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《西北农林科技大学》 2008年
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手工核移植技术在牛体细胞克隆中的应用研究

万敏  
【摘要】: 本试验以牛卵母细胞为实验材料,对脱羰秋水仙碱辅助牛卵母细胞去核的相关条件进行优化。在此基础之上进行了牛手工核移植(又称手工克隆)技术的相关工作,尝试无透明带核移植方法,WOWs培养体系等。目的在于建立适合本试验室条件的手工核移植体系,并优化该体系,为进一步简化牛核移植技术,降低实验成本完成基础性的工作。 1.脱羰秋水仙碱(Deme)诱导牛卵母细胞显核。比较不同显核时间、Deme浓度以及极体形成等因素对牛卵母细胞显核的影响。结果显示:(1) 0.5μg/mL Deme处理卵母细胞,诱导1 h时获得最高显核率(76.00%),高于0.5 h(61.18%)、1.5 h(64.10%)和2 h(63.46%)组;(2)不同浓度Deme处理成熟卵母细胞1 h,0.4μg/mL和0.5μg/mL Deme组显核率(分别为75.24%和77.31%)较高,显著高于0.3μg/mL组(46.54%)与0.6μg/mL(60.66%)组;(3)0.4μg/mL Deme处理卵母细胞1 h,有极体组显核率(83.24%)与无极体组(77.54%)无显著性差异。研究表明, 0.4μg/mL Deme处理卵母细胞1h能更好地诱导牛卵母细胞显核。 2.分别以传统和手工两种方法对牛卵母细胞进行核移植。(1)比较两种核移植技术涉及的技术步骤及所需的时间;(2)比较盲吸法和脱羰秋水仙碱辅助去核法的去核率;(3)比较传统核移植与手工核移植重构胚的发育情况。结果表明:以100个牛卵母细胞为基准,手工核移植(263~360 min)比传统核移植所需的时间(345~450 min)至少短60 min。从去核的准确性来讲,脱羰秋水仙碱辅助去核法(98.57%)远高于盲吸法(63.21%);从总体去核率来看,切割去核法(45.48%)仍高于盲吸法(33.00%),但两者间无显著性差异。手工核移植的重构胚的卵裂率和囊胚发育率(78.79%和39.51%)均高于传统核移植组(72.00%和27.78%),但二者间并无显著性差异。
【学位授予单位】:西北农林科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:Q813

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【参考文献】
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