不同剂量IGF-1对人脐带间充质干细胞增殖与分化的影响

【摘要】：目的：1、探讨并优化人脐带间充质干细胞(hunman Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells hUCMSCsi)体外分离.纯化.扩增及培养条件,并对其基本生物学特性进行研究；2、观察不同剂量外源性IGF-1对hUCMSCs体外增殖的影响及其量效关系；3、观察在不同浓度IGF-1处理下,人脐带间充质干细胞(hUCMSCsi)诱导成脂后生长状态的变化,初步探讨用于促进hUCMSCs诱导成脂的最适IGF-1浓度。 方法：1、将剔除血管的新鲜新生儿脐带组织切成小块培养,得到贴壁细胞,倒置相差显微镜观察细胞形态,细胞计数绘制细胞生长曲线；流式细胞仪测定细胞表面抗原；化学染色检测其体外成脂和成骨诱导分化能力；2、取第3代hUCMSCs接种于96孔板,分为7组(G1,G2…,G7)。前5组分别加入含不同剂量IGF-I(40,60,80,100,120μg/L)的体积分数为0.02的胎牛血清培养液；第6组加入体积分数为0.05的胎牛血清培养液做为阳性对照,第7组加入体积分数为0.02的胎牛血清培养液做为阴性对照,采用MTT法观察不同剂量的IGF-I对细胞增殖的影响。3、将第3代的hUCMSCs随机分为5组,在成脂诱导24h后,分别加入40 ng/ml,、60 ng/ml、80 ng/ml,、100 ng/ml和120 ng/ml的IGF-1,对5组样本进行四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测其光密度值(optical density,OD值)。取第8天的样本进行油红O染色,观察脂滴形成情况,计算红色脂滴数量,并利用多个样本均数的方差分析法比较5组之间的差别 结果：1、体外培养4-6天后,有细胞从组织块中游出；细胞传代培养至第10代,无明显的形态和增殖能力改变；细胞表达CD13,CD44,而CD14、D34、HLA-DR表达成阴性。体外诱导实验证实,该细胞成脂和成骨分化的能力；2、①第3、第6天,G1组、G2组和G7组之间差异无显著性(P0.05)；G3组、G4组和G5组之间差异无显著性(P0.05)。②第3天,G6组增殖高于G1组与G2组,低于G3组、G4组和G5组,差异有显著性(P0.000或0.006)；第4天,G6组增殖高于其余各组,差异有显著性(P0.000或0.006)。③第3天、第6天,G1组、G2组和G6组低于G3组,G4组,G5组,差异有显著性(P0.000)；G6组增殖高于G7组,统计分析差异有显著性(P0.000)。3、①各组OD值之间的差异没有统计学意义(P0.05)；②80 ng/ml组、100ng/ml组和120ng/ml组成脂数量明显多于40ng/ml组与60ng/ml组,P值均小于0.01；而80ng/ml组、100ng/ml组和120ng/ml组3组之间在成脂数量上的差异没有显著统计学意义(P0.05).结论：80 ng/ml为IGF-1促进人脐带间充质干细胞诱导成脂的适宜浓度。 结论：1、hUCMSCs能在体外培养、纯化及扩增,其基本生物学特性和骨髓间充质干细胞相似；2、外源性IGF-I对hUCMSCs增殖的促进作用,随IGF-I浓度增高而有增高趋势,100μg/L为其较适合浓度,为实现hUCMSCs体外快速扩增提供适宜的条件；3、80 ng/ml为IGF-1促进人脐带间充质干细胞诱导成脂的适宜浓度。

【关键词】：1、人脐带间充质干细胞 IGF-I 成脂诱导 MTT 组织工程
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R329
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