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《兰州大学》 2017年
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幽门螺杆菌持留菌形成机制研究及陇马陆复方抗幽门螺杆菌筛选

赵曰超  
【摘要】:目的:1.探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)持留菌形成的规律和机制,为进一步开发抗Hp持留菌药物、控制Hp引起的慢性和反复感染提供理论依据。2.探讨陇马陆分别与红芪、黄连、红景天、马齿苋和蒲公英配伍后的抗Hp作用。方法:1.建立Hp液体培养模型,测Hp的生长曲线;采用稀释法测阿莫西林、克拉霉素、甲硝唑、左氧氟沙星对Hp的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)和最低杀菌浓度(minimal bactericidal concentration,MBC)。选用阿莫西林2.50μg·m L-1和0.63μg·mL-1、克拉霉素0.16μg·mL-1、甲硝唑20.00μg·mL-1和4.00μg·mL-1、左氧氟沙星5.00μg·mL-1开展抗菌药物暴露实验,测定培养4h、14h、40h和72h时间点时培养液中Hp持留菌形成状况。2.收集培养14h和40h的Hp的总RNA,采用转录组测序测定在Hp培养过程中基因组转录的变化,选用Q-PCR进行结果验证,生物信息学分析转录组测序结果。3.采用水提法和醇提法提取陇马陆与红芪、红景天、黄连、马齿苋和蒲公英配伍及陇马陆、红景天和黄连单药的有效成分,应用纸片琼脂扩散法筛选上述配方对Hp的抑制作用。采用稀释法测定陇马陆、黄连、红景天单药及复方提取物的抗Hp的MIC,并比较药物间配伍后的协同效应。结果:1.由Hp生长曲线可知,Hp培养的0-4 h为迟缓期,5-30 h为对数期,30 h以后为稳定期。2.阿莫西林对Hp的MIC和MBC范围分别为0.06-0.13μg·m L-1、0.13-0.25μg·mL-1;克拉霉素对Hp的MIC和MBC范围分别为0.01-0.02μg·mL-1、0.02-0.03μg·mL-1;甲硝唑对Hp的MIC和MBC范围分别为1.00-2.00μg·m L-1、4.00-8.00μg·mL-1;左氧氟沙星对Hp的MIC和MBC范围分别为0.25-0.50μg·mL-1、1.00-2.00μg·mL-1。3.Hp对致死浓度的阿莫西林可形成持留,表现为在迟缓期和对数期持留菌形成数目少,而稳定期后持留菌数目显著增多的特征,且不受药物浓度的影响。甲硝唑对Hp持留菌有一定的杀灭作用。致死浓度的克拉霉素和左氧氟沙星作用于Hp后活菌变化表现为先下降后上升的特征。4.Hp培养至40 h与14 h比较,有39个基因表达下调,17个基因表达上调。主要集中在核糖体(包含基因:rpmC、rpmF、rpmJ、rpmI、rplR、rplT、rplO、rplQ、rplY、rplX、rplE、rplJ、rplL、rplF、rpsJ、rpsK、rpsF、rpsE、rpsH、rpsR、rpsN、rpsM、rpsB、rpsU)及代谢(包含基因:tfs、rpoA、map、nuoA、tpx、gdhA、ureA、jhp_0586、jhp_0585)相关的通路上。5.陇马陆与红芪、红景天、黄连、马齿苋和蒲公英配伍后对Hp均有抑制作用,以与黄连配伍后抑制作用最强。陇马陆、黄连、红景天、陇马陆-黄连、陇马陆-红景天对Hp的MIC分别为20-40、0.63-1.25、1.25-2.50、1.25-2.50、10-20mg·m L-1。与陇马陆配伍后,黄连和红景天的抗Hp的MIC仅为单药的1/2倍。结论:1.Hp在体外培养状态下,可形成对阿莫西林耐受的持留菌,而且呈现迟缓期和对数期持留菌形成少,稳定期形成多且持留深度深的特征。其形成机制可能与核糖体及代谢相关的通路有关。2.陇马陆分别与红芪、红景天、黄连、马齿苋、蒲公英配伍对Hp均有一定的抑菌作用,且陇马陆与黄连、红景天配伍抗Hp可产生协同效应。
【学位授予单位】:兰州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:R573

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