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《兰州大学》 2017年
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骨髓间充质干细胞外泌体对肿瘤细胞生长作用的实验研究

齐进  
【摘要】:背景与目的恶性肿瘤是导致人类死亡的首要原因,随着人民生活水平的不断提高、人类寿命不断延长,恶性肿瘤的发病率和死亡率呈不断上升的趋势,本实验的目的是研究人骨髓间充质干细胞源性外泌体在胃癌SGC7901、骨肉瘤MG63细胞生长、侵袭过程中起到的作用以及发现其对胃癌SGC7901、骨肉瘤MG63细胞生长过程中涉及到的信号通路。方法采用贴壁培养法分离人骨髓间充质干细胞,倒置相差显微镜观察间充质干细胞形态,流式细胞技术对人骨髓间充质干细胞鉴定。采用梯度离心分离法、超速离心法分离人骨髓间充质干细胞外泌体,透射电镜观察外泌体形态、Western Blot检测外泌体特异性分子标记物Hsp70、CD63。PKH-26对间充质干细胞外泌体进行标记,共聚焦纤维镜观察间充质干细胞外泌体被胃癌SGC7901、骨肉瘤MG63摄取,并采用CCK-8法、Transwell实验、细胞划痕实验、RT-PCR技术及Western Blot技术分析外泌体干预前后胃癌SGC7901、骨肉瘤MG63细胞增殖、迁移和侵袭能力以及Hedgehog信号通路相关蛋白Smoothened,Patched-1,Gli1和Shh表达情况。利用Hedgehog信号通路拮抗剂GANT-61进一步验证Hedgehog信号通路在人骨髓间充质干细胞源性外泌体介导胃癌SGC7901、骨肉瘤MG63细胞增殖、迁移过程中的作用。结果人骨髓间充质干细胞外泌体得到成功分离,透射电镜观察到外泌体超微结构,Western Blot检测到外泌体表面特异性分子标记物Hsp70、CD63。共聚焦显微镜观察到胃癌SGC7901、骨肉瘤MG63细胞摄取外泌体。人骨髓间充质干细胞源性外泌体被胃癌SGC7901、骨肉瘤MG63细胞摄取后,CCK-8实验证实外泌体摄取后的肿瘤细胞生长能力明显增强,并且随着外泌体浓度的不断增加,肿瘤细胞生长能力不断增强。Western Blot及RT-PCR实验表明外泌体处理后的 SGC7901、MG-63 细胞 Hedgehog 信号通路蛋白 Smoothened,Ptch1,Gli1和Shh表达量增加,划痕实验及Transwell实验表明胃癌SGC7901、骨肉瘤MG63细胞株摄取间充质干细胞外泌体后迁移能力明显增强,而摄取间充质干细胞外泌体的胃癌SGC7901、骨肉瘤MG63细胞在GANT-61干预后细胞生长及迁移能力明显减弱,并且Hedgehog信号通路蛋白Smoothened,Ptch1,Gli1和Shh表达量降低。结论人骨髓间充质干细胞源性外泌体对胃癌、骨肉瘤细胞生长、侵袭能力具有促进作用,而且Hedgehog信号通路可能参与人骨髓间充质干细胞外泌体介导的肿瘤细胞生长、侵袭过程。
【学位授予单位】:兰州大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:R730.2

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