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《兰州大学》 2017年
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二氢杨梅素治疗小鼠葡聚糖硫酸钠结肠炎疗效及机制的研究

危蓉  
【摘要】:目的:观察二氢杨梅素治疗溃疡性结肠炎的疗效并探讨其可能的机制。方法:1.采取随机数字表法将60只雌性BALB/c小鼠随机分为6组,分别为:正常组、模型组、DHM低剂量组、中剂量组、高剂量组和5-氨基水杨酸对照组,每组各10只小鼠。2.于分组当日给予正常组小鼠蒸馏水自行饮用,其余组小鼠给予4%DSS水溶液自行饮用(记为第1天),连续饮用7日。于饮用4%DSS水溶液当日开始,对DHM低剂量组(50mg/kg/d)、中剂量组(100mg/kg/d)、高剂量组(200mg/kg/d)及5-氨基水杨酸对照组(50mg/kg/d)按各组拟定剂量分别进行灌胃治疗,连续给药14天。3.从饮用4%DSS溶液第1日起,每天称量小鼠体重,观察小鼠活动、毛色、大便的形状、颜色以及精神状态并记录,根据每日记录结果,对各组小鼠疾病活动指数(DAI)进行测评。4.于给药第14天采用颈椎脱位法处死实验小鼠,游离小鼠全结肠和脾脏,肉眼观察游离下来的小鼠结肠外观,测量并记录小鼠结肠长度、称取脾脏重量并计算脾脏指数;HE染色后光学显微镜下观察,并进行小鼠结肠组织学评分;Western blot法检测各组小鼠结肠组织中TLR2、TLR4的表达;EMSA检测小鼠结肠组织中NF-κB的活性;ELISA法测定DHM治疗前后肠组织炎性细胞因子IL-1β、TNF-a、IL-6含量;试剂盒测定肠组织MPO、NO、SOD的活性变化。结果:1.DAI评分:与正常组对比,模型组评分[(8.33±0.52)vs 0]显著增加,有统计学差异(p0.01);DHM低剂量组、中剂量组、高剂量组与模型组相比[(7.86±1.21)、(6±0)、(4.57±0.53)、(4.71±0.49)vs(8.33±0.52)]均下降,其中DHM低剂量治疗组无明显统计学差异(p0.05),其余各组均具有显统计学差异(p0.01);DHM高剂量组与5-氨基水杨酸对照组之间[(4.71±0.49)vs(8.33±0.52)]无统计学差异(p0.05)。2.结肠长度:与正常组对比,模型组小鼠结肠长度比较有统计学意义(p0.05);DHM各剂量组与模型组相比[(8.8±0.85)、(8.8±0.95)、(8.89±0.93)vs(7.77±0.43)]缩短延缓,比较具有统计学意义(p0.05);DHM高剂量组与5-氨基水杨酸对照组之间[(8.89±0.93)vs(8.56±1.13)]无统计学差异(p0.05)。3.脾脏指数:与正常组对比,模型组小鼠脾脏指数比较显著升高,有统计学意义(p0.01);DHM各剂量组与模型组相比[(5.64±0.94)、(5.88±1.26)、(5.81±0.66)vs(7.01±0.96)]均下降,比较有统计学意义(p0.05);DHM高剂量组与5-氨基水杨酸对照组之间[(5.81±0.66)vs(5.59±1.78)]无统计学差异(p0.05)。4.病理组织学评分:与正常组相比较,模型组病理学评分升高,比较有显著的统计学意义(p0.01);DHM各剂量组与模型组相比[(7.00±0.82),(4.85±0.69),(2.71±0.76)vs(7.33±0.52)]均下降,比较有统计学意义(p0.05);DHM高剂量组与5-氨基水杨酸对照组之间[(2.71±0.76)vs(2.29±0.76)]无统计学差异(p0.05)。5.EMSA法检测小鼠结肠组织中NF-κB的活性:与正常组相比,模型组小鼠结肠组织NF-κB活性明显升高(p0.01);DHM各剂量组对NF-κB均具有显著的抑制作用(p0.01),而高剂量组与水杨酸对照组相比,差异有统计学意义(p0.01)。6.Western blot法检测小鼠结肠组织中TLR2、TLR4的表达:与正常组相比,模型组小鼠结肠组织TLR2、TLR4蛋白表达水平明显升高(p0.01);DHM各剂量组小鼠肠组织TLR-2、TLR-4蛋白表达水平均有所降低(p0.05),其中DHM高剂量组显著抑制了肠组织中TLR-2、TLR-4的高表达(p0.01),治疗效果与5-氨基水杨酸相当。7.ELISA法检测结肠组织炎性因子IL-1β、TNF-a、IL-6的含量:检测结果显示,模型组炎性因子IL-1β、TNF-a、IL-6的含量显著升高,与正常组相比较,具有显著的统计学差异(p0.01);DHM各组与模型组比较,炎性因子含量显著下降,比较有统计学意义。而DHM高剂量组与5-氨基水杨酸对照组之间无显著统计学差异(p0.05)。8.检测MPO、NO、SOD的活性变化:与正常组相比,模型组中MPO、NO活性显著升高(p0.01),SOD活性显著下降(p0.01);DHM各剂量组和5-氨基水杨酸对照组中SOD、MPO活性与模型组相比均有统计学意义(p0.05),而NO活性与模型组相比较,差异无统计学意义(p0.05);DHM高剂量组、5-氨基水杨酸对照组与模型组相比,差异有统计学意义(p0.05)。结论:1.DHM可以有效缓解DSS诱导的小鼠结肠炎症;2.DHM治疗结肠炎的可能机制有:(1)通过抑制TLRs/NF-κB通路,抑制炎症因子的产生;(2)通过抑制NO,保护SOD活性减轻DSS诱发的氧化应激反应;(3)通过抑制MPO活性;3.DHM有可能成为临床治疗溃疡性结肠炎的候选药物之一。
【学位授予单位】:兰州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:R574.62

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