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《西北农林科技大学》 2010年
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小麦类脱水素基因wzy2的克隆及在毕赤酵母中的功能分析

朱维宁  
【摘要】: 脱水素(dehydrins,Dhns)是属于LEA-Ⅱ蛋白家族,分子质量范围为9~200kD,广泛存在于高等植物中的干旱诱导蛋白,在种子成熟的脱水耐受过程中发挥重要作用。在当植物组织处于干旱、盐等逆境情况下或种子成熟时,脱水素就会大量积累。脱水蛋白是植物对干旱胁迫的一种适应性的保护反应。脱水蛋白结构特征决定了其在保护细胞生物膜和蛋白质结构的完整性和稳定性方面具有重要作用。 本研究以郑引1#小麦为材料,根据本实验室已得到的脱水素基因序列,设计引物Fw1/Aw2,进行小麦脱水素基因wzy2 cDNA全长序列的克隆,并转化到真核生物酵母中表达,揭示小麦类脱水素基因表达与其抗逆性的关系,进而为这类基因在逆境胁迫下的调控机制及其诱导转录因子等深入研究奠定基础。 通过以上研究,取得以下主要结果: 1.从郑引1#小麦中获得脱水素基因wzy2 cDNA全长序列,该基因全长为819bp,其含有1个459bp开放阅读框(ORF),编码152个氨基酸,其编码的蛋白具有类脱水素结构典型特征(K片断),由1个Y片段、1个S片段和2个K片段组成,属于YSK2型类脱水素。 2.利用生物信息学软件对小麦脱水素基因wzy2编码的蛋白序列进行分析,可知该蛋白是一种中性蛋白质,分子量为15.5kDa,等电点pI为7.17;该蛋白缺少半胱氨酸(Cys)和色氨酸(Trp),富含甘氨酸(Gly)、苏氨酸(Thr)、赖氨酸(Lys)、谷氨酰胺(Gln)和组氨酸(His)等亲水性极性氨基酸;二级结构预测结果表明:该编码蛋白存在跨膜域,可能是脱水素K片段形成的兼亲性α-螺旋与部分蛋白质及膜脂结合,束缚细胞中游离水,稳定细胞膜结构。 3.通过载体构建、电转化及筛选(依次为:His+、G418)鉴定获得了含有wzy2的毕赤酵母GS115阳性重组菌;用甲醇诱导表达后进行SDS-PAGE、Western blotting鉴定,进一步证实了该基因已成功转入毕赤酵母GS115中,并获得了高效特异分泌表达。 4.对转wzy2基因的毕赤酵母GS115重组子分别进行耐旱性及冰冻耐受性分析,当NaCl高于0.8mol/L,山梨醇高于1.6mol/L时,wzy2基因能显著提高转基因酵母在盐和干旱胁迫条件下的生长情况,而在低温胁迫条件下,转wzy2的酵母细胞存活率为37.83%±9.26%,转空载体pPIC9K的酵母细胞存活率为32.85%±6.33%,二者细胞存活率差异性不显著。进一步证明了YnSK2型脱水素可被干旱胁迫诱导,而不被低温诱导。
【学位授予单位】:西北农林科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:Q786

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 谭晓荣;吴兴泉;伏毅;戴媛;;干旱及复水对小麦幼苗蛋白质损伤的影响[J];安徽农业科学;2006年16期
2 吴志华,曾富华,马生健,林丽静,谢耀坚,卢向阳;ABA对PEG胁迫下狗牙根可溶性蛋白质的影响[J];草业学报;2004年05期
3 赵丽英,邓西平,山仑;活性氧清除系统对干旱胁迫的响应机制[J];西北植物学报;2005年02期
4 孙宪芝;郑成淑;王秀峰;;木本植物抗旱机理研究进展[J];西北植物学报;2007年03期
5 张晓娟;张林生;杨颖;;水分胁迫下小麦类脱水素基因表达的半定量RT-PCR分析[J];西北植物学报;2007年11期
6 赵雅静;翁伯琦;王义祥;徐国忠;;植物对干旱胁迫的生理生态响应及其研究进展[J];福建稻麦科技;2009年02期
7 唐元家,余柏松;巴斯德毕赤酵母表达系统[J];国外医药(抗生素分册);2002年06期
8 栗雨勤,张文英,王有增,李运朝,刘桂茹,谷俊涛,周进宝;作物抗旱性鉴定指标研究及进展[J];河北农业科学;2004年01期
9 张华,刘子会,马春红,崔四平,郭秀林;干旱胁迫下玉米木质部汁液pH和ABA含量变化及其与气孔关系[J];河北农业科学;2004年02期
10 沈波,李云荫;不同浓度脱落酸对冬小麦干旱诱导蛋白的影响[J];华北农学报;1994年S1期
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 刘瑞香;沙棘(Hippophae)土著种和外来种对干旱胁迫的生态适应性分析[D];内蒙古大学;2005年
2 张瑞萍;脱水素基因逆境表达模式与白桦遗传转化研究[D];东北林业大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前7条
1 杨瑞丽;荒漠旱生小灌木劈裂生长的形态发生及其适应机制的比较研究[D];内蒙古大学;2004年
2 陈娟;六种野生灌木的抗旱性研究及园林应用[D];四川农业大学;2005年
3 史婧;蛇毒纤溶酶Alfimeprase在毕赤酵母中的表达、纯化及活性鉴定[D];西北农林科技大学;2007年
4 张晓娟;干旱胁迫下小麦类脱水素基因WZY1-1的表达与部分生理生化参数的关系[D];西北农林科技大学;2007年
5 黄发平;水分胁迫下小麦脱水素基因wzy2的RACE克隆及游离氨基酸的研究[D];西北农林科技大学;2008年
6 任海清;猪防御素1基因在毕赤酵母中的表达[D];东北农业大学;2009年
7 于茜;水分胁迫下小麦叶片脱水素的表达与抗氧化系统的研究[D];西北农林科技大学;2009年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 吴静;李玉峰;宋敏训;黄兵;马秀丽;李峰;;鸡α-干扰素在毕赤酵母中的分泌表达、纯化及其抗病毒活性测定[J];山东农业科学;2006年01期
2 杨春玲;关立;侯军红;王阔;宋志均;韩勇;李晓亮;陈玉香;;小麦抗旱育种及水分高效利用育种问题探讨[J];山东农业科学;2007年06期
3 杨晓玉;王秀峰;胡淳淳;杨凤娟;魏珉;;硝酸盐胁迫对黄瓜幼苗根系及叶片呼吸速率的影响[J];山东农业科学;2008年03期
4 洪晓晓;于晓英;;园林地被植物抗旱机制研究进展[J];山东农业科学;2009年05期
5 孙爱清;万勇善;刘凤珍;张昆;秦兴国;;干旱胁迫对不同花生品种光合特性和产量的影响[J];山东农业科学;2010年10期
6 王淑玲;周海燕;;耐热性不同的番茄品种荧光特性和抗氧化体系对高温胁迫的响应[J];山东农业科学;2011年03期
7 田寿乐;许林;沈广宁;孙晓莉;;红蜘蛛不同防治效果对板栗生长结实的影响[J];山东农业科学;2012年04期
8 程建峰;何冬发;刘宜柏;潘晓云;汪有生;;杂交稻新组合产量及其抗旱性的鉴定与评价[J];安徽农学通报;2007年01期
9 杨小兰;;植物抗旱基因工程研究进展[J];安徽农学通报;2007年20期
10 田华;王兰;段美洋;黎国喜;;水稻抗旱性机理的研究进展[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年11期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 聂琼;谢深喜;赵晓莉;;水分胁迫下植物ABA合成及关键调控酶基因的研究进展[A];园艺学文集5[C];2010年
2 徐红霞;陈俊伟;;枇杷果实DHN基因克隆及其在低温胁迫下的表达分析[A];第五届全国枇杷学术研讨会论文(摘要)集[C];2011年
3 张淑琼;曾思遥;高娟;陈瑞爱;罗满林;;犬IFN-α优化基因的真核表达及抗病毒活性的研究[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
4 王景会;姜媛媛;李玉秋;李达;杨贞耐;;微小毛霉凝乳酶基因的克隆及在毕赤酵母中的重组表达[A];首届中国奶业大会论文集(下册)[C];2010年
5 杜建;赵俊兴;饶慧斌;贾涛;李胄;安成立;易永华;孙茂全;;抗虫杂交棉GKZ1、GKZ2在陕西生态条件下节水技术初报[A];’2003中国作物学会学术年会文集[C];2003年
6 白志英;李存东;孙红春;;小麦染色体代换系的研究进展[A];作物逆境生理研究进展——中国作物生理第十次学术研讨会文集[C];2007年
7 杜健;吴普特;冯浩;王炳荣;陈军;高朝;王成;王丽;;棉花抗旱种质创新及生态节水机理研究进展[A];中国作物学会2007年学术年会论文集[C];2007年
8 杨曌;李红;张新全;李向林;万里强;;湘西南湿热地区不同秋眠级紫花苜蓿根系形态和生理生化性状综合评价[A];中国草学会饲料生产专业委员会第十六次学术研讨会论文集[C];2011年
9 杜健;吴普特;冯浩;王秉荣;王成;王丽;;气候干暖化棉花抗旱种质创新及生态节水机理研究[A];节能环保 和谐发展——2007中国科协年会论文集(三)[C];2007年
10 武香;倪建伟;张华新;刘涛;张丽;;盐胁迫对3种白刺生理指标的影响[A];第十三届中国科协年会第16分会场-沿海生态建设与城乡人居环境学术研讨会论文集[C];2011年
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1 徐荣燕;嗜热真菌糖苷酶的基因克隆、表达与分子改造[D];山东农业大学;2010年
2 杨守军;根系调控对枣树(冬枣)生长及代谢影响的效应研究[D];山东农业大学;2010年
3 冯福学;不同耕作措施对绿洲灌区冬小麦“根土系统”的影响[D];甘肃农业大学;2010年
4 种培芳;荒漠植物红砂、白刺和沙拐枣抗旱指标及抗旱性综合评价研究[D];甘肃农业大学;2010年
5 王齐;中水灌溉对城市绿地生态系统的影响及安全性评价[D];甘肃农业大学;2010年
6 李玉华;高山离子芥再生苗响应低温和干旱的生理机制研究[D];兰州大学;2010年
7 张妙霞;野生香蕉(Musa spp., AB group)抗寒相关基因的克隆与表达分析[D];福建农林大学;2010年
8 鲁为华;短期围栏封育下退化绢蒿荒漠草地更新特征研究[D];新疆农业大学;2010年
9 王海兰;乔木体水分的测试技术及其监测系统的研究[D];北京林业大学;2011年
10 李望丰;SsNHX1基因在紫花苜蓿中的表达及其耐盐性研究[D];东北师范大学;2010年
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1 赵付伟;猪Ⅲ型干扰素IFN-λ1的克隆、表达和抗病毒活性研究[D];华中农业大学;2010年
2 吴娟;印度酸橘CrNCED3基因的克隆与功能鉴定[D];华中农业大学;2010年
3 黄聪;花生中DREB、bZIP类转录因子耐逆性研究[D];哈尔滨师范大学;2010年
4 李晓东;茶树体细胞胚发生的影响因素及超微结构和几种内含物质变化的研究[D];山东农业大学;2010年
5 于丽萍;玉米种子胚特异性启动子emb5的功能分析[D];山东农业大学;2010年
6 郭晓红;嗜热毛壳菌热稳定脂肪酶的基因克隆、表达及性质研究[D];山东农业大学;2010年
7 吴耀领;抗旱型与丰产型小麦品种对干旱高温胁迫的响应[D];山东农业大学;2010年
8 王悦琳;过表达玉米ZmMPK7转基因烟草耐盐性研究[D];山东农业大学;2010年
9 仲伟磊;引入新的二硫键对植酸酶结构和功能的影响[D];山东农业大学;2010年
10 杨玫;拟南芥核转运受体家族分析及AtIMPα1和AtIMPα2的功能研究[D];山东农业大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王列富;杨玉珍;彭方仁;;干旱胁迫对不同种源香椿苗木膜脂过氧化作用的影响[J];安徽农业科学;2008年01期
2 柳建国,柯建国,陈长青,张斌,张桃林;作物体内游离脯氨酸含量与耐旱性[J];安徽农业科学;1998年04期
3 范秉琳,朱武凌,邹国林,雒国胜,许春雷,赵卫星;人肝癌细胞差异表达基因纤维蛋白原γ-多肽的克隆与鉴定[J];癌症;2004年03期
4 贾素娟,路福平,王昌禄,杜连祥;生物抗菌多肽[J];氨基酸和生物资源;2000年04期
5 刘绍洪;赵九洲;;园艺植物水分胁迫的调节机制[J];北方园艺;2006年04期
6 毛建平,孙志贤;蛇毒纤维蛋白原水解酶[J];动物学杂志;1997年02期
7 尹伟伦;不同种类杨树苗木的生长和光合性能的比较研究 Ⅱ 净光合速率、光呼吸和Hill反应等光合性能指标[J];北京林学院学报;1983年02期
8 张晓英,尹伟伦,朱祯,王华芳;抗生素对国槐愈伤组织诱导和生长的影响[J];北京林业大学学报;2004年06期
9 姚允聪,曲泽洲,李树仁,张瑞,赵玉田;不同浇水处理过程中柿幼树SOD、CAT和脂质过氧化作用的变化[J];北京农学院学报;1994年01期
10 赵金梅,周禾,王秀艳;水分胁迫下苜蓿品种抗旱生理生化指标变化及其相互关系[J];草地学报;2005年03期
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 杨国峰;毕赤氏酵母/hGM-CSF工程菌的构建及表达分析[D];华南热带农业大学;2001年
2 王君丹;脱水素基因转化的矮牵牛对干旱胁迫的反应[D];东北农业大学;2004年
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1 张冬梅,潘卫庆,陆德如;恶性疟裂殖子表面蛋白1合成基因在毕赤酵母中的表达[J];生物工程学报;2000年06期
2 冮宏映,李洪钊;一种获取巴斯德毕赤酵母高拷贝重组子的新方法[J];生物技术;2003年02期
3 杨梦华,李颖,关国华,江正强;极端耐热木聚糖酶基因在大肠杆菌和毕赤酵母中的高效表达[J];微生物学报;2005年02期
4 李洪淼;王红宁;许钦坤;;重组巴斯德毕赤酵母高密度发酵表达植酸酶[J];中国生物工程杂志;2005年S1期
5 杨莉莉;贺巾超;马杰;范伟全;王建秋;魏传宇;颜浩为;颜炜群;;PHOⅠ信号肽在毕赤酵母中引导分泌表达天然N-端rBPTI[J];吉林大学学报(医学版);2005年06期
6 董杜鹃;扈进冬;张新昌;李子劲;王金星;赵小凡;;棉铃虫组织蛋白酶B酶原在毕赤酵母中的表达[J];中国生物工程杂志;2006年02期
7 乔宇;陈小兵;丁宏标;岳明;;甘露聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达及酶学性质研究[J];中国生物工程杂志;2006年07期
8 王隆飞;方园园;陈功;博涛;侯健华;杨少辉;李桂兰;李欣;李明刚;;产人胰岛素毕赤酵母工程菌的构建[J];南开大学学报(自然科学版);2006年05期
9 丁镌;宋跃芬;袁野;刘娣;;毕赤酵母表达外源基因存在的问题与对策[J];畜牧与兽医;2007年02期
10 徐煌;韩冬;王芳;钟辉;周秋丽;颜炜群;;人热休克蛋白110在毕赤酵母中的表达及鉴定[J];中国老年学杂志;2007年08期
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1 仝光杰;楼觉人;;HPV52 L1蛋白在毕赤酵母中的优化表达[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年
2 金光泽;段作营;张莲芬;金坚;李华钟;;重组融合人血清白蛋白/人白介素-2 C125A突变体在毕赤酵母中的表达[A];2008年中国微生物学会学术年会论文摘要集[C];2008年
3 崔栩;曹云鹤;;两种β-甘露聚糖酶基因在毕赤酵母中的共表达研究[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
4 周宇飞;袁汉英;吕红;;人超氧化物歧化酶-胸腺素α1在毕赤酵母中的表达、纯化与活性检测[A];2012年中国青年遗传学家论坛会议文集[C];2012年
5 傅小强;吴少庭;黄汉菊;刘洪波;;结核杆菌ESAT-6基因在毕赤酵母中表达及其鉴定[A];全国寄生虫学与热带医学学术研讨会论文集[C];2006年
6 王宏伟;金宁一;;抗HIV—1gp120单链抗体基因的克隆及其在毕赤酵母系统中的表达[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年
7 汤丹;刘松财;史勇;李莉;张英;郝林琳;;甜味蛋白Brazzein在毕赤酵母中的表达[A];全国动物生理生化第十次学术交流会论文摘要汇编[C];2008年
8 苏曼曼;许天敏;王毅;宿晓云;颜炜群;;重组人载脂蛋白E3在毕赤酵母中的表达与鉴定[A];吉林省第六届生命科学大型学术报告会论文集[C];2008年
9 廖娟;王红宁;田浪;阳泰;张毅;;禽传染性支气管炎病毒M基因在毕赤酵母中表达与蛋白反应活性检测[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十四次学术研讨会论文集[C];2008年
10 刘高科;何莉;杨永涛;汪正清;;人补体受体1型活性片段SCR15-18在毕赤酵母中的表达、纯化及活性鉴定[A];2008年中国微生物学会学术年会论文摘要集[C];2008年
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1 记者  范建;毕赤酵母能“吃掉”多种有机磷农药[N];科技日报;2006年
2 ;基因科学的耕耘者[N];上海科技报;2008年
3 董丹 刘昱辉 吴元华;基因工程生产降钙素研究方兴未艾[N];中国医药报;2007年
4 丛秀明;有机磷农药降解酶制剂制成[N];中国化工报;2006年
5 戴炳仁;我国发明果蔬迅速脱毒生物技术[N];中国国门时报;2006年
6 刘晴;有机磷农药降解酶制剂[N];农村医药报(汉);2006年
7 记者 陈卫东;我破解基因工程产业化难题[N];科技日报;2007年
8 周铮;我国研制成功"有机磷农药降解酶制剂"[N];农民日报;2006年
9 记者 朱永坤;有机磷农药降解酶研制步入工业化[N];农资导报;2007年
10 王春;观念创新对接纽带[N];科技日报;2005年
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1 卢忠民;IL-18 RGD模体的构建及生物活性的研究[D];大连医科大学;2005年
2 刘堰;重组人白介素-2(IL—2)突变体克隆及在巴斯德毕赤酵母系统中的表达与纯化[D];重庆大学;2002年
3 马杰;人HSP70在毕赤酵母中的表达鉴定及大规模发酵和纯化工艺研究[D];吉林大学;2005年
4 万榕;蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂(sv-cystatin)抗黑色素瘤细胞侵袭与转移的作用[D];福建医科大学;2005年
5 杨莉莉;重组牛胰蛋白酶抑制剂的研究[D];吉林大学;2006年
6 王海燕;荧光假单孢菌脂肪酶基因的克隆、改造及其在毕赤酵母中的表达[D];中国农业科学院;2006年
7 陈伟莉;重组人TRAIL的制备和抗肿瘤作用的研究[D];吉林大学;2007年
8 高敏杰;基于智能工程和代谢调控的毕赤酵母发酵过程控制研究[D];江南大学;2012年
9 吴丽娟;重组人A20的分子设计及酵母表达研究[D];重庆医科大学;2004年
10 樊建勇;人源性抗角蛋白抗体的高效表达及其作用研究[D];第四军医大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 朱维宁;小麦类脱水素基因wzy2的克隆及在毕赤酵母中的功能分析[D];西北农林科技大学;2010年
2 牛超;重组人弹力素大规模发酵工艺的优化[D];吉林大学;2010年
3 翟立公;Spinigerin a抗菌肽基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达[D];吉林农业大学;2011年
4 李洋;重组人FGF-2的制备及活性研究[D];吉林大学;2010年
5 陈丽;多拷贝毕赤酵母重组菌表达PIP生理特性和动力学研究[D];华东理工大学;2011年
6 王少然;二硫键对菌丝霉素抗菌活性的影响及菌丝霉素聚体在毕赤酵母中的表达[D];中国农业科学院;2011年
7 李昆鹏;重组猪生长素基因工程菌培养基优化及高密度液体发酵研究[D];兰州理工大学;2011年
8 吴殿君;重组奶牛神经肽Y基因在毕赤酵母中的分泌表达及生物学活性分析[D];吉林大学;2011年
9 刘琨;酵母Bir1p同源物Survivin对毕赤酵母的分子重组与生长影响[D];华东理工大学;2010年
10 王志强;内切葡聚糖酶基因的克隆及其在毕赤酵母GS115中的表达[D];郑州大学;2010年
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