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《陕西师范大学》 2017年
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苯并(α)芘诱导肝损伤过程中细胞自噬及焦亡的作用研究

刘俊义  
【摘要】:肝脏是人体腹腔内最大的实质性器官,肝损伤是引起肝脏疾病的主要原因,其中食品里的有害成分(如苯并(α)芘)引起的肝损伤不容忽视,对其研究可为预防肝病的发生提供科学依据。苯并(α)芘是油脂食品加工过程中产生的一种常见的多环芳烃类化合物,广泛存在于各种油脂食品中。苯并(α)芘除了是一种公认的致癌物外,还具有很强的免疫毒性、神经毒性以及生殖毒性;它可通过诱导细胞DNA损伤、线粒体功能障碍、氧化应激等诱发机体损伤,进而损害健康。细胞自噬是细胞在恶劣条件下确保其生存的基本应激反应,主要通过降解自身异常或过多细胞器和蛋白质来实现自身新陈代谢与更新平衡,细胞自噬失衡则会诱导细胞死亡。细胞焦亡是一种依赖caspase-1激活,进而伴有大量促炎症因子释放的细胞死亡方式。食品中的苯并(α)芘是否也可通过这两种方式损伤机体健康目前尚不明确。本文以苯并(α)芘为研究对象,选用人HL-7702肝细胞建立模型,利用生化技术,在细胞水平上探讨苯并(α)芘对HL-7702肝细胞活力、细胞自噬、细胞焦亡等方面的影响;并通过细胞自噬及焦亡抑制剂探究苯并(α)芘诱导人HL-7702肝细胞产生自噬及焦亡的关系。主要研究结果如下:(1)通过MTT、染色试验、流式细胞仪分析、荧光探针DCFH-DA检测等研究了苯并(α)芘对人HL-7702肝细胞活力的影响。结果表明,苯并(α)芘可极显著地影响人HL-7702肝细胞的活力,并具浓度和时间依赖性;50 μM的苯并(α)芘作用于HL-7702人肝细胞24 h和48 h后,细胞活力极显著地降低,仅有71%和75%。通过台盼蓝染色试验可以明显看出,经苯并(α)芘处理后细胞死亡率随苯并(α)芘的浓度升高而逐渐升高。流式细胞仪分析结果显示,苯并(α)芘可以将HL-7702人肝细胞的细胞周期阻滞在S期,晚期凋亡及坏死细胞的数量显著性增多,细胞内活性氧ROS水平显著性增加。由此可知,苯并(α)芘可以通过阻滞HL-7702肝细胞的周期、诱发细胞凋亡和细胞内活性氧增加的方式抑制HL-7702肝细胞增殖。(2)通过荧光染色、透射电镜等研究了苯并(α)芘对HL-7702肝细胞自噬的影响。AO和MDC荧光染色结果显示,经苯并(α)芘处理后的HL-7702肝细胞内AO和MDC荧光亮斑强度随苯并(α)芘处理浓度升高而逐渐增强;透射电镜结果显示,当苯并(α)芘的处理浓度增加时,HL-7702肝细胞中自噬泡的数量会逐渐增多,当苯并(α)芘处理浓度增加到50μM时,观察到了自噬泡吞噬高尔基体的现象;同时,苯并(α)芘处理HL-7702肝细胞后,自噬特征指标Beclin-1和LC-3表达量显著性增加,且呈现浓度依赖性。试验结果证明,苯并(α)芘可以诱导HL-7702肝细胞产生自噬性损伤,且自噬程度与苯并(α)芘处理浓度呈正相关关系。(3)通过生化技术及Westorn-blot等研究苯并(α)芘对HL-7702人肝细胞焦亡的影响。苯并(α)芘处理HL-7702肝细胞后,细胞相对电导率、NO释放量、LDH释放率显著性升高;同时苯并(α)芘可以显著提高HL-7702肝细胞内焦亡特征指标Caspase-1、COX-2、IL-1β、IL-18的蛋白表达量,且呈浓度依赖性。试验结果证明,苯并(α)芘可诱导HL-7702肝细胞产生焦亡性损伤,且焦亡程度与与苯并(α)花处理浓度呈正相关关系。(4)通过Westorn-blot等进一步探究了苯并(α)芘诱导HL-7702产生的细胞自噬和细胞焦亡之间的关系。HL-7702人肝细胞通过细胞自噬特异性抑制剂(3-Methyladenine)处理后,再经苯并(α)芘处理,其相对电导率、NO释放量、LDH释放率与苯并(α)芘单独处理组相比显著性延缓,且HL-7702人肝细胞内Caspase-1、COX-2、IL-1β、IL-18的表达量显著性降低;通过细胞焦亡特异性抑制剂(Ac-YVAD-CMK)处理后,AO染色发现,与苯并(α)芘单独处理组相比,细胞内荧光强度降低,HIL-7702肝细胞内Beclin-1和LC3蛋白表达量显著性降低。以上试验结果表明,当苯并(P)芘诱导的HL-7702肝细胞自噬被抑制时,其诱导的细胞焦亡也被抑制;与此同时,当苯并(P)芘诱导的HL-7702肝细胞细胞焦亡被抑制时,其诱导的细胞自噬也被抑制。说明苯并(P)芘可同时诱导HL-7702肝细胞产生细胞自噬和细胞焦亡,且二者相互促进。本研究较全面地研究了苯并(P)芘对HL-7702人肝细胞活力、细胞自噬和焦亡的影响,并深入探究了两者之间的关系,为深入揭示食品有害物质苯并(P)芘的毒性机制,建立高效完善的防范措施提供科学依据。
【学位授予单位】:陕西师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:TS201.6

【参考文献】
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1 邱珍;夏中元;周斌;;细胞焦亡的研究进展[J];医学综述;2016年15期
2 刘岳衡;王慧;;细胞焦亡:程序性死亡研究新热点[J];临床与病理杂志;2016年07期
3 王亚萍;;苯并[a]芘含量测定的前处理方法研究进展[J];安徽农业科学;2016年11期
4 祁会丽;姚丽芬;;细胞焦亡激活机制及相关疾病研究进展[J];中华实用诊断与治疗杂志;2016年05期
5 夏朋延;王硕;范祖森;;细胞自噬与免疫研究进展[J];生命科学;2016年02期
6 梁磊;林静;李秀红;王毅;酉鹏华;陈海潮;杨征;;氧化型低密度脂蛋白诱导人巨噬细胞焦亡的体外研究[J];临床心血管病杂志;2015年12期
7 李泽君;呼丹;熊克朝;吴纯启;丁日高;王茜莎;王全军;;活性氧与线粒体损伤研究概述[J];中南药学;2014年10期
8 熊珊珊;石英英;石汉平;;活性氧与肿瘤研究进展[J];中华肿瘤防治杂志;2014年13期
9 花芳;余娇娇;李珂;胡卓伟;;自噬影响衰老及老年病的研究进展[J];药学学报;2014年06期
10 冉茂良;高环;尹杰;陈斌;;氧化应激与DNA损伤[J];动物营养学报;2013年10期
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1 ;我国乙肝表面抗原携带者9300万人[N];中国中医药报;2008年
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1 焦丽;iPLA_2β对于ConA和DSS诱导的免疫性肝损伤和肠损伤的保护作用及其机制的研究[D];吉林大学;2016年
2 杨依霏;Mt功能变化和焦亡相关蛋白表达在HEV致肝脏损伤中的作用[D];中国农业大学;2015年
3 方妮;TRIB3参与内质网应激诱导的胰岛β细胞凋亡机制的研究[D];北京协和医学院;2014年
4 袁莉;异荭草素对HepG2人肝癌细胞凋亡和自噬的作用及机制研究[D];西北农林科技大学;2014年
5 王静;地肤子皂苷对HepG2人肝癌细胞凋亡和迁移侵袭的影响及其作用机制研究[D];西北农林科技大学;2014年
6 卢静;小鼠肝损伤动物模型的建立及在束缚应激研究中的应用[D];中国农业大学;2013年
7 郗艳丽;没食子酸诱导肺癌细胞凋亡机制及其应用的研究[D];吉林大学;2012年
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1 贾蕊鸿;马铃薯立枯丝核菌毒素对植株细胞膜伤害机理的研究[D];甘肃农业大学;2016年
2 陈海燕;镉暴露激活NLRP3炎症小体引起血管内皮细胞焦亡[D];川北医学院;2016年
3 刘敏;吖啶橙荧光染色法检测肾癌循环肿瘤细胞及其临床意义[D];天津医科大学;2015年
4 靳梦醒;细胞自噬对oxLDL诱导巨噬细胞焦亡(pyroptosis)的影响及机制[D];安徽医科大学;2014年
5 杨欢欢;壳寡糖诱导Hela、A549细胞凋亡和自噬的研究[D];河北大学;2013年
6 孙政;苯并(a)芘对人支气管上皮细胞BEAS-2B线粒体损伤的研究[D];昆明医科大学;2012年
7 陈曌君;苯并芘诱导HeLa细胞DNA损伤的核蛋白组学分析[D];浙江大学;2012年
8 王春光;苯并(a)芘暴露对真鲷(Pagrus major)细胞DNA的损伤及肝脏P4501A1的毒性效应[D];厦门大学;2006年
【共引文献】
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1 吴一凡;吴攀;张瑞雪;张翅鹏;梁隆超;熊易;;高砷煤矿区大金发藓生化指标反映砷氧化应激特征[J];生态学杂志;2018年06期
2 沈文祥;周晓静;何寒姣;黄丽瑾;李燕琳;吴桂明;杜玉兰;何宝祥;;奶牛乳清H_2O_2水平的检测及意义评价[J];畜牧与兽医;2018年06期
3 刁志君;姜宏;刘锦涛;;细胞自噬对腰椎间盘突出后重吸收的意义[J];中国骨伤;2018年04期
4 郑佳洪;朴金梅;蒋梦会;苏涛;宋扬;崔莲花;;铜对H22荷瘤小鼠肿瘤生长及肝功能和免疫功能的影响[J];精准医学杂志;2018年02期
5 魏艳红;王慧平;高云芳;;冬眠哺乳动物氧化应激产生及抗氧化防御机制研究进展[J];动物学杂志;2018年02期
6 孙银铁;郭开今;蔡红星;;NOD2、NLRP3在石膏关节制动法建立兔膝骨性关节炎模型关节软骨中的表达[J];中国组织工程研究;2018年08期
7 辛文妤;韦珍妮;张颖;孙宇;张丹;;雷公藤红素对巨噬细胞焦亡的影响[J];中草药;2018年05期
8 石明霞;谢美玉;郭顺利;周素芳;;细胞焦亡发生机制及其相关疾病的研究进展[J];山东医药;2018年09期
9 李孟伟;梁辛;李丽莉;杨承剑;梁贤威;;热应激对水牛生产性能和健康的影响及其作用机制[J];动物营养学报;2018年03期
10 孙莹;崔莹莹;;食品烹饪加工过程中苯并(a)芘检测方法及控制措施的研究进展[J];食品安全质量检测学报;2018年03期
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1 石蕊寒;HEV对沙鼠和兔脑脊髓损伤作用及其机制[D];中国农业大学;2017年
2 吴桥兴;猪源HEV-4人工感染新西兰兔的研究[D];中国农业大学;2017年
3 张艳;绿豆促进拟茎点霉代谢合成松脂醇二葡萄糖苷的作用机制解析[D];西北农林科技大学;2016年
4 崔春晖;抗癌蛋白AC-01对大肠癌细胞的影响及其机制研究[D];南方医科大学;2015年
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1 刘俊义;苯并(α)芘诱导肝损伤过程中细胞自噬及焦亡的作用研究[D];陕西师范大学;2017年
2 孙亚利;毒素在高粱靶斑病菌致病过程中的作用及其合成相关基因的表达[D];河南师范大学;2017年
3 杨明峰;微囊藻毒素-LR诱导人支气管上皮细胞凋亡及其机制研究[D];郑州大学;2014年
4 王素敏;重金属和持久性有机污染物对罗非鱼肝脏抗氧化系统的影响[D];国家海洋局第三海洋研究所;2012年
【二级参考文献】
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1 胡佩佩;黄复深;牛俊超;唐昭山;;猪胸膜肺炎放线杆菌感染小鼠所致炎症中TLR-4信号通路涉及细胞焦亡[J];微生物学报;2015年05期
2 王浩;杨红梅;郭启雷;赵丽;史海良;潘红艳;;高效液相色谱-串联质谱法同时测定植物油中苯并芘与黄曲霉毒素B_1,B_2,G_1,G_2[J];分析测试学报;2014年08期
3 贾涛;;液相色谱法检测饲料用油中苯并芘的方法研究[J];饲料广角;2014年13期
4 胡加文;李天宝;王春利;李文斌;;固相萃取–液相色谱法测定方便面中苯并芘[J];化学分析计量;2014年03期
5 张朝青;邢雁;余雷;;高效液相色谱法测定水源中苯并芘的方法研究[J];广东化工;2014年08期
6 张焱;马双余;孙晓力;;胃肠道肿瘤患者机体氧化应激状态的研究[J];西安交通大学学报(医学版);2013年06期
7 赵欢欢;刘玉兰;张小涛;汪学德;;吸附法脱除芝麻油中苯并芘及脱色效果研究[J];粮油食品科技;2013年04期
8 张哲;;固相萃取技术在环境监测领域中的应用及研究进展[J];现代科学仪器;2013年03期
9 张洪;章军建;;阿尔茨海默病早期诊断与治疗[J];中华实用诊断与治疗杂志;2013年06期
10 母佩;张厚德;杜冀晖;;活性氧在青蒿素及其衍生物抗肿瘤作用机制中的研究进展[J];当代医学;2013年16期
中国博士学位论文全文数据库 前4条
1 王建青;内质网应激在四氯化碳诱导小鼠急慢性肝损伤中的作用及部分机制[D];安徽医科大学;2012年
2 任冰稳;束缚应激对大鼠代谢和多脏器PPARs表达的影响及吡格列酮的干预作用[D];中国人民解放军军医进修学院;2010年
3 陈昶铭;药物性肝损害临床特点的研究[D];中国医科大学;2009年
4 焦晶晶;竹叶特征性黄酮类化合物研究[D];浙江大学;2008年
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1 张君;马铃薯茎溃疡病病原菌及其毒素的致病机理研究[D];甘肃农业大学;2015年
2 路小琴;马铃薯黑痣病病原菌的分离鉴定及病原菌粗毒素致病机理初探[D];甘肃农业大学;2014年
3 田志鹏;低聚壳聚糖的制备及生物活性研究[D];河北大学;2011年
4 田景贤;瓜蒌含药血清及弯齿琵甲对Hela细胞增殖抑制作用的研究[D];河北大学;2011年
5 马德亮;乳腺癌患者循环肿瘤细胞的检测及其临床应用[D];苏州大学;2010年
6 徐艳;水稻纹枯病菌毒素的致病机理及对寄主防御酶活性的影响[D];扬州大学;2006年
7 魏广彪;马铃薯卷叶病毒的分子鉴定与检测技术[D];福建农林大学;2005年
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1 ;粮食和粮食加工产品中3,4苯并蓖的试验 烘干、贮藏和加工对粮食及其加工产品中3,4苯并蓖量的影响[J];四川粮油科技;1974年01期
2 杨婧;;辽宁省苯并(a)芘的来源与多介质环境行为研究[J];科技信息;2010年18期
3 张建农;关于苯并(a)芘命名问题的点滴见解[J];环境科学;1982年04期
4 黄祖训;郝绪生;董孟军;王亚玲;余国蓉;;苯并[a]蓖方法试验研究[J];四川环境;1984年02期
5 吴养洁;李爱国;;4'-取代乙酰基苯并-冠-5和双(苯并-15-冠-5)的合成[J];河南科学;1985年01期
6 金志科;倪忠玉;王荣力;;降尘中苯并(a)芘的分析方法[J];环境保护科学;1991年04期
7 靳佩霞;一般检验室如何因陋就简开展好苯并[a]芘检测工作[J];粮食流通技术;1996年01期
8 曹德榕,李裕林,苏致兴;一种新型苯并[C]噻吩的合成[J];兰州大学学报;1998年03期
9 陈立钦;7,16-二硫苯并18-冠-6的新合成法[J];化学试剂;1999年05期
10 朱雨辰,曹晓煜;浅谈苯并(a)芘[J];江苏环境科技;1999年04期
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1 边凌林;徐婕超;陈杰;张慧;曹卫国;;含氟苯并二氢噻唑及苯并二氢噁唑衍生物的合成[A];中国化学会第十二届全国氟化学会议论文摘要集[C];2012年
2 李荷濛;杨勇;杨海宁;徐仁英;杨孟铭;;水中多环芳烃类化合物液相色谱荧光检测分析[A];西北地区第三届色谱学术报告会暨甘肃省第八届色谱年会论文集[C];2004年
3 赵海燕;刘刚;;优势结构1,5-苯并硫/二氮杂类化合物的合成及筛选[A];中国化学会第二十五届学术年会论文摘要集(上册)[C];2006年
4 张学梅;张萍;李媛;;一种新型的1,5-苯并硫氮杂的合成[A];中国化学会第四届有机化学学术会议论文集(上册)[C];2005年
5 张萍;张学梅;王兰芝;李媛;;新型1,5-苯并硫氮杂卓衍生物的合成及抑菌活性研究[A];第五届全国化学生物学学术会议论文摘要集[C];2007年
6 杨貌端;王维;;油脂中苯并(a)芘的快速分离测定[A];北京食品学会1982年年会论文(摘要)[C];1982年
7 付江霞;张萍;李媛;;1,5-苯并硫氮杂(艹卓)β-内酰胺衍生物的合成[A];中国化学会第四届有机化学学术会议论文集(上册)[C];2005年
8 皮承富;余小灵;范方伟;江域;;咪唑苯并唑膦盐的合成及其反应性质[A];中国化学会第29届学术年会摘要集——第07分会:有机化学[C];2014年
9 王兰芝;边艳青;张萍;张学梅;李媛;;1,5—苯并硫氮杂卓衍生物的设计、合成及生物活性研究[A];中国化学会第26届学术年会化学生物分会场论文集[C];2008年
10 邓雯文;杨沫;张遵真;吴媚;;苯并[a]芘诱导的恶性转化对DNA甲基化转移酶表达水平及活性影响[A];中国毒理学会第六届全国毒理学大会论文摘要[C];2013年
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1 福如海;烧烤或许是“招癌近身”[N];卫生与生活报;2007年
2 刘军;苯并环丁烯树脂项目通过验收[N];中国化工报;2003年
3 王小龙;科学家发现保护肝细胞的蛋白质[N];科技日报;2009年
4 郑屠;实现从干细胞得到肝细胞[N];医药经济报;2003年
5 王健;骨髓细胞可转化为肝细胞[N];大众科技报;2007年
6 本报记者 郑晓春;英国成功实施肝细胞治疗[N];科技日报;2003年
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1 朴凤玉;三唑并苯并氮卓衍生物的合成及其抗惊厥活性研究[D];延边大学;2011年
2 李良喜;2-苯并氮杂卓和1-苯并硫杂卓类化合物的合成新方法研究[D];复旦大学;2009年
3 聂继盛;苯并[a]芘神经毒性与CYP1A1基因多态性的关系[D];山西医科大学;2007年
4 余述燕;苯并异吡喃盐为活性中间体的化学反应研究[D];南京大学;2013年
5 付任重;新型嘧啶并环分子的设计与合成[D];吉林大学;2008年
6 沈文艳;反式7,8-二羟-9,10-环氧苯并(a)芘诱发细胞应答反应的剂量效应和时间效应的蛋白质组学研究[D];浙江大学;2007年
7 王松林;苯并二噁烷类化合物的设计、合成及抗抑郁活性评价[D];华中科技大学;2014年
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1 刘俊义;苯并(α)芘诱导肝损伤过程中细胞自噬及焦亡的作用研究[D];陕西师范大学;2017年
2 孙德坡;造纸法再造烟叶的苯并[a]芘低释放量关键技术研究[D];昆明理工大学;2015年
3 葛桂冬;苯并二噻吩聚合物太阳能电池材料的研究[D];南京理工大学;2015年
4 郗青川;具有不同交联结构和固化行为的苯并环丁烯树脂制备及其热稳定性研究[D];西南科技大学;2015年
5 律德科;新型氮杂及苯并硼氟二吡咯染料的合成与表征[D];天津大学;2014年
6 石金花;苯并噻唑衍生物的合成及其生物活性研究[D];华中师范大学;2013年
7 王娇;3-取代苯甲酰基/4-取代苯基-1,5-苯并硫氮杂卓衍生物的合成及抑菌活性研究[D];河北师范大学;2016年
8 姚阔;双苯并咪唑化合物及其配合物的合成与结构表征[D];青岛科技大学;2014年
9 孔令满;新型1,5-苯并硫氮杂卓衍生物的合成及抑菌活性的研究[D];河北师范大学;2017年
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