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《西北农林科技大学》 2006年
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小鼠骨髓间充质干细胞体外定向诱导分化为神经元样细胞

胡亮  
【摘要】: 近年来的研究发现,在骨髓中除了造血干细胞外还存在一种间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)。MSCs具有多向分化潜能,在特定的条件下能够分化为成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞、神经细胞等。由于MSCs具有取材方便、易于分离培养和扩增、可自体移植、适合于外源基因的导入和表达等优点,因此成为医学界的研究热点。本研究探讨了小鼠骨髓MSCs体外分离培养的方法及其向神经元样细胞分化的潜能。本试验采用全骨髓法和梯度密度离心法分离、纯化小鼠骨髓间充质干细胞;研究RPMI-1640和L-DMEM培养基以及马血清和胎牛血清对骨髓MSCs生长的影响;并采用两种诱导剂(β-巯基乙醇和BHA)诱导小鼠骨髓MSCs分化为神经元样细胞;结果表明: 1密度梯度离心法比全骨髓法分离的小鼠骨髓MSCs纯度高,但是细胞生长速度相对较慢。刚接种时,两种方法分离的骨髓细胞悬液中的细胞呈圆形,大小不一,细胞核比较模糊,但是全骨髓法比密度梯度离心法分离的细胞数量大;1d~3 d密度梯度离心法分离的细胞处于潜伏期,可见形态相对均一、折光性较强的纺锤形细胞,以及少量成纤维细胞样的细胞,而全骨髓法的细胞已经进入了对数生长期,细胞生长速度较快;4 d~5 d密度梯度离心法分离的细胞进入对数生长期,而全骨髓法分离的细胞进入平台期;8 d~10 d密度梯度离心法的细胞生长进入平台期,并逐渐出现融合,而全骨髓法的细胞已经融合,细胞间存在接触抑制,传代培养的细胞呈集落样生长并融合成片。密度梯度离心法分离的细胞在第三、四代的细胞纯度高达98 %,培养12 d后发生融合,呈水纹状分布或平行生长。 2 L-DMEM培养基培养小鼠骨髓MSCs比RPMI-1640好。马血清和氢化可的松在前三周的培养是至关重要的,但是以后的培养过程中要更换为胎牛血清,否则会加速细胞的脂肪分化。 3两种诱导剂(β-巯基乙醇和BHA)诱导的小鼠骨髓MSCs均出现神经元样细胞的分化,胞体呈神经元状,伸出轴突样和树突样突起且有分支。免疫细胞化学鉴定显示,诱导分化后的细胞表达神经元特异性烯醇化酶和神经纤维丝蛋白,β-巯基乙醇诱导的细胞表达NSE的阳性率为(86.8±2.7) %,表达Neurofilament 200KD的阳性率为(75.2±2.3) %;BHA诱导分化细胞表达NSE的阳性率为(80.5±2.2) %,表达Neurofilament 200KD的阳性率为(73.2±1.6 %)。
【学位授予单位】:西北农林科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:Q813

【参考文献】
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