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《兰州大学》 2017年
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沉默DDX49基因对骨肉瘤细胞增殖的影响

叶宏基  
【摘要】:背景骨肉瘤是最常见的骨原发性恶性肿瘤,其恶性程度高,容易发生远处转移。与其它的骨肿瘤相比,骨肉瘤患者的预后较差。然而,骨肉瘤患者的生存率在过去30年里没有得到明显的提高。很多学者认为通过研究骨肉瘤的生物学特性将有助于找到治疗骨肉瘤的有效方法。DEAD-box RNA解旋酶不仅参与几乎所有与RNA代谢有关的过程,还参与调控转录和翻译,并且与细胞增殖及肿瘤转化有关。DDX49是DEAD-box RNA解旋酶家族中的一个成员,目前尚无具体阐述DDX49在肿瘤细胞中的表达及其生物学功能的研究报道。目的本研究旨在研究DDX49基因在骨肉瘤细胞增殖及凋亡中的作用,为骨肉瘤的诊断和治疗提供新的分子靶点。方法用实时定量聚合酶链反应(Quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测DDX49基因在四种骨肉瘤细胞中的表达,用慢病毒介导的RNA干扰技术沉默DDX49在U-2OS细胞中的表达,然后用qRT-PCR检测DDX49基因的敲减效率,用Celigo细胞扫描分析仪动态观察细胞增殖情况及细胞个数的变化,用噻唑兰(methylthiazoletetrazolium,MTT)实验检测细胞活力,用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果qRT-PCR结果DDX49基因在四种骨肉瘤细胞中有表达;经RNA干扰慢病毒感染U-2OS细胞3天后,qRT-PCR结果显示RNA干扰慢病毒能有效抑制U-2OS细胞中DDX49基因在mRNA水平的表达;经慢病毒感染U-2OS细胞后用Celigo细胞扫描分析仪连续检测5天,结果显示,抑制DDX49基因的表达能显著抑制U-2OS细胞的增殖;经慢病毒感染U-2OS细胞3天后,MTT实验连续检测5天,结果显示,与DDX49基因非沉默组相比,沉默组在波长490 nm处的吸光率随时间增加逐渐降低,表明抑制DDX49基因的表达能明显降低U-2OS细胞的活力;经慢病毒感染5天后,DDX49沉默组发生凋亡的U-2OS细胞显著增加,提示DDX49基因与U-2OS细胞的凋亡显著相关。结论DDX49基因在人骨肉瘤细胞U-2OS细胞的增殖和凋亡中起重要作用,可能是潜在的治疗骨肉瘤的分子靶点。
【学位授予单位】:兰州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:R738.1

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