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《西北农林科技大学》 2008年
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西北地区天蓝苜蓿根瘤菌系统发育研究

冯春生  
【摘要】: 本文采用16S rDNA PCR RFLP、数值分类、nifH PCR RFLP、nodA PCR RFLP、系统发育分析(16S rDNA、nifH、nodA基因序列分析)等技术对67株分离自我国西北地区天蓝苜蓿根瘤菌进行了系统发育研究。 16S rDNA PCR RFLP及序列分析表明,所有待测菌株共分为6种酶切类型,系统发育研究表明各酶切类型代表菌株形成了根瘤菌属(Rhizobium),土壤杆菌属 (Agrobacterium),中华根瘤菌属(Sinorhizobium)3个系统发育分支;大部分菌株属于草木犀中华根瘤菌(S. meliloti)。 数值分类结果在88%的相似水平上分为3个群。群1中华根瘤菌属;群2为土壤杆菌属的;群3为根瘤菌属。结果表明表型分群方法和遗传分群方法有较好的一致性。生理生化结果表明,供试菌株在抗生素试验当中,77.8%的菌株在青霉素300μg/mL中均可生长。99%的菌株均可以在任何浓度的林可霉素中生存。72.2%的菌株可以耐受4%NaCl。90%的菌株可以生长在初始pH 11、12的YMA平板上。所有菌株可经受60℃1 0min的热冲击。 nifH PCR RFLP和序列分析结果表明nifH DNA序列反映的系统发育关系与16S rDNA序列的系统发育关系有比较大的差异。然而,将nifH DNA序列翻译为蛋白质序列以后,除了CCNWGS0061、CCNWNX0047外,nifH蛋白质序列相似性为100%。该结果论证了大部分菌株的nifH所编码的固氮酶是完全相同的。 nodA PCR RFLP和序列分析结果表明除了CCNWGS0056和CCNWNX0041例外,基于nodA反映的系统发育关系与16S rDNA序列的系统发育关系基本是一致的。综合以上结果可得出以下结论:与天蓝苜蓿共生的根瘤菌相当专一;供试天蓝苜蓿具有较强的抗逆性;表型分群方法和遗传分群方法有较好的一致性;nifH和nodA基因的高度保守性很好地解释了天蓝苜蓿与草木犀中华根瘤菌(S. meliloti)共生专一性的现象。
【学位授予单位】:西北农林科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:S154.3

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