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毛细管电泳化学发光检测

邓薇  
【摘要】: 毛细管电泳技术(CE)是出现在80年代早期的一种有效的分离手段。它可以用来分离样品中含量极低的复杂组分。它因具有分离时间短,仪器简单,操作成本低等特点而得到广泛的研究。在CE应用中,由于进样体积小,管径细微和样品中待测组分含量低等特点,缺乏高灵敏度的检测器已成为限制该技术应用的主要因素。目前,在大多数商品化的毛细管电泳仪上采用紫外可见光吸收检测,因为它具有应用范围广,成本低的特点。但由于毛细管径通常小于100μm,因此光路长度受到限制。激光诱导荧光检测(LIF)因具有高的灵敏度和低的检出限而逐渐受到青睐,但仪器昂贵,而且必须进行额外的工作将非荧光物质通过柱前或柱后衍生为荧光物质。电化学发光检测可以得到高的灵敏度,而且受到进样量的影响比较小。但在实际样品测定中存在着电极表面被污染的问题。 化学发光分析是根据化学反应产生的光辐射确定物质含量的一种痕量分析方法。1877年,Radziszeuski发现在碱性介质中,洛酚与氧发生化学反应产生一种绿色的光,这就是首次利用合成化合物观察到的化学发光现象。此后,人们合成了一系列化学发光化合物并研究了他们的化学发光特性。化学发光分析具有高的灵敏度(检出限可达10~(-12)~10~(-18)mol),宽的线性范围(3~6数量级),发光背景低及仪器设备简单等特点,适用于毛细管电泳柱后微量样品的在线检测。目前将化学发光应用在毛细管电泳还不是很多,其潜力有待进一步挖掘。但毫无疑问,毛细管电泳化学发光检测将在环境科学、生命科学及临床医学上得到愈来愈广泛的应用。 在本文研究工作中,我们主要研究了毛细管电泳化学发光检测联用技术。各项工作简述如下: 第一部分:结合毛细管电泳建立了一种新化学发光体系来同时分离和测定7种氨基酸(精氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸、甲硫氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸)。依据氨基酸对碱性溶液中的Luminol-BrO~-化学发光体系有抑制作用,从而直接检测。氨基酸迁移时间的相对标准偏差小于1.5%,峰高的相对标准偏差小于4%:检出限在1×10~(-6)~5×10~(-6)mol/L之间。该方法快速、简便,所获结果令人满意。 第二部分:水溶性维生素也对碱性介质中的Luminol-BrO~-化学发光体系有抑制作用,结合毛细管电泳和Luminol-BrO~-化学发光体系同时分离与测定6种水溶性维生素(V_(B1),V_(B6),V_(K1),V_c,V_(B2),V_(B12))。他们迁移时间的相对标准偏差小于1%,峰高的相对标准偏差小于5%;检出限在0.8×10~(-6)~1.6×10~(-6)mol/L之间。该方法可用 于片剂中维生素含量的测定。 第三部分:首次将毛细管内还原方法和化学发光检测联用进行铬离子的形态 分析。该方法利用 Cr(V)和 NaHSO。在毛细管内的氧化还原反应生成 Cr(ll),用 化学发光方法测定 Cr(ll卜 按照样品样品,缓冲液和 NaHSO。依次进样,以 0刀Zmol几HAc-NaAc…H一4.刀为缓冲液,分离电压为 15kV。Cf(lll和 Cr(VI)的检 出*分另为6x 10”’*mol”‘和sxlo”‘*mol‘(3a);线性范围分另为:3*10-‘*~8二10-‘* _*卜和8d01‘~5d0一m*-’。该方法简便、选择性好,可用于环境水中的&巾11) 和Crryl)的检狈。 第四部分:利用毛细管内还原方法,结合化学发光同时分离与检测V(IV)和 V(V\V(V在毛细管内和酸化的H。O。发生氧化还原反应生成V(IX根据两种 V(I)的迁移时间的不同,从而达到分离与检测的目的。按照HZO)HCI和样品 混合液依次进样,以 0刀Zmol几HAc-NaActoH-4.刀为缓冲液,分离电压为 15kV。 V(IV)和 V(V)的检出卜分另为 6.sxlo“‘*mol’和 2.lxlo”‘*mol”‘(3a);线性范围分 别为:2.5x10一~2.5x10lV*1一和5x10{~5x10-川*of卜


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