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《西北农林科技大学》 2007年
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用RAPD构建苹果遗传图谱及苹果早期落叶病抗性遗传规律研究

张坤  
【摘要】: 本文以秦冠(Qinguan)×富士(Fuji)、富士(Fuji)×秦冠(Qinguan)、秦冠(Qinguan)×秦冠(Qinguan)三个杂交组合F1代群体为试材,利用RAPD技术,进行了RAPD标记多态性和分离表现的研究,构建了苹果分子标记连锁图谱的框架。同时在自然条件和人工接种苹果早期落叶病病原菌下,分别调查了富士和秦冠及其杂交F1代群体的病叶率和病情指数,分析了苹果早期落叶病的抗性遗规律。取得以下主要结果: 1.优化改良了苹果基因组提取的CTAB法及RAPD反应体系。取旺盛生长的梢尖为材料,提取的苹果基因组DNA完整好、纯度高。优化后苹果RAPD反应体系为:模板1.6ng/μL, dNTP 0.2mM/L, 10×Buffer 2.5mL(含1.5mMMg2+), Taq DNA聚合酶0.04U/μL,引物0.8uM/L,总反应体系25uL。与其它反应体系相比,具有稳定,条带清楚,重复性好,多态性丰富等特点。 2.RAPD标记在秦冠×富士的种间杂交一代(F1)的分离情况可以分为符合孟德尔分离规律、偏离孟德尔分离规律和异常分离3类。三者的比例分别为90.05%、7.24%、2.71%。符合孟德尔分离规律的标记包括不分离、1:1分离和3:1分离,三者比例分别为61.97%、33.80%、4.22%。其中双亲共有标记,是不分离标记的主体,单亲特有标记是1:1分离的主体。此外本研究出现15个非亲的RAPD标记,属于异常分离。 3.用秦冠×富士的34个F1代群体作图,将符合孟德尔分离规律的188个RAPD标记,用joinmap 3.0软件,设最大重组率为0.40和最小LOD值为3.0,其中88个标记被分成23个连锁群,其中秦冠有11个连锁群,富士有12个连锁群,还有100个未连锁的标记。富士上标记覆盖的基因组总长度为401.9 cM,标记间的平均距离为8.7 cM。秦冠上标记覆盖的基因组总长度为440.7 cM,标记间的平均距离为10.5 cM。父母本有2个连锁群被整合在一起。这为苹果连锁图谱的研究构建提供了一个连锁框架。 4.富士、秦冠的病叶率和病情指数随时间的延长而呈现增加趋势,但同一时期富士的感病程度始终高于秦冠。7月份,富士的褐斑病(Marssonina mail(P.Henn)Ito)病叶率和病情指数分别是秦冠的5.5倍和10.5倍。富士斑点落叶病(Alternaria alternate f.sp. mali)病叶率和病情指数分别是秦冠的42.9倍和6.4倍。8-9月,富士褐斑病病叶率和病情指数分别增加到80.8%、59.35%,而同一时期秦冠褐斑病的病叶率和病情指数仅增加到7.85%、5.24%。对于斑点落叶病,从8-9月,富士的病叶率和病情指数的增长速度也明显高于秦冠,两者的抗性呈现明显差异。 5.秦冠、富士正反交和秦冠自交F1代(共1280个单株)斑点落叶病和褐斑病的病情指数均偏离正态分布,初步认为褐斑病和斑点落叶病的抗病基因为数量性状,但含有主效抗病基因。
【学位授予单位】:西北农林科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:S661.1

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