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《兰州大学》 2011年
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镰形棘豆总黄酮防紫外线损伤作用及机制研究

兰芝荟  
【摘要】:目的 1.研究镰形棘豆(Oxytropis falcata Bunge)总黄酮的含量测定方法。 2.建立大孔吸附树脂富集提取镰形棘豆总黄酮(TFOF)的提取工艺。 3.通过处方筛选,利用简单的水包油型(O/W型)基质,制备1% O/W型镰形棘豆总黄酮霜(TFC),并对其稳定性进行考察。 4.研究1%镰形棘豆总黄酮霜(1%TFC)的防紫外线辐射效果,从大鼠皮肤外观,病理改变,以及大鼠皮肤组织匀浆中的生化指标的变化来衡量其抗紫外线辐射能力的大小。 方法 1.以芦丁为对照品,选用不同的显色方法,采用紫外分光光度法对不同显色方法显色后的镰形棘豆总黄酮进行含量测定。筛选最佳显色方法,比色法测定样品中总黄酮苷的含量,同时考察大孔吸附树脂富集总黄酮的吸附能力及重复利用度。 2.选取不同组份的水包油(O/W)乳膏基质,采用研和法制备霜剂。从外观、显微观察、含量变化等多方面评价各处方的优劣及产品的稳定性。 3.大鼠背部用8% Na2S脱毛,恢复一周后,采用SH4紫外光疗仪照射大鼠背部已脱毛的皮肤,以照射时间和大鼠背部皮肤变化为条件,筛选并确定大鼠急性紫外损伤模型。 4.将已脱毛的大鼠随机分成正常对照组、UVB对照组、UVB+高原护肤霜(GYC)和UVB+1%镰形棘豆总黄酮霜(1%TFC)。UVB+ GYC组和UVB+1%TFC组,麻醉后分别以10 mg/cm2剂量均匀涂抹霜剂。正常组不做紫外线照射处理,UVB组只照射不涂霜。每天照射前称量大鼠体重,观察大鼠背部皮肤变化,持续7天,第7天照射结束后24 h内处死大鼠,取背部照射区皮肤(0.4 cm2)浸于4%中性福尔马林溶液中固定,制作大鼠皮肤组织的病理切片,观察病理变化。取大鼠背部照射区皮肤剪成小块分装(每小块约0.3 g),于-20℃保存。采用紫外分光光度法测定皮肤组织中的生化指标,包括超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(Hyp)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽-S转移酶(GST)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)和羟自由基(·OH)。 结果 1.镰形棘豆水提物用2.5 M盐酸甲醇溶液水解,3.0%二氯氧锆(ZrOCl2)显色后,测得其中总黄酮的含量为5.8%。提取物中的总黄酮苷含量为26%,接近富集前的5倍。 2.以硬脂酸3 g、白凡士林3 g、单硬脂酸甘油酯1g、司盘-60 0.8 g、液体石蜡4.5 g为油相,吐温-80 2.5 g、甘油5 g、尼泊金0.1 g、蒸馏水40 ml为水相制得的霜剂具有良好的稳定性,且易涂抹、易清洗。 3.通过对大鼠进行紫外照射发现,在距大鼠背部上方20 cm处,照射5 mmin,连续照射7天,大鼠背部皮肤出现严重的泛红、肿胀和溃烂,同时触之有皮革感,出现典型的急性紫外线损伤。 4.实验大鼠皮肤HE染色后制作病理切片,显微镜下观察发现,UVB对照组表皮增厚,角化过度,灶状角化不全;角质层血浆渗出;棘层肥厚,局部可见微脓肿形成;真皮浅层水肿出血,有较多的中心粒细胞浸润和少量的红细胞渗出;而UVB+1% TFC组皮肤各层纹理清晰,无炎症反应,接近正常对照组。 5.实验大鼠皮肤组织中氧化指标测定结果发现,镰形棘豆总黄酮霜能有效防止紫外线照射对皮肤造成损伤,提高皮肤组织中SOD(P0.001)、GSH-Px (P0.001)、GST(P0.05)、CAT(P0.01)活性及Hyp含量(P0.001),降低MDA和-OH的含量(P0.001)及GSH的活性(P0.001)。 结论 1.二氯氧锆(ZrOCl2)显色法测定镰形棘豆总黄酮含量,方法简单,易操作。D-101型大孔吸附树脂对镰形棘豆的总黄酮成分具有理想的吸附能力,树脂重复利用度高,能有效富集提取镰形棘豆总黄酮。 2.以优选处方制得的镰形棘豆总黄酮霜外观光滑细腻,性质稳定。 3.在体内实验中,镰形棘豆总黄酮霜能有效防止紫外线照射对皮肤造成外观改变和病理学损伤,同时能有效改善大鼠皮肤组织内氧化指标的异常,达到保护皮肤的作用。
【学位授予单位】:兰州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R285

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【参考文献】
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