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《西北农林科技大学》 2008年
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Wnt/β-catenin信号通路在猪ADSCs向脂肪细胞分化中的作用及机理研究

李惠侠  
【摘要】: 脂肪组织过度发育,在畜牧上造成动物产品胴体品质下降,在人类则表现为肥胖并引发其他相关疾病如糖尿病、冠心病、动脉粥样硬化、高血压、高脂血症等。脂肪组织主要由脂肪细胞组成。脂肪细胞过度增殖、分化是导致体脂过度沉积的直接原因。脂肪细胞起始于中胚层多能干细胞,其分化过程为:多能干细胞—前体脂肪细胞—成熟脂肪细胞。过去30年里,利用已建立的鼠源性3T3-L1前体脂肪细胞系,人们发现了调控前体脂肪细胞向成熟脂肪细胞分化的各种转录因子,并对这些转录因子做了深入研究,但有关多潜能干细胞向前体脂肪细胞分化的研究较少。另外,随着后基因组信息学的发展,人们发现脂肪细胞分化的各种转录因子活性的启动并不是独立事件,而是受多种相同或者不同的细胞内、外因子及信号通路调控的过程。 Wnt/β-catenin是新发现的调控脂肪细胞分化的重要通路。在此通路中,β-catenin蛋白对信号传递起关键作用。激活此通路可以抑制3T3-L1前体脂肪细胞向成熟脂肪细胞分化。由于β-catenin及某些Wnt蛋白在3T3-L1前体脂肪细胞分化的早期高表达,因此,推测Wnt/β-catenin通路可能在多能干细胞向脂肪细胞分化中也起作用,但其具体作用及机制目前尚未见报道。 猪是重要的肉用家畜,也是脂肪蓄积能力最强的动物之一,是研究脂肪组织形成与发育较为理想的动物模型。本文以猪脂肪间充质干细胞(ADSCs)为细胞材料,利用SQ RT-PCR、Western Blotting技术检测了Wnt/β-catenin信号通路主要成员在猪ADSCs向脂肪细胞分化过程中的时序表达情况;用Wnt/β-catenin信号通路的激活剂—LiCl处理猪ADSCs,并将细胞置于成脂诱导剂中培养,利用细胞免疫荧光染色、细胞油红O染色及油红O染色提取法、SQ RT-PCR及Western Blotting等技术研究了激活Wnt/β-catenin信号通路对猪ADSCs向脂肪细胞分化的作用及其机制;采用基因重组技术构建了Wnt/β-catenin通路的第二信使—β-catenin的逆转录病毒干扰载体并稳定转染猪ADSCs;利用细胞油红O染色及油红O染色提取法、SQ RT-PCR及Western Blotting等技术分析了阻断Wnt/β-catenin信号通路对猪ADSCs向脂肪细胞分化的影响。同时,采用“天花板”培养法获得猪去分化的前体脂肪细胞,利用细胞油红O染色、RT-PCR等方法检测了传代后前体脂肪细胞分化能力,并对这种前体脂肪细胞进行了细胞生物学鉴定。 获得的主要研究结果如下: 1.激活Wnt/β-catenin信号通路抑制了猪ADSCs向脂肪细胞分化的能力。LiCl增加了细胞内β-catenin蛋白的表达量,说明Wnt/β-catenin信号通路被激活;激活Wnt/β-catenin信号通路后,油红O染色的细胞数目减少,细胞内脂肪含量降低,而ADSCs向成骨细胞分化的能力增强;脂肪转录因子C/EBPα和PPARγ的表达受到抑制,而C/EBPβ和C/EBPδ等转录因子的表达未发生改变。 2.阻断Wnt/β-catenin信号通路促进了猪ADSCs向脂肪细胞分化的潜能。敲除β-catenin后ADSCs向脂肪细胞分化的比例增加,细胞内脂肪含量升高,C/EBPα和PPARγ表达水平提高,并抑制了LiCl的抗脂肪细胞分化的作用。 3.生理状态下,Wnt/β-catenin信号通路中的主要成员Wnt10,Frizzled1/2, GSK3β,β-catenin等基因在猪ADSCs中及ADSCs向脂肪细胞分化的早期均高表达,但随着成脂分化的进行表达量逐渐减少。 4.成功构建了β-catenin的逆转录病毒干扰载体pSuper- retro-β-catenin shRNA,并将其转染到猪ADSCs中,经过嘌呤霉素筛选得到了稳定敲除β-catenin基因的细胞。 5.分离、纯化得到猪ADSCs,经鉴定95%以上的ADSCs表达成体干细胞标志CD44和CD105;ADSCs在不同诱导剂中可分化成成骨、脂肪和成肌等细胞,具有多向分化潜能。 6.成熟脂肪细胞可以去分化为前体脂肪细胞,传代后的前体脂肪细胞与原代培养的脂肪基质微管细胞(SVF)一样,有正常的增殖能力、可重新分化成脂肪细胞,但纯度和成脂分化率高于SVF。这种前体脂肪细胞冻存前后遗传性能良好,是一种很好的前体脂肪细胞模型。
【学位授予单位】:西北农林科技大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:S828

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【引证文献】
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1 袁志坚;周红;何晓升;何文涓;;脂肪来源干细胞在移植脂肪中的分化及其相关miRNA的表达[J];中国生化药物杂志;2012年06期
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1 邵淑敏;柴进;蒋思文;;猪脂肪间充质干细胞的分离、鉴定以及Wnt信号通路在脂肪细胞分化过程中的作用[A];“生泰尔”杯全国养猪技术征文大赛——中国畜牧兽医学会养猪学分会五届三次理事会暨生猪产业科技创新发展论坛论文集[C];2012年
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1 邵淑敏;猪APC1和APC2基因的分离、鉴定及其功能的初步研究[D];华中农业大学;2011年
【参考文献】
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1 陈粉粉;张立杰;张利红;杨公社;;EGCG对猪前体脂肪细胞增殖和分化的作用[J];动物学报;2006年06期
2 张罕星;朱晓彤;束刚;高萍;高淑静;张常明;江青艳;陈瑶生;;猪脂肪前体细胞分化过程中聚脂相关基因的表达模式[J];动物学报;2007年01期
3 朴英杰;去分化与细胞组织损伤再生[J];第一军医大学学报;2004年07期
4 庞卫军;孙世铎;白亮;杨燕军;杨公社;;白藜芦醇对猪原代前体脂肪细胞的增殖与分化及Sirt1基因转录表达时序的影响[J];生物工程学报;2006年05期
5 李惠侠;屈长青;罗肖;杨公社;;脂肪组织源性干细胞研究进展[J];生理科学进展;2007年02期
6 屈长青,张国华,赵丽丽,杨公社;猪脂肪基质细胞成骨与成脂分化潜能的研究[J];中国生物工程杂志;2005年11期
7 罗肖;李惠侠;杨公社;;Wnt信号通路与前体脂肪细胞[J];中国生物化学与分子生物学报;2007年10期
【共引文献】
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1 李芳琼;刘海峰;朱砺;;罗格列酮和血清对猪前脂肪细胞诱导分化过程中PPARα和PPARγ基因表达的影响[J];安徽农业科学;2011年15期
2 张国华;屈长青;杨公社;;猪脂肪间充质干细胞的分离培养及其成脂分化[J];动物学报;2006年05期
3 张利红;王琦;张立杰;杨公社;;Epigallocatechin-3-gallate对原代大鼠脂肪细胞脂肪分解及HSL、TGH转录表达的影响[J];动物学报;2007年04期
4 李明洲;李学伟;帅素容;朱砺;刘海峰;王金勇;蒋忠荣;滕晓坤;;雌性藏猪不同生长发育阶段肌肉生长和脂肪沉积相关基因的表达模式[J];动物学报;2008年03期
5 姜东凤;孙超;彭永佳;;猪Musclin基因的组织表达特征及其与生脂基因的相关性分析[J];动物学报;2008年03期
6 曹锴;李影;蔡志华;;草鱼前体脂肪细胞原代、传代培养及鉴定[J];重庆师范大学学报(自然科学版);2010年06期
7 张迅轶;刘厚奇;;脂肪干细胞:细胞治疗的新选择[J];第二军医大学学报;2007年03期
8 张迅轶;仵敏娟;刘厚奇;;人皮下脂肪来源脂肪干细胞的分离培养及鉴定[J];第二军医大学学报;2007年08期
9 赵丽丽;屈长青;张国华;杨公社;;5-氮胞苷诱导大鼠脂肪间充质干细胞分化成肌细胞[J];第四军医大学学报;2007年22期
10 杨亚军;朱庆生;;CDMP1诱导大鼠脂肪干细胞体外成软骨细胞的实验研究[J];第四军医大学学报;2008年04期
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1 张利泰;刘薇薇;;针灸治疗单纯性肥胖症的研究进展[A];中国针灸学会第八届全国中青年针灸推拿学术研讨会论文汇编[C];2008年
2 张金铃;罗明富;何俊娜;郭莹;李翠红;崔山佳;;皮部脂肪组织内分泌活动与经络现象相关性的研究——兔前脂肪细胞的原代培养[A];第8届全国针灸科研与临床研讨会暨安徽省针灸学会2009年年会论文集[C];2009年
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1 高妍;东北民猪与大白猪背最长肌的差异表达基因研究[D];吉林大学;2011年
2 萨伊德;碳纳米纤维支架与兔脂肪干细胞的体外相容性研究[D];华中科技大学;2011年
3 陈欢;阳离子聚合物介导的基因输送在复合组织再生修复中的应用及免疫效应研究[D];南京大学;2011年
4 崔焕先;肉鸡肌内脂肪形成的分子调控网络及相关基因研究[D];中国农业科学院;2011年
5 白瑞霞;Ghrelin对绵羊卵母细胞体外成熟影响的研究[D];内蒙古农业大学;2011年
6 郑天玉;SIRT1基因表达对人晶状体上皮细胞的保护作用及其机制研究[D];复旦大学;2011年
7 张雪莲;基于纤维蛋白胶支架材料的可注射组织工程化心肌的研究[D];新疆医科大学;2011年
8 高春正;FG-NGF胶膜吻合口包埋促进周围神经生长的机制研究[D];山东大学;2011年
9 罗肖;BAMBI在人脂肪细胞形成中的作用及机理研究[D];西北农林科技大学;2011年
10 陈和华;转化生长因子-β1抗细胞凋亡的信号传导机制[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2003年
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1 李小艾;ChREBP基因RNA干扰真核表达载体的构建、筛选及转染[D];西北民族大学;2010年
2 曹锴;草鱼脂肪细胞原代及传代培养[D];重庆师范大学;2011年
3 何懿;利用PDMS微孔阵列研究三维空间因素对脂肪干细胞体外培养增殖及形态的影响[D];北京协和医学院;2011年
4 陈嘉;脂肪来源的间充质干细胞体外转分化内皮细胞及褪黑素调控研究[D];北京协和医学院;2011年
5 翟羽佳;脂肪来源的间充质干细胞体外转分化内皮细胞及钙调蛋白拮抗剂W7调控研究[D];北京协和医学院;2011年
6 高晓娟;PGC-1β和SREBP-1c在猪脂肪细胞分化过程中的表达及相互作用研究[D];西北农林科技大学;2011年
7 贾乾君;超顺磁氧化铁标记对干细胞转铁蛋白受体和铁蛋白轻链基因及蛋白表达的影响[D];南方医科大学;2011年
8 吕彬;钙信号通过IP3通路对正常与肥胖小鼠脂解作用的影响[D];西北农林科技大学;2011年
9 赵豪;兔体外成骨细胞和脂肪细胞横向分化的初步研究[D];遵义医学院;2011年
10 张平平;应用mRNA差异显示技术筛选猪前脂肪细胞分化相关的基因[D];广东海洋大学;2011年
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1 陈宏,张英汉;秦川牛肉用选育及其技术策略[J];黄牛杂志;2002年02期
2 黄宏;朱方强;孙宏振;冯帅南;王正国;朱佩芳;张波;;脂肪来源干细胞体外成骨诱导和成脂诱导分化[J];第三军医大学学报;2008年13期
3 王黎;张勇;李晓宇;刘磊;;脂肪基质细胞脂向分化过程中MicroRNA-134的表达变化[J];广东医学;2009年04期
4 罗肖;李惠侠;杨公社;;猪脂肪组织发育过程中Wnt/β-catenin信号通路相关基因及脂肪转录因子的时序表达[J];生物工程学报;2008年05期
5 马宗源,李祺福;APC蛋白的结构特征及其与细胞骨架的关系[J];生命科学;2004年01期
6 吴家昌;马琼;邹贤飞;杨彤涛;单乐群;马保安;;miRNA与细胞分化的研究进展[J];现代生物医学进展;2010年03期
7 徐小春;李光早;;脂肪来源干细胞的基础研究及成脂应用进展[J];中华全科医学;2012年05期
8 吴桂珠;郑秀;江忠清;王金华;宋岩峰;;Induced Differentiation of Adipose-derived Stromal Cells into Myoblasts[J];Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences);2010年03期
9 肖金刚;陈建霖;李晓宇;张勇;田卫东;刘磊;;脂肪干细胞脂向分化过程中miRNA-27b表达的研究[J];天津医药;2009年09期
10 王伟新;张勇;李晓宇;龙洁;田卫东;汤炜;王杭;郑晓辉;刘磊;;脂肪基质细胞脂向分化过程中MicroRNA-21的表达变化[J];现代生物医学进展;2009年23期
【二级参考文献】
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1 张崇本;脂肪细胞的分化及调控[J];生理科学进展;2004年01期
2 屈长青,张国华,赵丽丽,杨公社;猪脂肪基质细胞成骨与成脂分化潜能的研究[J];中国生物工程杂志;2005年11期
3 庄合林;林亚秋;杨公社;;维生素C通过调控脂肪形成相关基因的转录促进猪前体脂肪细胞的增殖与分化[J];中国生物化学与分子生物学报;2007年06期
4 陈希哲,林云锋,乔鞠,田卫东,闫征斌,李声伟;人体脂肪基质细胞分离培养及其成骨潜能[J];实用口腔医学杂志;2004年01期
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1 兰长英,王霞;不同剂量铜饲喂生长猪效益研究[J];贵州农业科学;1989年01期
2 叶树株,黄言钧,张理谟,包毅,王文龙,张华实;猪变形杆菌感染症的调查研究[J];畜牧兽医学报;1991年01期
3 孙有平,葛云山,刘铁铮,包承玉,徐晓波,大石孝雄;梅山猪血型的调查[J];江苏农业学报;1993年02期
4 郑星道,冷百会,刘德惠,吴延春,高炳林,马国明,赵陆章,金德焕;LAT、TSM和BDM方法检验猪旋毛虫病的比较[J];中国动物检疫;1995年06期
5 季志东,孙顺清,马墉,王建华;猪链球菌病的调查与防治[J];天津农业科学;1998年S1期
6 金家志;沼液喂猪[J];动物科学与动物医学;1998年04期
7 李宏清;秸秆生物饲料养商品猪试验[J];贵州畜牧兽医;1999年01期
8 卢福山;乐都杂种猪血清淀粉酶活性测定[J];青海畜牧兽医杂志;1999年04期
9 帅素容,罗安治,巨新义,杨明楷;四川美系长白猪的氟烷基因分析[J];四川畜牧兽医;1999年07期
10 侯生珍;猪应激综合征及检测技术研究进展[J];青海大学学报(自然科学版);2000年01期
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1 刘海峰;李学伟;朱蛎;帅素容;;应用抑制消减杂交技术筛选猪前脂肪细胞诱导分化前后的差异表达基因[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
2 贾建宇;肖书奇;王奇伟;陈瑶生;;重组猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(pGM-CSF)腺病毒表达载体的构建[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
3 张辉;史新娥;袁媛;孙世铎;杨公社;;FoxO1与猪骨骼肌纤维类型关系的初步研究[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
4 李京励;孔路军;李爱赟;王爱国;傅金恋;;PPARs在胚胎着床期子宫中的表达研究[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
5 孙泰雷;李戈;何晓波;侯永刚;柏蒙蒙;吴明明;孙金海;;13/17罗伯逊易位猪CMYA1基因多态性[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
6 司红彬;刘迎春;杨帆;丁焕中;陈杖榴;曾振灵;;乙酰甲喹对猪肝药酶mRNA表达的影响[A];中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会论文摘要集[C];2009年
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9 高海鹏;肖飞;马红伟;邱银生;;高效液相色谱法测猪血浆中盐酸小檗碱浓度[A];中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会论文摘要集[C];2009年
10 邹立扣;王红宁;曾博;高荣;李旭庭;张安云;周英顺;徐昌文;杨鑫;王霆;张云飞;;用PCR及ERIC-PCR检测猪肺炎克雷伯氏菌耐药基因[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集(下册)[C];2009年
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1 李伟立;冬季谨防猪瘫痪[N];河南科技报;2004年
2 洪学;猪五种常见病的防治[N];河南科技报;2005年
3 记者 叶斌;这只猪长“人手”?[N];雅安日报;2005年
4 伊世东;定点屠宰:不再半夜猪嚎[N];中国食品质量报;2005年
5 树军;悲鸿画猪[N];人民政协报;2002年
6 王德富 肖勇;岳池外出民工回乡创“猪”业[N];广安日报;2005年
7 王篷;马来西亚宰猪千头遏病毒[N];检察日报;2000年
8 丁立威 丁乡;猪鸡分层联养法[N];新疆科技报(汉);2005年
9 丁立威;猪鸡分层联养效益高[N];云南科技报;2005年
10 丁立威;猪鸡分层联养效益高[N];中国特产报;2005年
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1 李惠侠;Wnt/β-catenin信号通路在猪ADSCs向脂肪细胞分化中的作用及机理研究[D];西北农林科技大学;2008年
2 屈长青;猪脂肪间充质干细胞的分离培养及体外诱导分化研究[D];西北农林科技大学;2006年
3 逄大欣;猪肌生成抑制素作用靶位点的研究[D];吉林大学;2006年
4 柳林;自体脂肪间充质干细胞移植治疗晚期肝病的实验研究[D];吉林大学;2007年
5 武艳萍;猪转化生长因子β1基因多态性与猪产仔数关系的研究[D];中国农业大学;2005年
6 张鹤亮;日粮蛋白质对猪回肠内源氨基酸流量的影响[D];中国农业大学;2005年
7 张运海;利用体细胞核移植技术生产猪克隆胚胎的研究[D];中国农业大学;2005年
8 马海明;猪4个新基因的分离、物理定位及MyoG基因SNP研究[D];湖南农业大学;2005年
9 王丽;钛柱撑蒙脱石(Ti-PLM)吸附饲粮砷的研究[D];浙江大学;2006年
10 孙林;自体骨髓单个核细胞移植治疗猪急性心肌梗死的实验研究[D];昆明医学院;2007年
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1 唐春祥;褪黑激素主动免疫对生长猪生产性能和胴体品质的影响[D];四川农业大学;2005年
2 何建军;猪附红细胞体病诊断及治疗的研究[D];湖南农业大学;2005年
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