中国原产华东葡萄抗白粉病基因cDNA文库构建及其EST序列分析

【摘要】：葡萄白粉病[Uncinula necator(Schw．)Burr．]是影响世界葡萄生产的主要病害之一。育种实践证明，培育抗病品种是控制葡萄白粉病的经济有效途径。原产我国葡萄野生种华东葡萄(Vitis pseudoreticulata W.T.Wang)株系“白河-35-1”，在多年研究证明它对我国葡萄白粉病表现出极强的抗病性；对其抗白粉病相关基因进行克隆研究不仅有利于阐明抗病机制，而且对葡萄抗白粉病研究及抗病基因的育种利用具有重要价值。本研究以cDNA文库为基础，以测序为主线，结合生物信息学方法和PCR技术对获得的目标序列进行结构和表达分析，以期获得与抗病有关的EST序列和抗病相关基因。取得如下主要结果： 1．以中国原产华东葡萄株系“白河-35-1”为材料，于2003年7月8日上午8：00-10：00，在西北农林科技大学葡萄种质资源圃进行接种实验；在接种前，选取健康的华东葡萄株系“白河-35-1”的幼叶，用无菌蒸馏水喷湿接种叶片的上叶面，从高度感病的中国原产华东葡萄株系“湖南-1”上取感白粉病的叶片，用病叶压片法人工接种葡萄白粉病病原菌，接种后立即套袋。在接种后1d、2d、3d、4d、5d、6d、7d剪去1.0cm~2大小的幼叶叶片，立即放置液氮中，用SDS／酚法提取总RNA；用不同接种时间白粉病病原菌[U.necator(Schw.)Burr.]诱导的叶片分别提取总RNA，然后混合提取的RNA样形成总RNA构建华东葡萄叶片cDNA文库。文库初始滴度为3.0×10~5pfu／ml，重组率为96.9％，用包装后的原始文库直接转化寄主菌BM 25.8，转化效率为90％以上，插入片段主要分布在0.5-3.O kb之间，平均大小为900bp左右。 2．通过随机测序，获得了107条质量好的cDNA序列；并已登录GenBank数据库，登录号分别为：AY848693、DQ336280、DQ 336281、DQ 336282、DQ 336283、DQ 336284、DQ336285、DQ336286、DQ336287、DQ336288、DQ336289、DQ339462、DQ 339463、DQ 339464、DQ354157、DQ354158、DQ354159、DQ354160、DQ354161、DT646287、DT661587、DT 661588、DT661589、DT661590、DT661591、DT661592、DT661594、DT 661595、DT 661596、DT 661597、DT661598、DT661599、DT6615600、DT661601、DT661603、DT661605、DT661608、DT661610、DT 661611、DT661613、DT661614、DT661615、DT661616、DT661618、DT661619、DV182076、DV182077、DV182078、DV182080、DV182981、DV182082、DV182084、DV182085、DV182086、DV182087、DV182088、DV182089、DV182090、DV182091、DV182092、DV182093、DV182094、

【关键词】：中国野生葡萄 白粉病 cDNA文库 表达序列标签 基因表达
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：S663.1
【目录】：