroin1嵌合体小鼠的研究[D];东北林业大学;2011年
10 彭彬;人参皂苷Rg1延缓神经干细胞衰老作用及机理研究[D];重庆医科大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 田振华;伴与不伴脂肪细胞共培养状态下IL-6对人单核/巨噬细胞增殖和功能的影响[D];南京医科大学;2009年
2 宋晓娣;笋用竹的组织培养研究[D];中南林业科技大学;2009年
3 刘建民;“复瓣玫瑰红”蔷薇的快繁技术研究[D];山东农业大学;2010年
4 何淑玲;红芪高产配套栽培技术试验研究[D];甘肃农业大学;2010年
5 王云丹;阳和汤体外对成骨细胞的增殖作用及对破骨细胞的分化影响[D];湖南中医药大学;2010年
6 李永忠;壮骨镇痛胶囊含药和血浆对共育体系中破骨细胞活性及凋亡的影响的实验研究[D];湖南中医药大学;2010年
7 鲍腾飞;铁皮石斛组织快繁及生物反应器培养研究[D];浙江农林大学;2010年
8 郭雪阳;两种星鲽组织细胞系的建立及三丁基氧化锡对其毒性作用的研究[D];中国海洋大学;2010年
9 李文峰;大菱鲆(Scophthalmus maximus)体细胞培养及其在病毒研究中的应用[D];中国海洋大学;2010年
10 敏云馨;藏獒三种组织成纤维细胞系的构建及生物学研究[D];西北民族大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 童第周,叶毓芬,陆德裕,童夙明,杜淼;鱼类不同亚科间的细胞核移植[J];动物学报;1973年03期
2 陈大元,赵学坤,陈林,冯文和,叶志勇;大熊猫卵巢的滤泡闭锁和囊肿的研究[J];动物学报;1988年03期
3 陈大元,石其贤,宋祥芬,赵学坤,段崇文,何光昕,叶志勇,张安居,冯文和;大熊猫与金黄地鼠体外异种受精的研究[J];动物学报;1989年04期
4 张守全,孙拓;昆明白小鼠1细胞胚胎体外培养系统的研究[J];动物学报;1995年04期
5 王敏康,张田,王晓燕,廉莉,李劲松,陈大元;几种克服昆明小鼠 2- 细胞胚胎发育阻滞的培养液研究[J];动物学报;2000年01期
6 王敏康,张田,刘冀珑,陈大元;一种改进的胚胎吸管[J];动物学杂志;1999年06期
7 胡新立,尚克刚;6个小鼠ES细胞系的建立和鉴定[J];北京大学学报(自然科学版);1996年02期
8 韩嵘,汤富酬,尚克刚;小鼠ES细胞可在体外诱导分化为神经元样细胞[J];北京大学学报(自然科学版);2002年02期
9 张涌,王建辰,钱菊汾,郝志明;山羊卵核移植的研究[J];国外畜牧学(草食家畜);1992年S1期
10 周琪,谭景和,贺桂馨,张秋明,刘瑞祥;家兔胚胎细胞核移植的研究[J];东北农业大学学报;1995年03期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 肖文伍,付新巧,张苏明;体细胞核移植的研究进展[J];动物学杂志;2004年02期
2 胡艳秋;李文蓉;罗淑萍;;供核细胞对体细胞核移植效率的影响[J];生物技术;2006年03期
3 张德福;吴华莉;刘东;陈学进;陈莹;王凯;;猪体细胞核移植重构胚发育异常及印迹基因表达特征研究的进展[J];广西农业生物科学;2006年S1期
4 刘忠华;田江天;郑重;王振坤;宋军;尹智;高力;马海鹍;孔庆然;孙爽;李玉田;王洪斌;;体细胞核移植克隆民猪:培养液对卵母细胞成熟及胚胎发育的影响[J];中国科学(C辑:生命科学);2007年06期
5 邓守龙;刘晓;曹文广;王安江;;体细胞核移植生产转基因牛胚胎的研究[J];黑龙江畜牧兽医;2008年12期
6 舒金辉;陶锋;张波;;体细胞核移植表观遗传的研究进展[J];中国比较医学杂志;2008年08期
7 郭淑华;;小鼠体细胞核移植研究进展[J];安徽农业科学;2008年28期
8 杨利军;李煜;;无透明带体细胞核移植研究进展[J];中国畜牧兽医;2009年03期
9 覃敏;莫曾南;何敏;李慕军;杨小丽;江莉;;不同核移植方法对小鼠体细胞核移植效率的影响[J];广西医科大学学报;2009年02期
10 杨素芳;陈自洪;谢英;王健;韦精卫;石德顺;;反向核移植在水牛体细胞核移植中的初步研究[J];中国兽医学报;2010年09期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 朱德生;谢松涛;杨贵忠;李华;冯秀亮;刘水冰;;注核方法对大鼠-小鼠种间体细胞核移植重组胚发育的影响[A];中国实验动物学会第六届学术年会论文集[C];2004年
2 雷安民;高志敏;杨春荣;窦忠英;;牛体细胞核移植的研究[A];中国生物工程学会第三次全国会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2001年
3 陈德洋;杨丽华;许贻索;邢华;;体细胞核移植中供体细胞周期同步化的研究[A];全国动物生理生化第十二次学术交流会论文摘要汇编[C];2012年
4 徐小明;窦忠英;杨春荣;雷安民;;猪体细胞核移植研究进展及面临的挑战(英文)[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
5 张文昌;高云;王晶;;猪体细胞核移植技术的研究进展[A];福建省科协第八届学术年会分会场“转变饲养方式,促进海西畜牧业和谐发展”学术年会论文集[C];2008年
6 颜昊;严忠海;马晴雯;焦飞;黄淑帧;曾凡一;曾溢滔;;供体细胞-受体细胞线粒体DNA相容性对牛异亚种体细胞核移植效率的影响[A];遗传学与社会可持续发展——2010中国青年遗传学家论坛论文摘要汇编[C];2010年
7 覃敏;莫曾南;何敏;;体细胞核移植囊胚的微卫星DNA鉴定[A];第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2008年
8 温兵强;李俊杰;胡媛媛;祁昕;蔡文涛;常庆玲;田树军;孙树春;金东航;李铁栓;;Scriptaid对绵羊体细胞核移植胚胎发育的影响[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十六届学术研讨会论文集[C];2012年
9 徐静;王梁;田秀芝;史文清;王维;高超;张璐;汪锋;史建民;卓志勇;赵广华;张运海;刘国世;;梅花鹿体细胞核移植[A];2010中国鹿业进展[C];2010年
10 徐静;王梁;田秀芝;史文清;王维;高超;张璐;汪锋;史建民;赵广华;张运海;刘国世;;梅花鹿体细胞核移植试验[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(上册)[C];2010年
中国重要报纸全文数据库 前7条
1 邰举;韩严禁人与动物间体细胞核移植实验[N];科技日报;2007年
2 本报记者 江世亮;“英国实验回避了伦理争论”[N];文汇报;2008年
3 本报记者 金姝 李泳沩;“织女”诞生记[N];吉林日报;2011年
4 ;更简便的克隆手段[N];人民日报;2002年
5 记者 毛磊;“克隆”一词别滥用[N];新华每日电讯;2002年
6 ;中国首例异种克隆北山羊诞生记[N];大众科技报;2004年
7 ;发现完好骨髓,猛犸象有望“复活”[N];新华每日电讯;2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 彭新荣;提高牛体细胞核移植效率的研究[D];西北农林科技大学;2008年
2 覃敏;体细胞核移植胚胎和皮肤成纤维细胞来源干细胞的相关技术研究[D];广西医科大学;2009年
3 赵高平;马体细胞核移植的研究[D];内蒙古农业大学;2011年
4 张刚;小鼠胚胎细胞和体细胞核移植及原核置换研究[D];山东师范大学;2005年
5 王凌燕;金黄地鼠体细胞核移植及相关问题的研究[D];吉林大学;2009年
6 郇延军;表观遗传修饰状态与猪体细胞核移植胚胎发育潜能研究[D];东北农业大学;2012年
7 华松;体细胞核移植及线粒体命运的研究[D];西北农林科技大学;2007年
8 黄雅琼;猪体细胞核移植相关技术研究[D];广西大学;2008年
9 杨素芳;水牛卵母细胞孤雌激活与体细胞核移植的研究[D];广西大学;2002年
10 赵晓娥;转人t-PA指形区缺失突变体基因山羊体细胞核移植研究[D];西北农林科技大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 吕培茹;巴马小型猪体细胞核移植和食蟹猴—猪异种体细胞核移植相关问题的初步研究[D];广西大学;2008年
2 严兴荣;昆白小鼠体细胞核移植[D];西北农林科技大学;2005年
3 赵磊文;提高牛体细胞核移植效率的研究[D];上海交通大学;2007年
4 刘志春;黑熊—家猫种间体细胞核移植研究[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
5 蒋晓明;小鼠体细胞核移植方法的研究[D];南京农业大学;2004年
6 刘凤军;山羊体细胞核移植的研究[D];西北农林科技大学;2004年
7 王春雨;人—山羊异种体细胞核移植重组胚的构建[D];第四军医大学;2006年
8 张玉影;小鼠和兔种间体细胞核移植研究[D];华南师范大学;2007年
9 杨利军;牛体细胞核移植方法的研究[D];内蒙古大学;2009年
10 王利勤;小鼠—猪种间体细胞核移植研究[D];南京农业大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026