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《陕西师范大学》 2015年
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荚果蕨总三萜的提取纯化及保肝作用研究

杨晓艳  
【摘要】:荚果蕨(Matteuccia struhiopteris(L.)Todaro)又名荚果蕨贯众、广东菜、黄瓜香,是球子蕨科(Onocleaceae)荚果蕨属(Matteuccia Todaro)多年生草本植物,叶二型簇生,营养叶为1~2回羽状复叶,孢子叶羽片向外反卷呈荚果状,可通过孢子和营养两种方式进行繁殖。荚果蕨植株含多种药用成分,如多糖、黄酮、甾萜类等,是我国主要的五种贯众之一,可全株入药,具有清热解毒、杀虫、抗氧化及保肝等多种功效。同时,它富含蛋白质、脂肪、碳水化合物、粗纤维等多种营养成分,营养价值极高,是集药用与食用为一体的资源植物;此外,荚果蕨株型美观,秀丽典雅,观赏价值极高,是园林造景和室内观赏的优良材料。研究表明三萜类物质具有抗癌、抗病毒、降血糖、保肝及治疗糖尿病等多种功效,荚果蕨中富含三萜类化合物,因此,本文研究了采用响应面法优化荚果蕨总三萜超声提取工艺,并比较了不同部位的总三萜含量;通过正交设计法优化了AB-8大孔树脂分离纯化总三萜的工艺;通过考察5种抗氧化体系,分析比较了纯化前后总三萜的体外抗氧化能力;采用经口一次性给予高浓度酒精和梯度递增法灌胃两种方式分别建立了急性和慢性两种酒精性肝损伤小鼠模型,检测了肝损伤小鼠的谷丙转氨酶(GPT),谷草转氨酶(GOT),丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)的含量变化,观察了小鼠肝组织病变切片,旨为荚果蕨在预防和治疗肝损伤方面的应用提供理论依据,研究结果如下:(1)运用响应面法优化荚果蕨总三萜超声提取工艺,最佳提取条件:乙醇浓度60%,料液比1:35,超声温度63 ℃,超声时间39 min,分别对荚果蕨3个部位中总三萜含量进行分析比较,结果表明:总三萜在不同部位中的含量呈不均匀性分布,根状茎营养叶孢子叶。(2)采用正交设计法优化AB-8大孔树脂分离纯化荚果蕨总三萜工艺,优化的最佳吸附条件参数为:上样浓度1.96mg/mL,上样流速2.0mL/min,样液pH=5,最大上样量达5 BV,经验证其吸附率达91.07%;最佳洗脱条件参数:60%乙醇,洗脱速度2.0 mL/min,洗脱体积4 BV。通过测定,其回收率为86.27%,纯度从28.61%提高到82.32%,精制倍数达2.88,表明该AB-8树脂的吸附率和解析率较高,纯化效果佳。(3)五种抗氧化体系试验结果表明,荚果蕨总三萜整体抗氧化能力较强,顺序为:Vc纯化物BHT粗提物;荚果蕨总三萜的纯化物和粗提物对ABTS自由基、羟自由基、超氧阴离子和DPPH自由基均具有一定的清除作用,且呈量效关系,纯化物对各类自由基的清除力优于BHT。(4)药理实验结果:实验组小鼠体内GOT和GPT含量变化说明荚果蕨总三萜在一定程度上能抑制GOT、GPT的升高,且抑制作用与给药剂量在一定程度上呈正相关。若机体的某些组织或器官发生病变会导致自由基生成过多,对机体造成严重损伤,MDA和SOD含量变化说明总三萜纯化物有较强的体内抗氧化能力,其保肝机制可能是通过增强机体的抗氧化能力并有效清除不利自由基从而达到有效缓解酒精对肝脏造成的损伤。肝脏组织石蜡切片显示,荚果蕨总三萜纯化物中、高剂量能有效缓解肝脏内脂质过氧化、自由基攻击等造成的氧化损伤,降低肝细胞肿大、坏死和脂肪变性的程度,调节细胞恢复正常的代谢和生理功能,其效果在一定浓度范围内优于阳性对照药联苯双酯,表明荚果蕨总三萜对酒精性肝损伤有一定的保护作用,其机理还有待于进一步深入研究。
【学位授予单位】:陕西师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:R284.2;R285

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