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《陕西师范大学》 2006年
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乳酸代谢抑制对大鼠心肌钠钙交换体调节作用的研究

王波  
【摘要】:细胞内的钙离子在很多类型细胞中的信号转导中都发挥着重要的作用。在心肌细胞、神经细胞以及肾脏细胞中,NCX是调节胞内Ca~(2+)平衡的一种重要蛋白质。NCX是一种具有双向转运模式的转运蛋白:正向转运模式(forward mode)即Ca~(2+)外流模式;反向转运模式(reverse mode)即Ca~(2+)内流模式。它的转运方向由膜电位和膜上的离子浓度决定。一般认为在正常生理状态下,NCX的主要功能是顺着Na~+的浓度梯度,使Ca~(2+)外排到细胞膜外。而在病理条件下,NCX是导致胞内Ca~(2+)超载的重要途径之一。缺血预适应现象(ischemic preconditioning IP)是指预先短暂反复的缺血可以延缓或减轻组织以后较长时间缺血以及再灌注的损伤,它是抵制反复致命性缺血损伤的强有力的保护机制。IP对心脏的保护作用具有双时相性,即预处理后数分钟就出现,2~3 h消失的早期保护作用即早期预处理(early phase of preconditioning)和24h再度出现,并持续72h的延迟性保护作用即晚期预处理(late phaseof preconditioning)。大量研究发现,IP是发生在各个器官和组织中常见的一种现象。今天我们知道IP是一个非常复杂的过程,它包括很多信号转导系统,但具体机制目前仍不十分清楚。病理状态下,比如缺氧或缺血状态会影响心肌细胞的代谢水平,无氧时糖酵解水平增加,导致代谢产物乳酸的堆积以及胞内酸中毒。本实验的研究目的是:1)能否利用双激发荧光光电倍增系统(IonOptix Photometry System)记录NCX的双向转运;2)乳酸代谢抑制处理能否模拟缺血预适应现象,以及乳酸代谢抑制处理过程中NCX的功能状态如何,为研究NCX与IP之间的关系提供一些实验依据。 酶解法分离制备钙耐受心肌细胞,用Ca~(2+)荧光指示剂Fura-2/AM负载心肌细胞30min(25℃)后,采用双激发荧光光电倍增系统(IonOptix Photometry System)检测钙信号,间接反映NCX的两种转运模式。采用细胞外无Na~+液法(即NMDG液代替正常溶液中的Na~+)检测胞内Ca~(2+)([Ca~(2+)]_i)的变化来衡量心肌反向NCX的转运功能。心肌细胞存活率来反映心肌细胞损伤的程度。 第一部分的实验结果是:双激发荧光光电倍增系统可实时同步观察和记录1)随着NMDG液中Ca~(2+)浓度升高,[Ca~(2+)]_i升高幅度逐渐增大;L-型钙通道的抑制剂nifedipine对NMDG液引发的[Ca~(2+)]_i升高无影响。而加入NCX的抑制剂Ni~(2+)(1mmol/L)或KB-R7943(15μmol/L)抑制了NMDG液引发的[Ca~(2+)]_i升高。这反映了反向NCX的功能。2)咖啡因(caffeine)引导的Ca~(2+)瞬变的下降支反映
【学位授予单位】:陕西师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:Q46

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【参考文献】
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