收藏本站
《西北农林科技大学》 2008年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

苏云金芽孢杆菌cry1Ab22基因的克隆与原核表达

伍金元  
【摘要】: 苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis Berliner,简称Bt)是目前应用最广的一类微生物杀虫剂,在过去的30多年中得到广泛的研究和应用。Bt的主要杀虫活性与其携带的编码ICPs(Insecticidal Crystal Proteins,ICPs)的cry基因密切相关,因此,cry基因工程研究便成为近几年研究的热点。自Schnepf和Whiteley(1981)分离克隆了第一个Bt cry基因,到目前为止,国际上已经克隆了407种杀虫蛋白基因,但是随着Bt应用的不断扩大,Bt ICPs基因均在不同程度上引发了昆虫的抗性,寻找新的高毒力菌株及基因是解决昆虫抗性问题的有效途径之一。 本研究利用PCR-RFLP法对苏云金芽孢杆菌新菌株S249的cry1型基因进行鉴定,结果显示其含有cry1Aa/cry1Ag、cry1Ab、cry1B基因,并根据GenBank中cry1Ab型基因序列设计引物对P-1,从苏云金芽孢杆菌S249中扩增得到cry1Ab的全长基因,克隆到pGEM-T Easy载体上。通过引物步行法测定该基因长3633bp,其中开放阅读框(ORF)长3468bp,编码1155个氨基酸;经ExPASy分析,初步预测其蛋白质分子量为130.7kDa,等电点pI 5.04。序列比较结果表明,该基因与其它cry1Ab基因存在6~58个氨基酸的差异,已在GenBank中登录,登录号为EU220269,并被Bt毒素基因国际命名委员会正式命名为cry1Ab22。将cry1Ab22基因克隆到表达载体pMAL-c2X上,得到重组质粒pM1a,然后转化到大肠杆菌TB1中,利用IPTG诱导进行表达,最佳IPTG诱导浓度为0.5mM,最佳诱导时间为4h,目的蛋白约占总蛋白的17%。经SDS-PAGE检测,发现转化菌株TB1能正确表达约170kDa的融合蛋白。对表达的cry1Ab22蛋白进行生物测定,结果表明,cry1Ab22蛋白对小菜蛾(Plutella xylostella)的LC50为225.1μg/ml。 新cry基因的克隆,不但为cry基因家族增添了新成员,而且为构建新型转基因工程菌和转基因植物,提供了基因材料。
【学位授予单位】:西北农林科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:S476

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 杨开杰;;苏云金芽孢杆菌晶体蛋白分离纯化新方法研究[J];河北工业科技;2011年04期
2 刘坤;郭威;胡雪芹;张洪斌;;响应曲面法优化苏云金芽孢杆菌B28培养基[J];安徽农业科学;2011年16期
3 黄必旺;谢宇飞;沙莉;黄志鹏;;苏云金芽孢杆菌chi36基因的克隆、表达和酶活性分析[J];热带作物学报;2011年06期
4 杜立新;董明;王容燕;马铭泽;王金耀;曹伟平;宋健;冯书亮;;苏云金芽孢杆菌SHJ-5菌株杀虫晶体蛋白基因分析[J];华北农学报;2011年04期
5 蔡健;刘志;王跃强;徐荣险;周顺桂;;蓝藻发酵生产微生物农药的影响因素研究[J];生态环境学报;2011年05期
6 宋爱环;李成林;朱虎;胡炜;李翘楚;赵斌;张豫;;刺参养殖池塘中一株益生芽孢杆菌的分离及鉴定[J];海洋科学;2011年05期
7 吴海清;陈庆森;;蜡样芽孢杆菌特征性蛋白的分离与纯化[J];天津农学院学报;2011年02期
8 刘欣;姚晗珺;章强华;董国堃;;两岸三地食品农残标准“豁免物质”的比较研究[J];农产品质量与安全;2011年04期
9 黄明;刘逸尘;张亦陈;孙妍;孙金生;;中国明对虾Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因(Fc-Kazal)的重组表达及活性分析[J];水产学报;2011年09期
10 王利平;焦红见;李鹏;;微生态制剂在农作物上的应用研究[J];四川农业科技;2011年09期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘晓垒;何晓明;陆琼;束长龙;张永军;张杰;宋福平;;几株苏云金芽孢杆菌对小地老虎的毒力评价[A];公共植保与绿色防控[C];2010年
2 李荣森;戴顺英;李小刚;;我国土壤中的苏云金芽孢杆菌资源及其主要生物学特性[A];全国生物防治学术讨论会论文集[C];1991年
3 姚昕;刘春勇;陈月华;任改新;;苏云金芽孢杆菌的电穿孔及其工程菌的构建[A];全国生物防治暨第八届杀虫微生物学术研讨会论文摘要集[C];2000年
4 李今煜;陈聪;;苏云金芽孢杆菌发酵技术的研究现状[A];第四届全国绿色环保农药新技术、新产品交流会暨第三届生物农药研讨会论文集[C];2006年
5 李凤梅;李平;闫敏;郑爱萍;孙惠青;;苏云金芽孢杆菌的筛选和初步鉴定[A];首届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会论文摘要集[C];2002年
6 孙晓东;朱辉;唐庆华;覃伟权;;琼海市槟榔园苏云金芽孢杆菌菌株的筛选与鉴定[A];植保科技创新与病虫防控专业化——中国植物保护学会2011年学术年会论文集[C];2011年
7 吴燕榕;乐黄莺;冯智龙;刘舟;关雄;;苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)营养期杀虫蛋白(VIPs)的初步研究[A];中国蛋白质组学首届学术大会论文摘要集[C];2003年
8 苏俊平;葛东华;郭丽伟;宋萍;王勤英;;对鳞翅目害虫广谱高效的苏云金芽孢杆菌的筛选及鉴定[A];公共植保与绿色防控[C];2010年
9 郭丽伟;宋萍;王华堂;苏俊平;王勤英;;抗东亚飞蝗的苏云金芽孢杆菌的筛选及分析[A];公共植保与绿色防控[C];2010年
10 張用梅;劉娥英;袁平;張令要;蔡全信;袁志明;;对夜蛾科害虫及蚊幼虫高毒力苏云金芽孢杆菌的分离及其特性[A];’98海峡两岸害虫生物防治学术研讨会论文摘要[C];1998年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 湖南省植物保护研究所研究员张松柏 刘勇;何谓生物农药[N];湖南科技报;2010年
2 ;生命因科学而富有[N];兵团日报(汉);2006年
3 周韧 通讯员 李倩婷;七大农业项目对接高校[N];长江日报;2007年
4 记者 张颖 伊洁;农林大学学生喜获“挑战杯”特等奖[N];福建日报;2005年
5 科技部;新疆第一个转基因抗虫棉新品选育成功[N];农资导报;2006年
6 记者 瞿剑;破解Bt棉种植和转基因生物安全世界性难题[N];科技日报;2008年
7 本报记者  范建;夺回失去的棉花市场[N];科技日报;2006年
8 记者 赵引德;新型高效广谱菌株安全环保经济[N];农资导报;2007年
9 本报记者 罗晖 实习生 李智勇;Bt转基因水稻真的有毒吗?[N];科技日报;2005年
10 辛华;俄罗斯研制出新型生物杀虫剂[N];农资导报;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 姚江;高效广谱苏云金芽孢杆菌Ly30株的分子生物学研究[D];中国农业科学院;2002年
2 宋福平;苏云金芽孢杆菌cry1le1和cry8基因的研究[D];中国农业科学院;2003年
3 刘楠;苏云金芽孢杆菌酪氨酸酶纯化、性质研究及其mel基因的克隆和表达[D];武汉大学;2004年
4 黄志鹏;苏云金芽孢杆菌WB9的研究[D];福建农林大学;2005年
5 罗兰;苏去金杆菌的分离、cry/cyt基因鉴定及杀线虫活性的研究[D];西北农林科技大学;2005年
6 黄天培;苏云金芽孢杆菌的重要功能基因[D];福建农林大学;2006年
7 郎志宏;苏云金芽孢杆菌cry8Ca2基因的活性分析及在转基因烟草中的表达[D];中国农业科学院;2005年
8 刘贵明;苏云金芽孢杆菌YBT-1520全基因组测序和比较基因组学研究[D];浙江大学;2008年
9 鲁睿;苏云金杆菌和麦蛾柔茧蜂对印度谷螟的联合控制作用研究[D];华中农业大学;2008年
10 李长友;对鳞翅目害虫高毒力Bt菌株B-Hm-16和B-Pr-88的分子生物学研究[D];东北农业大学;2001年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 伍金元;苏云金芽孢杆菌cry1Ab22基因的克隆与原核表达[D];西北农林科技大学;2008年
2 陈宇熹;高效杀蚊苏云金芽孢杆菌BRC-LLP29的发酵优化[D];福建农林大学;2010年
3 谢宇飞;苏云金芽孢杆菌010菌株chi36基因克隆、表达和活性测定[D];福建农林大学;2010年
4 魏蒂;PCR法鉴定苏云金芽孢杆菌菌株的杀虫晶体蛋白基因[D];中国科学院武汉病毒研究所;2001年
5 伍赠玲;苏云金芽孢杆菌WB50菌株vip3A基因和几丁质酶基因的定位[D];福建农林大学;2004年
6 郑大胜;苏云金芽孢杆菌对甜菜夜蛾毒性的筛选及DL-5789菌株的研究[D];中国科学院武汉病毒研究所;2001年
7 牛桂兰;高毒效杀甜菜夜蛾苏云金芽孢杆菌WY-190和WY-197菌株的研究[D];中国科学院研究生院(武汉病毒研究所);2002年
8 王荣伟;苏云金芽孢杆菌NU-1、NU-2毒力提高与保护的研究[D];西北大学;2004年
9 张勇;苏云金芽孢杆菌luxS基因的克隆表达及对植物抗病的影响[D];华中师范大学;2004年
10 邱思鑫;苏云金芽孢杆菌高效菌株的选育、发酵培养与添加剂筛选[D];福建农林大学;2001年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026