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《西北农林科技大学》 2005年
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梨离体再生和遗传转化的研究

徐凌飞  
【摘要】:本研究以砀山酥梨(P.bretschnrideri Rehd.)、八月红梨(P.communis L.X P.bretschnrideri Rehd.)等多个栽培品种为试验材料,通过对影响叶片、叶柄和节间茎段离体再生不定芽以及根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的遗传转化的若干因素的研究,建立起不同外植体水平的梨再生体系以及遗传转化体系。利用几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶双价基因进行了遗传转化,分子生物学分析证明,几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶双价基因已经整合到转化植株基因组中,获得了八月红梨和砀山酥梨2个品种的转基因植株。 主要研究结果如下: 1.试验从砀山酥、八月红等5个梨品种叶片诱导出不定芽,其中砀山酥、八月红、早酥梨等品种叶片再生不定芽为首次获得,建立起八月红、水晶和砀山酥梨等品种叶片高效再生体系。 试验系统地研究了影响梨叶片再生不定芽的多种因子的效应,建立起叶片高效再生体系。在最佳条件下,八月红、水晶和砀山酥梨的再生频率分别100%、77.8%和83.3%,平均再生芽数分别为5.78、3.17和1.58。 不同品种叶片再生效率不同,基因型是影响叶片再生能力的关键因子,八月红梨叶片再生能力高于其它品种。基本培养基类型对叶片再生有重要影响,NN69培养基适宜于梨叶片再生。采用试管苗顶部幼嫩叶片为外植体,叶片接种时叶片远轴面向下接触培养基,培养基附加40g·L~(-1)蔗糖,培养基pH值为5.6,接种后暗培养20d等可显著地提高叶片再生频率。植物激素种类组成和浓度配比是影响梨叶片离体再生的最关键因子之一,不同梨品种叶片高频率再生需要不同的激素种类组合和浓度配比。TDZ适宜八月红和水晶梨叶片再生,6-BA适宜砀山酥梨和红茄梨叶片再生,ZT和KT不适宜梨叶片再生。生长素种类对梨叶片再生不定芽有显著影响。IBA适宜于八月红梨叶片再生,IAA适宜于水晶梨叶片再生。培养基附加0.5mg·L~(-1) AgNO_3 可显著地提高八月红梨叶片再生频率。 基木培养基类型和6-BA浓度是影响砀山酥梨叶片再生芽增殖的主要因素,适宜的增殖培养基为MS+6-BA 1.0 mg·L~(-1)+IBA 0.2 mg·L~(-1)。 利用正交试验设计研究了基本培养基、吲哚丁酸、茶乙酸、蔗糖、暗培养时间等5个因素对砀山酥、八月红梨叶片再生苗生根的影响。结果表明,砀同酥梨叶片再生苗生根的适宜组合为1/4MS+0.5 mg·L~(-1) IBA+ sucrose 20 g·L~(-1),暗培养5d。八月红梨叶片再生苗生根的适宜组合为1/4MS+0.3 mg·L~(-1) IBA+ sucrose 30 g·L~(-1),暗培养7d。 2.梨叶柄再生困难,试验首次从八月红和水晶梨叶柄诱导出不定芽。 植物激素对梨叶柄再生有重要影响。细胞分裂素TDZ适宜于叶柄再生,ZT对叶柄再生没有作用,TDZ与生长素IBA、IAA和NAA的不同组合,可明显影响叶柄再生效率。培养基附加AgNO_3
【学位授予单位】:西北农林科技大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:S661.2

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【引证文献】
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1 赵鑫;优质蓝莓转LEA基因及耐寒性分析研究[D];东北林业大学;2011年
2 何丽斯;茉莉(Jasminum sambac L.)对低温胁迫的生理响应及离体快繁研究[D];南京农业大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前4条
1 雷莎;根癌农杆菌介导不育基因转化枫香以及美国枫香再生体系的建立[D];华中农业大学;2011年
2 杨丽辉;农杆菌介导的HAL1基因转化紫花苜蓿的研究[D];西北农林科技大学;2008年
3 宗长玲;长白山笃斯越桔组培快繁、植株再生及耐弱碱突变体的筛选[D];延边大学;2012年
4 李文剑;苹果梨离体叶片再生体系的建立[D];延边大学;2012年
【共引文献】
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1 孙清荣,樊圣华,刘庆忠;大鸭梨叶片高频率不定梢再生诱导研究[J];山东农业科学;2003年02期
2 李林光,孙清荣,贺桂香;苹果离体叶片~(60)Co-γ射线辐射对不定梢再生及芽生长的影响[J];山东农业科学;2004年03期
3 韩琳娜,崔德才;β-1,3-葡聚糖酶及其抗病机制与应用研究进展[J];山东农业科学;2004年04期
4 邢瑞丹;刘庆忠;陈新;李亚东;;两个蓝莓品种离体叶片不定芽再生体系的建立[J];山东农业科学;2009年05期
5 刘静;张元湖;刘庆忠;高玉娇;;抗生素对青香蕉苹果叶片再生的影响[J];山东农业科学;2009年07期
6 平秀敏;田敏;李纪元;段红平;;红星凤梨组织培养与快速繁殖[J];安徽农学通报;2008年23期
7 高艳梅;翟金玲;徐远峰;黄惜;;抗PRSV转基因番木瓜研究进展[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年03期
8 孙磊;张启翔;;地被菊‘北林黄’再生体系的建立及其抗生素敏感性研究[J];安徽农业科学;2006年19期
9 刘淑芳;贺永明;;梨遗传转化研究进展[J];安徽农业科学;2007年09期
10 张振霞;郑玉忠;;番荔枝组织培养初步研究[J];安徽农业科学;2007年14期
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1 杨志武;王永清;刘娟;严娟;陶炼;杜奎;;根癌农杆菌介导的枇杷花药胚遗传转化体系研究[A];第五届全国枇杷学术研讨会论文(摘要)集[C];2011年
2 王瑛;;离体培养技术在果树种质资源研究中的应用[A];中国科学技术协会第二届青年学术年会园艺学论文集[C];1995年
3 刘庆忠;赵红军;孙玉刚;孙清荣;F.A.Hammerschlag;;苹果白化茎段外植体的离体再生和基因转化[A];中国园艺学会成立70周年纪念优秀论文选编[C];1999年
4 黄文江;刘庆忠;;果树作物叶片再生的研究进展[A];植物组织培养与脱毒快繁技术——全国植物组培、脱毒快繁及工厂化生产技术学术研讨会论文集[C];2001年
5 孙清荣;孙洪雁;刘庆忠;;金花梨试管苗快速繁殖研究与开发[A];植物组织培养与脱毒快繁技术——全国植物组培、脱毒快繁及工厂化生产技术学术研讨会论文集[C];2001年
6 韩建明;侯喜林;;黄瓜遗传育种研究进展[A];全国蔬菜遗传育种学术讨论会论文集[C];2002年
7 张燕;吴国良;丁春刚;;核桃生物技术研究进展[A];第三届全国干果生产与科研进展学术研讨会论文集[C];2003年
8 梁东;马锋旺;夏惠;;果树基因工程研究进展[A];中国园艺学会第六届青年学术讨论会论文集[C];2004年
9 刘德兵;魏军亚;秦岭;范崇辉;李绍鹏;;转基因技术在果树抗病育种中的应用[A];中国园艺学会第六届青年学术讨论会论文集[C];2004年
10 张丽;王国英;张玉星;贾志国;;生物技术在梨树研究中的应用[A];全国第四届梨科研、生产与产业化学术研讨会论文集[C];2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
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2 张妙霞;野生香蕉(Musa spp., AB group)抗寒相关基因的克隆与表达分析[D];福建农林大学;2010年
3 何影;引入甘氨酸甲基化合成甜菜碱途径提高黑麦草抗旱性研究[D];山东大学;2010年
4 咸洪泉;菌寄生真菌几丁质酶基因的克隆及功能研究[D];山东农业大学;2011年
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6 台莲梅;马铃薯早疫病菌多样性和侵染过程及品种抗病机制研究[D];黑龙江八一农垦大学;2011年
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8 闫永庆;松嫩平原盐碱胁迫对目的园林植物生理生态学影响[D];东北林业大学;2010年
9 赵鑫;优质蓝莓转LEA基因及耐寒性分析研究[D];东北林业大学;2011年
10 方连玉;盐胁迫对欧洲赤松光合作用的影响及耐盐性评价[D];东北林业大学;2011年
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1 刘冉冉;枫香遗传转化体系的优化及转化PaFT基因的研究[D];华中农业大学;2010年
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3 张峰;农艺技术措施对黄瓜制种产量和质量的影响[D];山东农业大学;2010年
4 王长宪;利用基因工程创造香樟抗寒树种新种质技术研究[D];山东农业大学;2009年
5 李树芬;甜菜碱提高转基因番茄耐热性研究[D];山东农业大学;2010年
6 赵艳燕;桑树组培快速繁育、脱毒及原生质体分离技术的研究[D];山东农业大学;2010年
7 王妍;酸枣和西吕枣高频率不定梢诱导及酸枣遗传转化的研究[D];山东农业大学;2010年
8 杨茹;大蒜原生质体融合与培养技术研究[D];山东农业大学;2010年
9 徐榕;自由人槭(Acer×freemanii)组培快繁技术体系的构建[D];山东农业大学;2010年
10 窦玥;两种槭树的组织培养和防治组培污染的初步研究[D];辽宁师范大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 孙清荣,樊圣华,刘庆忠;大鸭梨叶片高频率不定梢再生诱导研究[J];山东农业科学;2003年02期
2 徐中霞;徐春霞;王桐卿;王彦河;;茉莉的栽培技术[J];安徽农学通报;2007年13期
3 文斌;蔡汉;黄法就;陶纯洁;;冷锻炼对低温胁迫下茉莉幼苗细胞膜稳定性的影响[J];安徽农学通报;2008年05期
4 吴广宇,杨玲玲;大叶黄杨带腋芽茎段组织培养研究[J];安徽农业科学;2005年05期
5 曹慧;赵升;王孝威;崔英;;低温胁迫对葡萄幼苗相关生理指标的影响[J];安徽农业科学;2008年04期
6 孙阳;刘顺标;程淑云;魏海蓉;刘庆忠;李宪利;;3个蓝莓品种叶片离体再生及生根技术研究[J];安徽农业科学;2008年11期
7 毛明艳;方正;;NaHCO_3胁迫对燕麦幼苗生长及相关生理指标的影响[J];安徽农业科学;2009年10期
8 孟祥静;何丽斯;夏冰;谭国华;汪仁;;我国茉莉的研究现状及展望[J];安徽农业科学;2009年21期
9 段瑞君;任有成;熊辉岩;;低温胁迫对青稞幼苗抗寒性生理指标的影响[J];安徽农业科学;2009年34期
10 张杨军;涂艺声;彭先全;徐志祥;;云锦杜鹃离体再生培养基的条件优化[J];安徽农业科学;2010年11期
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 詹亚光;白桦的组织培养和遗传转化研究[D];东北林业大学;2001年
2 王萍;大豆组织培养体系优化与双价抗虫基因遗传转化的研究[D];东北农业大学;2002年
3 吴延军;桃组织培养及遗传转化的研究[D];浙江大学;2004年
4 尹淑萍;草莓栽培品种离体再生及遗传转化的研究[D];中国农业大学;2004年
5 王慧梅;喜树组织培养与遗传转化的研究[D];东北林业大学;2004年
6 张彦妮;复叶槭组织培养再生体系建立及其遗传转化初步研究[D];东北林业大学;2005年
7 李慧;银白杨再生体系建立及rolB-pttGA20ox双价基因遗传转化促进生根和高生长的研究[D];北京林业大学;2006年
8 魏安智;仁用杏抗寒机理研究与抗寒物质筛选[D];西北农林科技大学;2006年
9 邓晓辉;不结球白菜温敏型胞质雄性不育的分子标记和相关基因的克隆与表达分析[D];南京农业大学;2007年
10 吴丽君;湿地松、火炬松离体培养植株再生技术的研究[D];南京林业大学;2008年
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1 刘冉冉;枫香遗传转化体系的优化及转化PaFT基因的研究[D];华中农业大学;2010年
2 宋志荣;水分胁迫对辣椒脂质过氧化作用和保护酶活性及相关生理指标的影响研究[D];湖南农业大学;2001年
3 朱志玉;沙引发及抗寒剂处理对水稻种子发芽及幼苗抗寒性的影响[D];浙江大学;2002年
4 秦玲;苹果(Malus domestica Borkh)遗传转化体系的建立及ipt基因的导入[D];西北农林科技大学;2002年
5 齐代华;长叶竹柏(Podocarpus fleuryi Hickel)幼苗对低温胁迫的生理生态响应[D];西南师范大学;2002年
6 张委;两种不同加工工艺对茉莉花茶香气成分及多酚类的影响[D];西南农业大学;2003年
7 魏鹏;茶树抗旱性部分生理生化指标的研究[D];西南农业大学;2003年
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9 施征;三个枣品种抗寒生理特性的研究[D];河北农业大学;2003年
10 马怀宇;越橘离体叶片再生体系的建立及其影响因素的研究[D];吉林农业大学;2003年
【二级引证文献】
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1 徐严;魏小红;李兵兵;曹丽;唐志敏;;外源NO对NaCl胁迫下紫花苜蓿种子萌发及幼苗氧化损伤的影响[J];草业学报;2013年05期
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1 刘肖;蓝莓抗寒性、需冷量SNP分析与分子辅助育种研究[D];北京林业大学;2013年
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1 王景峰;周洪富;朱洪杰;张卓;;八月红梨特征特性及栽培技术[J];现代农业科技;2009年14期
2 王志华;王文辉;佟伟;张志云;姜修成;李江阔;;1-MCP对八月红梨防褐保鲜的效应[J];江苏农业学报;2008年03期
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