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《西北农林科技大学》 2006年
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利用原生质体融合技术改良重寄生链霉菌F46和链霉菌SC1

王记侠  
【摘要】: 本试验利用原生质体融合技术将重寄生链霉菌F46和链霉菌SC1融合,以期得到整合双亲优良特性于一体的生防菌。本论文主要包括以下4部分: 1.采用传统鉴定方法和现代分子分类方法对亲本菌株F46和SC1进行了鉴定。菌株F46与灰色链霉菌(Streptomyces griseus)同源性较高,为98%,二者培养特征和生理生化特性虽有差异,但更具有许多相似之处,因此将其归入灰色链霉菌(Streptomyces griseus)。菌株SC1与灰色轮丝链霉菌(Streptomyces griseoverticillatus)同源性为99%,虽然二者在培养特征和生理生化特性方面存在着某些差异,我们认为该菌株应当归入灰色轮丝链霉菌(Streptomyces griseoverticillatus)。 2.确定了双亲原生质体形成与再生的最佳条件:菌株F46、SC1采用二次菌丝培养,即在蔗糖含量20%菌丝培养液里,25℃条件下150 rpm培养48 h;然后按15%的接种量转接到蔗糖含量30%,甘氨酸含量分别为1%、1.5%的菌丝培养液中,同样条件下,继续培养48 h;在34℃条件下,菌株F46用等量混合的蜗牛酶和溶菌酶20 mg·mL-1,菌株SC1用10 mg·mL-1溶菌酶,分别酶解3 h、2.5 h,不仅有大量的原生质体形成,且再生率也高。研究发现原生质体不宜在4℃条件下长期保存。菌株F46和SC1的原生质体最适宜的紫外灭活时间分别为600 s、360 s;在60℃条件下,二者最适宜热灭活时间分别为45 min、90 min。按不同的组合方式,将双亲的原生质体等量混合,经40%PEG助融10 min,培养再生,获得40株融合子。 3.经皿内拮抗试验初筛,发酵液活性测定复筛,获得3株在不同方面优于亲本的融合子:FSf-11、FSf-13和FSf-30。其中融合子FSf-11和FSf-13是由菌株F46的原生质体热灭活与菌株SC1原生质体未灭活融合而来;融合子FSf-30通过双亲灭活原生质体(F46热灭活与SC1紫外灭活)融合后获得。皿内拮抗试验表明:融合子FSf-11、FSf-13对灰葡萄孢的抑制效果显著,其抑制机理主要引起灰葡萄孢的基内菌丝严重畸变、缢缩或原生质凝聚等;FSf-30对粉红聚端孢的抑制作用比亲本SC1也有所增强,除引起粉红聚端孢的基内菌丝严重畸变外,还有菌丝细胞壁消解现象。 4. 3株融合子在形态特征、培养特征和生理生化特性上均与双亲存在明显差异,融合子的抗药性、生长速度和产孢量等方面也明显不同于双亲。在以亲本菌株F46和SC1为对照的情况下,利用16S rDNA PCR-RFLP鉴定融合子,检测出融合子FSf-30不仅具有双亲的DNA条带,还增加1~3条新的谱带;融合子FSf-11、FSf-13除双亲共有的DNA条带外,未检测到亲本F46所特有的一条谱带。在灭活原生质体的基础上,将融合子鉴定的传统方法与现代分子方法相结合,综合考虑分析,推断出融合子FSf-11、
【学位授予单位】:西北农林科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:S476.1

【引证文献】
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【同被引文献】
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