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《西北农林科技大学》 2006年
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大豆γ-生育酚甲基转移酶(γ-TMT)基因的分离及功能分析

朱永兴  
【摘要】: 生育酚又称维生素E,是仅由光合生物合成的一类脂溶性的强抗氧化剂,为人体所必需的维生素之一,它可以清除生物体内的活性氧和自由基,具有明显的抗逆作用。在天然存在的四种生育酚中,α-生育酚的生物活性最高且被人体优先吸收和利用,但大多数主要的植物中α-生育酚水平普遍比较低,而γ-生育酚的水平却比较高。γ-生育酚甲基转移酶的作用是催化γ-生育酚转化为α-生育酚。为了提高植物中α-生育酚的含量,我们进行了大豆γ-生育酚甲基转移酶基因的分离,获得全长cDNA序列(命名为GMTMT),并将其转化拟南芥,以及高维生素E的拟南芥是否可以增强抵抗病原菌丁香假单胞菌番茄致病变种(Pseudomonas syringae pv.tomato)的侵染实验,得到以下结果: 1.从大豆中分离了γ-生育酚甲基转移酶的全长cDNA序列,并构建了原核表达载体PET-TMT和植物表达载体PBI121-TMT,分别将其转入大肠杆菌和拟南芥中,并获得了比较高的体外酶活以及纯系转基因拟南芥1#、5#、7#、8#,ELISA检测表明,1#GMTMT基因在转基因拟南芥中表达活性最高,HPLC分析表明,转基因植株的α-生育酚含量普遍高于野生型植株,提高3-6倍。 2.以转基因拟南芥纯系植株1#、5#、7#和野生拟南芥为研究对象,采用注射法对转基因拟南芥纯系植株和野生拟南芥进行丁香假单胞菌番茄致病变种P.syringae pv.tomato DC3000的的侵染实验,结果显示,接种病原菌三天后,转基因纯系植株和野生型均出现明显的黄化症状,接种七天后,转基因纯系植株与野生型拟南芥同样出现干枯症状。表明转基因纯系植株并没有增强对丁香假单胞菌致病变种DC3000的抗病性。 3.构建了GMTMT基因与GFP融合的植物表达载体PK7FWG2-TMT2,通过烟草叶盘转化法得到了转基因烟草30株,通过观察发现有5颗有GFP的表达,在细胞核中表达最强,其次是细胞膜。
【学位授予单位】:西北农林科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:S565.1

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【引证文献】
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【参考文献】
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【共引文献】
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【同被引文献】
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【二级参考文献】
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