收藏本站
《西北农林科技大学》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

利用RT-PCR验证基于小鼠外显子芯片发现的脑缺血相关基因表达的研究

王稳  
【摘要】: 脑中风是严重威胁人类健康的重大疾病之一,是一个患病率高、发病率高、致死率高、致残率高的“四高”疾病,给人类造成极大痛苦,给家庭和社会带来沉重负担。目前,关于脑缺血/缺氧损伤的致病机制研究主要集中于以下几个方面:兴奋性氨基酸学说、钙超载学说、自由基学说、凋亡学说、能量代谢紊乱以及炎症学说。可变剪接广泛存在于人类基因组中,是构成蛋白质多样性以及基因表达复杂程度的主要来源。有研究发现细胞低氧信号通路中的绝大多数基因能够发生可变剪接,但可变剪接作为一种转录水平基因表达调控的手段,在脑缺血/缺氧损伤过程中发挥何种功能,目前仍知之甚少。 为了探究脑缺血/缺氧损伤相关基因的可变剪接变化形式,进而明确可变剪接在脑缺血/缺氧损伤中发挥的调控功能。本研究中,我们首先成功制备C57BL/6J小鼠大脑中动脉阻塞模型来模拟临床脑缺血以及再灌注损伤。然后手术剥离小鼠左右侧大脑皮层及海马组织送交公司进行外显子芯片实验,以此检测不同时间点(缺血2小时,缺血2小时/再灌注6小时),不同脑组织(左右侧大脑皮层,左右侧海马)中发生差异表达的基因及外显子。最后,利用RT-PCR技术,通过在可变外显子区设定特异上下游引物,对右侧海马区外显子芯片数据中基因的可变剪接形式进一步验证。最终,成功验证出14个基因的可变剪接形式。通过对14个基因的功能进行分析发现,这些基因分别涉及到蛋白质翻译起始、蛋白质泛素化降解、细胞骨架及线粒体能量循环等一系列重要生理过程。 为了探究多重PCR技术规模化鉴定基因可变剪接形式,进而加速发现一批基因的剪接变体。本研究结合实验室设计完成的多重PCR引物设计系统进行了五重PCR的尝试。首先,我们选取了小鼠脑组织中普遍表达的5个内参照基因,利用多重PCR引物设计系统设计5对引物,并且不断优化反应条件。最终,成功实现了一次PCR对5个目的基因的鉴定,为后续多重PCR技术规模化鉴定基因可变剪接形式奠定了基础。 综上所述,本研究初步揭示在脑缺血/缺氧损伤中,可变剪接发挥重要的调控作用,为了解脑缺血/缺氧损伤机制提供了重要数据,有助于从基因可变剪接调控水平理解脑血管疾病的发病机制。
【学位授予单位】:西北农林科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R743.3

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李涵;陈萌;孔祥玉;赵淑敏;;脑缺血再灌注损伤后神经元损伤机制的研究进展[J];承德医学院学报;2007年04期
2 韩兴海;夏照帆;;TGF-β/SMADs信号通路在创伤愈合中的作用[J];航空航天医药;2009年12期
3 睢燕;周名雄;;脑缺血再灌注损伤中炎症反应的免疫学机制[J];解剖与临床;2007年06期
4 韩冷;李稚锋;任长虹;孟祥勋;张成岗;;神经系统特异性剪接因子NOVA研究进展[J];军事医学科学院院刊;2008年06期
5 杭兴宜;邓明华;孙志贤;张成岗;;外显子芯片的数据分析和可变剪接预测的新算法[J];军事医学科学院院刊;2009年05期
6 方珉;谢瑞满;;缺血性脑卒中钙超载分子机制的研究进展[J];老年医学与保健;2008年04期
7 赵刚,李树清;兴奋性氨基酸毒性与缺血性脑损伤[J];国外医学(脑血管疾病分册);2004年06期
8 李胜;大鼠大脑中动脉区局灶性脑缺血模型[J];国外医学(脑血管疾病分册);1998年01期
9 李畅;侯玉霞;覃兆海;;琥珀酸脱氢酶的结构与活性氧的产生[J];世界农药;2009年02期
10 孙成栋,刘黎清,卢岩,王世军;大鼠局灶性脑缺血实验指标及评价[J];山东生物医学工程;2002年03期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 杭兴宜;利用外显子芯片研究缺血/缺氧损伤相关的剪接调控机制[D];中国人民解放军军事医学科学院;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 李佩尧;血管内皮细胞中缺氧相关基因的可变剪接研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2008年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 朱武生,杨倩,吴家幂,陈绍兰;线栓法大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的制作[J];安徽医学;2001年04期
2 王业梅;王键;胡建鹏;;益气活血方对脑缺血大鼠脑组织Glu、GABA及NR1表达的影响[J];安徽中医学院学报;2010年01期
3 金宇良;;PCR技术的研究进展[J];现代农业科技;2012年10期
4 吕晓红;彭丽萍;华树成;卢连根;;复合聚合酶链反应检测绿脓杆菌、肺炎支原体及白色念珠菌的效果评价[J];吉林大学学报(医学版);2007年02期
5 王玉梅;商亚珍;;线粒体与脑缺血再灌注损伤的关系[J];承德医学院学报;2009年04期
6 张锦海;陈幸华;李波;赵国良;张曦;孔佩艳;彭贤贵;刘林;;检测AML多药耐药基因mRNA表达的多重半巢式逆转录PCR方法的建立[J];重庆医学;2005年12期
7 王绍鹏;刘尚武;李勇;刘伟婷;吕典秋;;马铃薯SSR标记多重PCR反应体系优化研究[J];东北农业大学学报;2010年10期
8 杨宝山;王惠;姜义仁;秦利;;栗蚕种群遗传多样性的ISSR分析[J];东北林业大学学报;2010年09期
9 宋岱松;;多重PCR技术在食品安全检测中的应用[J];山东畜牧兽医;2009年05期
10 朱振营;林祥梅;刘建;吴绍强;仇松寅;王建武;薛振华;;转人血清白蛋白基因奶牛多重PCR快速检测方法的建立[J];动物医学进展;2010年S1期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王昆;王栋;李魁英;张峰;马书林;吴占军;张新同;陈景顺;;利用多重PCR技术鉴别牛早期胚胎性别研究[A];第三届中国奶牛发展大会论文集[C];2008年
2 李君明;宋燕;陈丽静;杨宇红;徐和金;冯兰香;张智;周永健;;利用多重PCR反应同时筛选番茄Tm_2~2和Mi基因[A];蔬菜分子育种研讨会论文集[C];2004年
3 胡小燕;义鸣放;;唐菖蒲两种主要病毒的多重RT-PCR检测[A];2009中国球根花卉年会交流论文集[C];2009年
4 张浩;强巴央宗;吴常信;凌遥;唐晓惠;;高海拔低氧适应藏鸡心肌酶学研究[A];中国家禽业——机遇与挑战——第十三次全国家禽学术讨论会论文集[C];2007年
5 朱振营;林祥梅;刘建;吴绍强;仇松寅;王建武;薛振华;;转人血清白蛋白基因奶牛多重PCR快速检测方法的建立[A];中国畜牧兽医学会食品卫生学分会第十一次学术研讨会论文集[C];2010年
6 王耀;孙颖杰;曹际娟;闫平平;袁文泽;苏永生;;农畜产品中三种致病李氏菌MPCR-DHPLC检测方法的建立[A];动物检疫学分会2010年学术年会论文集[C];2010年
7 朱振营;林祥梅;刘建;吴绍强;仇松寅;王建武;薛振华;;多重PCR检测转基因奶牛方法的建立[A];动物检疫学分会2010年学术年会论文集[C];2010年
8 朱振营;林祥梅;刘建;吴绍强;仇松寅;李宁;王建武;薛振华;;转人溶菌酶基因奶牛多重PCR检测方法研究[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(上册)[C];2010年
9 黄柳华;李求兵;李天庆;徐亚平;程兰英;;中药“脑梗通”对脑缺血后血浆和脑组织中一氧化氮含量的影响[A];第五次全国中西医结合血瘀证及活血化瘀研究学术大会论文汇编[C];2001年
10 宋仁准;;线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的研究进展[A];全国针法灸法临床与科研学术研讨会暨脊柱病研究新进展论文汇编[C];2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王鑫;Pre-mRNA选择性剪接调控机制研究[D];哈尔滨工程大学;2009年
2 钟雪玉;补阳还五汤加味对缺血性中风大鼠模型作用机制探讨[D];山东中医药大学;2010年
3 黄宏兴;去卵巢大鼠肌骨线粒体活性变化及骨康方干预的实验研究[D];湖南中医药大学;2011年
4 牛召阳;RBM5蛋白在mRNA选择性剪接中作用机制的研究[D];北京协和医学院;2011年
5 李盈枝;X连锁特发性眼球震颤相关FRMD7基因新剪切变体的克隆及其在神经发育过程中相关功能的研究[D];浙江大学;2011年
6 赵荣兰;新发现甲状腺激素受体β亚型的研究[D];天津医科大学;2011年
7 周巧丹;Erbin对TGF-β1诱导肾小管上皮细胞转分化的作用和机制研究[D];华中科技大学;2012年
8 角建瓴;电针对中风模型大鼠神经内分泌与c-fos表达的影响[D];广州中医药大学;2000年
9 傅卫军;两个先天性凝血因子V缺陷症家系的临床和分子发病机制研究[D];第二军医大学;2002年
10 郝晋东;十二井穴针法治疗局灶性脑缺血机理的时效相关性研究[D];北京中医药大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 尹菊囡;多重巢式PCR同步检测HBV、HCV和HIV-1方法的建立[D];郑州大学;2010年
2 闫平平;致病性弧菌PCR-DHPLC检测及霍乱弧菌快速分型方法的建立[D];辽宁师范大学;2010年
3 蔡榕榕;癌症相关点突变共同定位的外显子剪接增强子(ESE)特征分析[D];辽宁师范大学;2010年
4 王海涛;果蝇14-3-3ξ基因选择性剪接机制的研究[D];浙江大学;2011年
5 温海滨;银杏叶提取物对过氧化氢诱导的肾小管上皮细胞凋亡的影响[D];桂林医学院;2010年
6 王洁;中国壮族家系指间区纹候选基因的连锁分析[D];广西医科大学;2011年
7 刘曼;多胺类化合物WJ01对PC12细胞拟缺血性损伤的保护作用及其机制研究[D];河南大学;2011年
8 孙鸿燕;四种食源性致病菌多重PCR检测方法的建立[D];吉林大学;2011年
9 叶芬;PRRSV、CSFV和PCV-2多重PCR诊断方法及基因芯片诊断方法的建立[D];西南大学;2011年
10 贾海涛;BAG-2基因沉默抑制人肺腺癌A549细胞增殖的研究[D];暨南大学;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 尹荣焕;尹荣兰;杨玉英;潘树德;苏振山;白文林;;PCR技术检测熟肉制品中沙门氏菌的研究[J];安徽农业科学;2006年02期
2 曲友直,高国栋,赵燕玲;川芎嗪、黄芪合用对脑缺血再灌注后脑组织c-jun蛋白表达影响[J];安徽中医学院学报;2000年06期
3 王健春,孙晓霞,杜大江,梁凯,郭忠钰;小鼠常压急性缺氧模型装置及其应用[J];动物学杂志;2003年02期
4 朱向红,王越晖,王心蕊,王溪原,倪劲松,吴家祥;高糖和缺氧对体外培养视网膜M üller细胞VEGF表达的影响[J];吉林大学学报(医学版);2003年02期
5 侯炯,王景阳,刘树孝;兴奋性氨基酸拮抗剂对离体皮质神经细胞缺氧损伤的保护作用[J];第二军医大学学报;1995年05期
6 许蜀闽,王培勇,马红英;连二亚硫酸钠在建立培养细胞的无氧环境中的应用[J];第三军医大学学报;2005年04期
7 胡成钰,谢宗波,张义兵,陈玉栋,邓政东,蒋珺,桂建芳;鲫鱼蛋白激酶PKR-like的Zα结构域与聚肌胞苷酸的结合[J];动物学研究;2005年03期
8 信照亮,杨庆余;鼠急性脑缺血的实验研究进展[J];国外医学.神经病学神经外科学分册;1991年02期
9 陈艳;付萍;;创伤弧菌检测方法的研究进展[J];国外医学(卫生学分册);2008年02期
10 罗建忠,朱文斌;脑缺血再灌注中补体激活的实验研究[J];医学临床研究;2003年06期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 蒋玉凤,潘彦舒,黄启福,张丹卉,贾旭,阎永彬,罗雪春,张日清;9602方对脑缺血再灌小鼠脑能量代谢的影响[J];中国病理生理杂志;2000年11期
2 毛颖,周良辅,杨国源;局灶性脑缺血后脑内髓过氧化物酶活性观察[J];中国神经精神疾病杂志;1999年06期
3 吴晓光;颜勇;许倩;金宏伟;;小鼠局灶性缺血再灌注模型的插线法试验(英文)[J];中国临床康复;2005年41期
4 元小冬,米振洲,伍期专;过氧化物所致的小鼠睡眠状态下脑缺血模型[J];脑与神经疾病杂志;1994年03期
5 元小冬,伍期专;过氧化物所致的小鼠睡眠状态下脑缺血模型[J];蛇志;1994年S1期
6 李梨,郭建增,周岐新,石京山;脑缺血再灌致小鼠学习记忆障碍模型的建立[J];重庆医科大学学报;2005年03期
7 赵士弟,杨卫东,汪洪涛;小鼠全脑缺血再灌注损伤模型的研究[J];蚌埠医学院学报;2004年02期
8 翁鸿博,马涛,刘玉兰;葛根黄豆苷元对脑缺血的保护作用及机制探讨[J];中国药理学通报;1999年06期
9 董丽萍,王天佑,徐立新,张莉;慢心律和苯妥英钠对小鼠缺氧及脑缺血的保护作用[J];中华神经外科杂志;1990年S1期
10 宋永斌,卫国,李楚芬,卢宁清;枸杞多糖对脑缺血再灌流小鼠的神经病症及卒中指数的影响[J];宁夏医学院学报;1995年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张孟仁;郭赛珊;徐惠媛;左萍萍;;脑复聪提高脑缺血小鼠记忆能力的机理研究[A];第四次全国中西医结合中青年学术研讨会论文集[C];2002年
2 俞月萍;徐秋琴;朱朝阳;朱也飞;张琦;魏尔清;;小鼠局灶性脑缺血后神经症状的时间过程及评价方法[A];第十一届全国神经药理学术会议论文摘要集[C];2004年
3 徐秋琴;俞月萍;张琦;张世红;朱朝阳;魏尔清;;半胱氨酰白三烯受体拮抗剂pranlukast对小鼠局灶性脑缺血的治疗作用[A];第十一届全国神经药理学术会议论文摘要集[C];2004年
4 陈丽萍;徐慧敏;赵炜;张世红;朱朝阳;张琦;余国良;储利胜;魏尔清;;脑表面摄影评价小鼠局灶性脑缺血后24小时内血脑屏障通透性变化[A];第三届浙江中西部科技论坛论文集(第一卷)[C];2006年
5 王华光;龙江;王玲;杨宝峰;;蚓激酶对脑缺血的保护作用[A];中国病理生理学会动脉粥样硬化专业委员会五届一次会议论文集[C];2002年
6 傅建华;杜贵友;;天麻促智颗粒对反复脑缺血再灌小鼠脑组织递质性氨基酸含量的影响[A];2002中药研究论文集[C];2002年
7 张孟仁;郭赛珊;徐惠媛;左萍萍;杨楠;;脑复聪对脑缺血小鼠脑内SOD和GSH-PX的影响[A];第五次全国中西医结合中青年学术研讨会论文汇编[C];2004年
8 嵇志红;于新宇;;益智仁水提取物对脑缺血大鼠记忆障碍的改善作用[A];“基因、进化与生理功能多样性”海内外学术研讨会暨中国生理学会第七届比较生理学学术会议论文摘要[C];2009年
9 邹良玉;褚晓凡;;环氧合酶-1基因缺失阻断褪黑激素对脑缺血的保护作用[A];第九次全国神经病学学术大会论文汇编[C];2006年
10 彭忠;周华东;邓娟;;川芎嗪对急性脑缺血大鼠白细胞与内皮细胞粘附性影响的实验研究[A];第五次全国中西医结合神经科学术会议论文集[C];2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;厚朴酚对脑缺血的保护作用[N];中国医药报;2003年
2 郑健刚;杜元灏;石学敏;针刺能增加脑缺血大鼠脑血流量[N];中国医药报;2005年
3 本报实习 生金平 本报记者 张咏晴;“乙肝小鼠”成人类替身[N];文汇报;2005年
4 谢涛 鲍冬生;神经介入可治疗脑缺血[N];家庭医生报;2006年
5 奇 云;单亲小鼠可能打开潘多拉魔盒[N];大众科技报;2004年
6 ;各方细说恩必普[N];医药经济报;2004年
7 记者 刘恕 刘霞;利用皮肤细胞培育出健康小鼠[N];科技日报;2009年
8 何德功;小鼠实验证明小脑严重缺乏亦能存活[N];医药经济报;2005年
9 特约记者 朱丽丽;颅内支架治疗脑缺血[N];健康时报;2003年
10 宿健桃;药用植物多糖类成分药理作用综述[N];中国中医药报;2002年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 徐静华;黄连解毒汤提取物对脑缺血动物的促智作用及机制探讨[D];沈阳药科大学;2000年
2 余路阳;Ⅰ.A20基因在脑缺血和I型糖尿病中的抗凋亡作用 Ⅱ.异种移植中针对Gal alpha 1,3 Gal修饰基因的研究[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2005年
3 潘殿卿;神经保护剂鸡尾酒疗法对大鼠脑缺血的保护作用[D];河北医科大学;2003年
4 朱巍;转基因神经干细胞移植对脑缺血后神经血管保护作用的研究[D];复旦大学;2003年
5 田京伟;20(S)-人参皂苷Rg_3抗脑缺血作用研究[D];中国海洋大学;2005年
6 刘建仁;神经节苷脂GM1对大鼠脑缺血的保护作用及其机制的研究[D];浙江大学;2003年
7 曲友直;神经保护剂联合应用对局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制研究[D];第四军医大学;2004年
8 朱继;神经球蛋白对脑缺血中神经细胞保护作用的实验研究[D];重庆医科大学;2007年
9 苏凤哲;中风康对局灶性脑缺血大鼠血脑屏障保护作用的研究[D];河北医科大学;2005年
10 任建勋;莱格注射液对脑缺血保护作用与血脑屏障调节机制的实验研究[D];成都中医药大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 黄真;归芪饮对小鼠急性脑缺血的保护作用[D];浙江大学;2004年
2 徐慧敏;小鼠局灶性脑缺血后24小时内脑水肿及血脑屏障通透性的变化[D];浙江大学;2004年
3 徐秋琴;小鼠局灶性脑缺血的神经行为和组织损伤的评价[D];浙江大学;2002年
4 陈科达;黄芩苷对小鼠脑片和大鼠皮质神经元缺氧缺糖/再灌损伤的保护作用[D];浙江大学;2006年
5 杨丽;重组人核糖核酸酶抑制因子对小鼠脑缺血的抗氧化保护作用及其抗肿瘤的研究[D];大连医科大学;2007年
6 丁品胜;中药对脑缺血啮齿动物模型海马细胞内钙离子及皮层一氧化氮合酶活性的影响[D];军医进修学院;2001年
7 李卉;芦荟多糖对脑缺血保护作用的研究[D];黑龙江中医药大学;2009年
8 何萍;小鼠皮层纹状体脑片缺糖缺氧后处理保护模型的建立及其机制研究[D];浙江大学;2010年
9 马勇智;中风胶囊对实验性缺血脑损伤的影响[D];河北医科大学;2005年
10 郭立斌;依达拉奉对大鼠局灶性脑缺血Caspase-3、Bcl-xl表达影响的实验研究[D];吉林大学;2005年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026