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《陕西师范大学》 2002年
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龙爪槐和毛刺槐组织培养的研究

曹晓燕  
【摘要】:以龙爪槐和毛刺槐的子叶、花药、叶片等外植体为材料,开展其组织培养和植株再生系统的研究。 (一)龙爪槐组织培养的研究 以龙爪槐子叶、叶片、花药等外植体进行组织培养,结果显示:(1)子叶是进行龙爪槐快速繁殖的最好材料。以龙爪槐子叶为外植体,通过体细胞胚胎发生和器官发生两条途径获得了大量的再生植株。子叶在MS附加BA(0.5-5mg/L)的培养基上先形成愈伤组织,进而分化出不定芽。当不定芽长至2-3cm时,将其切下,转入生根培养基上即可获得完整的再生植株。将子叶接种在MS附加2,4-D(0.1-40mg/L)或NAA(20mg/L)的培养基上,2周内可产生大量肉眼可见的胚状体。胚状体的诱导受子叶接种方向及子叶成熟程度等因素的影响。胚状体经进一步培养,逐渐发育成熟,在MS附加BA 1mg/L的培养基上形成完整的小植株。在培养过程中形成了许多畸形胚。(2)本实验对龙爪槐的花药培养进行了初步探索,主要研究了激素、低温预处理、蔗糖浓度、pH值等因素对愈伤组织形成的影响。结果显示:2,4-D与BA配合使用,可显著提高花药愈伤组织诱导率;4℃低温预处理对花药愈伤组织的形成没有促进作用;蔗糖浓度为9%时,可提高愈伤组织诱导率:pH值以6.5为宜。虽然愈伤组织形成率最高可达90%以上,但本实验未能分化出芽。(3)以龙爪槐叶片为外植体进行培养时,叶片切口处在几种不同激素浓度的培养基上均可100%产生少量白绿色致密的愈伤组织,这种愈伤组织在MS附加BA 3.0mg/L培养基上进行2-3次继代培养后,约有10%的愈伤组织可分化出不定芽。 (二)毛刺槐组织培养的研究 以毛刺槐花药、叶片等外植体进行组织培养,结果显示:(1)将毛刺槐的花药接种在MS附加2,4-D 0.1mg/L和BA3.0mg/L的培养基上,20d时花药愈伤组织诱导率可达41.5%。然后将花药愈伤组织转入含BA 5.0mg/L的MS培养基上,继代培养2个月后,可见愈伤组织上分化出许多绿色的芽点,待不定芽长至2-3cm时将其切下,转入MS附加IBA 1mg/L的生根培养基上,3周后即可得到完整的再生植株。毛刺槐花药培养过程中,低温预处理不能提高愈伤组织诱导率,将蔗糖浓度提高到6%和9%时,愈伤组织诱导率有所提高,当蔗糖浓度增加到12%时,愈伤组织诱导率反而显著降低。(2)以毛刺槐叶片为外植体进行培养时,叶片切口处先形成少量白绿色的愈伤组织,继代培养3个月后,可见绿色芽点的出现,芽 点进一步长大,发育为小植株。以叶片为外植体时,愈伤组织的分化率可达12%。 (三)龙爪槐遗传转化的初步研究 选用龙爪槐花药愈伤组织为转化受体系统,通过农杆菌介导法将菜豆几丁质 酶基因导入龙爪槐,获得了部分抗性愈伤组织。对转化过程中的预培养时间、浸 染时间、共培养时间、抗菌素浓度等进行了初步筛选,结果显示:预培养2-3d, 浸染 5习0叫 n,共培养 2 d,选择培养基中头抱霉素浓度 5 0 omg/L,卡那霉素浓度 5 omg/L为龙爪槐基因转化及抗性愈伤组织获得的较佳条件。 龙爪槐、毛刺槐组织培养和植株再生系统的建立不仅可为进一步研究龙爪槐 和毛刺槐的发育生理、细胞分化以及形态建成等许多基础理论问题提供新的实验 系统,更能为进一步利用现代生物技术改良品种、加速育种进程、促进优良种苗 的快速繁殖与利用等奠定基础。
【学位授予单位】:陕西师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:Q943.1

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