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《西北农林科技大学》 2007年
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基于SPE的苹果汁中棒曲霉素富集检测方法及棒曲霉素与麦角固醇相关性研究

李静  
【摘要】: 棒曲霉素(Patulin,PAT)是一种具有神经毒性的真菌代谢产物,具有潜在的致癌性和诱变性,人类饮食中的棒曲霉素主要来源于被霉菌污染的苹果和苹果汁,棒曲霉素在苹果汁中稳定时间最长,亦是判断苹果汁质量安全性的一个重要指标,受到世界各国及国际组织的极大关注;麦角固醇是绝大部分存在于真菌细胞膜中的一种固醇类化合物,可以用其有效地表征真菌的生物量,已成为真菌生物量的重要标志物之一。研究苹果汁中的棒曲霉素及麦角固醇更为准确、简便、快速的检测方法及其相关性对全面准确的评价苹果汁的安全具有重要的科学意义和产业应用前景。 本文通过对SPE-HPLC、LLE-HPLC两种方法富集检测苹果汁中棒曲霉素回收率和精密度对比试验研究,优化了最佳富集检测方法和检测条件;通过苹果汁中麦角固醇提取条件的试验优化,获得了苹果汁中麦角固醇的最佳皂化提取条件;通过苹果汁中麦角固醇与棒曲霉素相关性的研究,获得了苹果汁中棒曲霉素与麦角固醇的定量数学模型,为进一步建立通过苹果汁中麦角固醇的含量同时检测与评价棒曲霉素含量及产生菌生物累积量奠定了一定基础。主要试验结果如下: 1.以SPE和LLE两种处理方法作为样品净化富集方法,通过HPLC法测定处理后样品中的棒曲霉素含量,结果表明:C18-SPE回收率为87.56%~88.40%、HLB-SPE回收85.45%~88.12%、LLE回收率79.47%~80.10%,变异系数分别为3.28%~4.47%,4.32%~7.15%和6.28%~7.67%;用C18-SPE-HPLC测定浓缩苹果汁中棒曲霉素的含量回收率可达88%,结果精密度高,重现性好,RSD≤5%。2.通过对C18-SPE-HPLC检测条件的进一步优化,结果表明:当进样量为5.0g,梯 度洗脱液用量分别为6mL甲醇﹑8mL 10%甲醇的二氯甲烷溶液和6mL乙酸乙酯时,采用C18-SPE法富集检测棒曲霉素的回收率为88.70%~91.56%,变异系数为3.06%~4.03%。 3.利用试验设计软件Design expert,通过响应面法(RSM)建立了苹果浊汁中麦角固醇提取的二次多项数学模型,经验证表明是合理可靠的,同时利用模型的响应面及其等高线对影响麦角固醇提取量的皂化条件因子及其相互作用进行探讨,获得麦角固醇提取最佳皂化条件:皂化时间65.7min、皂化温度93.93℃、醇用量79.9mL甲醇和45.1mL乙醇、KOH为10.12g。 4.对不同批次的苹果浊汁样品中棒曲霉素与麦角固醇含量关系的研究,获得了苹果汁中麦角固醇与棒曲霉素定量数学关系模型:y=-0.0384x+3.2215,相关系数为0.9432,其中:x为苹果汁中棒曲霉素的含量,μg/L,y为苹果汁中麦角固醇的含量,mg/L。
【学位授予单位】:西北农林科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:TS255

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