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《西北农林科技大学》 2010年
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用原生质体融合改良非致病性尖镰孢FO47

李春玲  
【摘要】: 在病害生物防治中,首先从自然界中筛选出生防效果较好的菌株,但这些野生菌株在进化过程中表现出防病效果不稳定、抗逆性差等特点,因此,需要对其进行改良,以提高其生防效果,增强对环境的适应性。非致病性尖镰孢FO47是生防真菌,能有效防治由尖镰孢引起的多种寄主植物枯萎病,对植株生长有促进作用,但对多菌灵敏感。放线菌153对抗生素和杀菌剂表现较强的耐受性,且定殖能力强。为了提高FO47的综合性状,本试验采用原生质体融合对FO47和放线菌153进行融合,试图将二者的优良性状集中到几个菌株上,以期获得高效的生防菌株。本论文主要包括以下3部分: 1.确定了亲本原生质体形成与再生的最适条件:亲本153采用二次培养法,在含20%蔗糖的菌丝培养液中,25℃,150rpm条件下培养48h,按10%接种量接种到含30%蔗糖和0.5%甘氨酸的菌丝培养液中,继续培养24h。在35℃条件下,用7.5mg/mL溶菌酶和7.5mg/mL蜗牛酶按体积比1:1混合酶解菌株153,用10mg/mL蜗牛酶和5mg/mL溶壁酶按体积比1:1混合酶解FO47,分别酶解120min,此时,FO47和153的原生质体形成率和再生率之积最大,酶解效果最理想。在55℃条件下,菌株FO47和153原生质体最适热灭活时间分别为15min和20min;二者最适紫外灭活时间分别为5min和15min;用40kHz,200W超声波处理原生质体,FO47和153原生质体分别在处理10min和15min时致死率分别为99%。 2.根据以上的优化条件,建立了一套较完善的融合体系。按照不同处理的组合方式将亲本的原生质体等量混合,35%PEG6000助融10min,28℃暗培养再生,依据菌丝的颜色和形态、可溶性色素的有无及颜色等培养特征和生长速率的差异,筛选出14株比FO47生长速率快的再生菌株。 3.再通过对西瓜苗期枯萎病的防效、对西方幼苗生长发育的影响、在棉花、黄瓜和西瓜植株体内的定殖能力、分泌赤霉素能力和抗药性试验对初筛菌株进行复筛,筛选出3株对西瓜枯萎病防效有所提高的再生菌株,其中菌株F1-35和F1-38能够促进西瓜幼苗生长,其分泌赤霉素能力与其促生作用呈正相关。菌株F1-1和F1-35在棉花、黄瓜和西瓜3种作物组织内有较强的定殖能力。菌株F1-4比FO47和西瓜枯萎菌的抗药性高。 本试验研究了生防真菌和土壤放线菌之间的原生质体融合,灭活与诱变相结合对非致病性尖镰孢FO47的综合性状进行改良,获得了生防效果较好的菌株,为土传病害生物防治,特别是枯萎病防治提供新思路。
【学位授予单位】:西北农林科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S476.1

【参考文献】
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