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《西北农林科技大学》 2006年
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根癌农杆菌介导的黄瓜(Cucumis sativus L.)遗传转化体系的研究

范爱丽  
【摘要】: 本研究在优化黄瓜再生体系的基础上,通过根癌农杆菌介导法,将Mn-SOD基因转入黄瓜植株,使SOD在植株体内过量表达,提高其在环境胁迫下清除活性氧的能力,从而提高黄瓜植株的抗逆性,并为抗性生理的研究提供有价值的材料。通过筛选获得抗逆性株系,可望在短期内实现品种的抗性改良,丰富黄瓜种质资源,加速抗性品种选育的进程。 本试验的主要研究结果如下: 1对不同激素、不同苗态、不同外植体切割和接种方式、基因型、光暗培养及AgNO3影响黄瓜子叶节再生体系的因素进行了研究,优化了黄瓜再生体系即最佳芽诱导培养基为(MS + 0.005 mg/ L TDZ +0.05 mg/ L IBA+2 mg/ L AgNO3 );两片子叶脱离种壳且与下胚轴处于弯曲状态的子叶节再生频率最高;保留单片子叶、下胚轴纵切、切除此子叶的2/3且竖直插入为最佳切割和接种方式;农城3号为最佳基因型;完全光下培养有利于不定芽的诱导。 2在优化再生体系的基础上研究了黄瓜子叶节外植体对卡那霉素和头胞霉素的敏感性。探讨了预培养天数、农杆菌浓度、感菌时间、共培养时间及光暗培养等影响转化的因素,建立了黄瓜高频转基因再生体系。取农城3号苗态2,即保留单片子叶、下胚轴纵切、切除此子叶的2/3且竖直插入的最佳外植体切割和接种方式,在( MS + 0.005 mg/L TDZ +0.05 mg/ L IBA+2 mg/ L AgNO3)上预培养3 d,投入到活化的携带目的基因的农杆菌EHA-105的菌液中浸染5 min,在最佳芽诱导培养基上光照条件下共培养2 d,转入筛选培养基(MS+ 0.005 mg/ L TDZ +0.05 mg/ L IBA+ 2 mg/ L AgNO3+ 10 mg/100mL AS +100 mg/L Kan+500 mg/ L Cef)中筛选抗性芽,光照条件下培养有利于抗性芽的转化,暗培养一般不能超过3天。每隔两周更换一次培养基,抗性芽转入试管苗伸长培养基中培养2周,获得抗性株系。 3 GUS组织化学染色和PCR扩增检测。GUS染色结果转化材料呈现蓝色,未转化材料无蓝色;PCR检测获得的16个抗性株系中有9个的基因组DNA能扩增出628 bp条带,与阳性质粒对照处于同一位置,步证明目的基因已转入黄瓜基因组中。
【学位授予单位】:西北农林科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:S642.2

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【参考文献】
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