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分子印迹—化学发光分析

申丽华  
【摘要】: 本论文分为两部分,第一部分为综述,第二部分为研究报告。 第一部分详细介绍了分子印迹技术的基本原理和制备方法,回顾了近十年来的发展过程,总结了该技术在分析化学领域中的应用情况。 第二部分报告了分子印迹-化学发光分析的研究工作。用分子印迹技术合成了肾上腺素印迹聚合物和药物扑热息痛印迹聚合物,用肾上腺素印迹聚合物为识别物质,建立了分子印迹-化学发光检测肾上腺素的分析方法,测定人体血清中肾上腺素的含量;用扑热息痛印迹聚合物为识别物质,建立了分子印迹-化学发光测定扑热息痛的分析法,测定尿液中扑热息痛的含量。还建立了药物扑尔敏的流动注射化学发光检测法,为进一步建立分子印迹-化学发光检测扑尔敏法奠定了基础。 一、分子印迹-化学发光分析的研究 化学发光分析法,以其简单、快速、灵敏、线性范围宽等优点已经被广泛的应用于许多物质的分析。但是,选择性差却限制了该方法在复杂样品中的应用。为了提高化学发光的选择性,化学研究者主要从两个方面来考虑:一是和免疫技术相结合,取得了一定的成绩,但其中用到的酶试剂不稳定,容易失活。其二是和分离技术相结合,如高效液相色谱,气相色谱,毛细管电泳等,但这些方法所需仪器昂贵,操作复杂,而且化学发光检测往往是在柱后进行,当分离条件和化学发光条件不相容时,则不能应用化学发光分析法来检测。 分子印迹技术是合成对模板分子具有特定识别能力的聚合物技术,其识别能力可以和抗体—抗原、酶—底物、受体—激素间的特异性识别相媲美,同时有抗体、酶、受体等生物活性物质所不具备的对环境(高温、高压、强酸、强碱、强离子强度)的耐受性。将分子印迹技术用于化学发光分析,不失为解决选择性的最佳的选择。关于分子印迹技术用于化学发光分析的研究,目前只有极少的文献报导。采用分子印迹技术从根本上克服化学发光分析选择性差的缺憾,而又能发扬其灵敏度高的优势。本研究内容包括以下部分: 1、分子印迹—化学发光分析法测定肾上腺素 采用分子印迹技术合成了对肾上腺素有高度选择性的模板聚合物,以此聚合物为识别物质,在线富集化学发光检测肾上腺素。肾上腺素模板聚合物粉末填充在流通池中,将此流通池放在光电倍增管的光窗前,分析物流过流通池,被选择性吸附在流通池中,化学发光试剂鲁米诺(含亚铁氰化钾)和铁氰化钾的混合试 剂流流过流通池和吸附在流通池的肾上腺素发生化学反应产生很强的化学发光, 发光强度和肾上腺素浓度的对数在5.oxlo义l.oxlo”’mol/1的范围内成线性关系, 对*oxlo-8 mol/l的肾上腺素溶液进行 7次平行测定的相对标准偏差小于 5%。方 法的检出限为 3xlo“9 mol/l.干扰实验表明将分子印迹技术应用在化学发光中能极 大的提高方法的选择性。对稀释的血清中加入已知量的肾上腺素进行了回收实验, 结果满意。同时,分别用柱吸附法和振荡吸附法考察了聚合物对肾上腺素的吸附 特性。 2、分子印迹一化学发光分析法测定扑热息痛 基于在碱性介质中,扑热息痛能抑制鲁米诺和铁氰化钾产生的化学发光,并 采用分子印迹技术合成了对扑热息痛有高度选择性的模板聚合物,以此聚合物为 识别物质,建立了流动注射化学发光检测扑热息痛的分析方法。测定扑热息痛的 线性范围为7叫0O p。*L:对so刀卜*l/L的扑热息痛溶液进行9次平行测定的 相对标准偏差小于5%;方法的检出限为3pmol/L。本法己用于尿样中扑热息痛 的测定。 二、流动注射化学发光法测定扑尔敏 发现高锰酸钾在酸性介质中能氧化扑尔敏产生弱的化学发光,甲醛的存在能 大大的增强化学发光强度。基于此,建立了一种测定扑尔敏的流动注射化学发光 分析法。测定扑尔敏的线性范围为 0.4~50pg/ffiL,方法的检出限为 0.Zpg/ffiL,对 浓度为 4刀"g/mr的扑尔敏溶液进行口次平行测定的相对标准偏差为 1.’o,o,样品 测定频率达到120h-’。该方法用于药物制剂中扑尔敏含量的测定,并与药典标准 方法进行了对照。


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