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《兰州大学》 2017年
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ERK5在骨肉瘤细胞侵袭及迁移中的作用研究

王建澍  
【摘要】:背景在骨肉瘤的诊治过程中,如何有效地降低复发和控制转移,提高患者的长期生存率,是骨肉瘤治疗的关键所在。在早期就能够判断骨肉瘤患者的预后,找到监测骨肉瘤患者术后复发及转移的敏感标记物是临床上急需解决的问题。EKR5作为MAPK家族中的新成员,在肿瘤形成、发展、转移等机制方面具有重要的意义和潜在的研究价值,然而关于ERK5在骨肉瘤细胞侵袭及迁移方面的研究目前国内外研究较少。目的探讨ERK5在人骨肉瘤组织的表达及其临床意义。然后,进一步在体外细胞水平研究了ERK5对骨肉瘤细胞侵袭及迁移的作用,证实其在骨肉瘤中的生物学作用。方法第一部分:选取71例骨肉瘤组织和40例正常骨组织,采用免疫组织化学法检测ERK5表达,判断其与骨肉瘤患者临床病理特征及预后的相关性。使用蛋白质免疫印迹法检测3例新鲜骨肉瘤组织标本中ERK5表达情况。第二部分:采用CCK-8法检测不同浓度的XMD8-92特异性抑制ERK5后对骨肉瘤MG-63细胞增殖活性的影响;采用Transwell小室侵袭和迁移实验、细胞划痕愈合实验检测不同浓度的XMD8-92抑制ERK5后骨肉瘤细胞侵袭和迁移力的变化;蛋白质免疫印迹和免疫荧光法测定抑制ERK5后ERK5、p-ERK5、MMP-2、MMP-9、ERK1/2及p-ERK1/2的表达情况。结果第一部分:骨肉瘤组织中ERK5阳性表达率85.9%(61/71)明显高于正常骨组织12.5%(5/40),差异具有统计学意义(P0.05);蛋白质印迹法检测显示骨肉瘤组织中ERK5的表达水平较正常骨组织高(P值均0.05)。ERK5阳性表达与Enneking分期和转移相关(P值均0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示在骨肉瘤组织中ERK5阳性表达组患者生存时间均短于阴性表达组(P0.05)。单因素COX回归分析发现,肿瘤大小、Enneking分期、转移、ERK5阳性表达与患者总生存时间相关(P值均0.05);多因素COX回归分析证实Enneking分期、转移、ERK5蛋白的阳性表达可作为骨肉瘤患者独立的预后因子(P值均0.05)。第二部分:CCK-8法显示骨肉瘤MG-63细胞在XMD8-92浓度为1μM、5μM,时间为48小时时增殖活性明显被抑制;Transwell小室侵袭及迁移实验结果显示5μM XMD8-92组穿过Transwell小室膜的细胞数明显少于1μM XMD8-92及Control组;细胞划痕愈合实验显示24h后,Control组划痕愈合较快,细胞迁移距离大;而5μM XMD8-92和1μM XMD8-92组MG-63细胞迁移距离明显短于Control组,差异具有统计学意义(P值均0.05)。蛋白质印迹实验结果表明:5μM和1μM XMD8-92可明显使磷酸化ERK5(p-ERK5)的表达明显降低,与Control组差异具有统计学意义(P值均0.05)。而ERK5、ERK1/2和p-ERK1/2较Control组无明显变化,说明XMD8-92特异性抑制ERK5后对ERK1/2的表达无明显影响。XMD8-92抑制ERK5浓度为1μM和5μM时,MMP-2、MMP-9的表达明显下调(P值均0.05)。免疫荧光染色法实验结果表明:与Control组相比,5μM XMD8-92和1μM XMD8-92组明显抑制ERK5进入细胞核,其表达明显降低(P值均0.05)。同时MMP-2及MMP-9的表达明显下调(P值均0.05)。结论ERK5在骨肉瘤组织中的高表达,与骨肉瘤的病理特征及预后相关;ERK5可能在骨肉瘤发生发展的过程中起着重要作用。XMD8-92抑制ERK5的表达可明显降低骨肉瘤MG-63细胞的侵袭和迁移能力,表明ERK5对骨肉瘤的侵袭、迁移等生物学行为有重要影响。
【学位授予单位】:兰州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:R738

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