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《兰州大学》 2006年
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四种常用中草药再生体系的建立及甘肃马先蒿中PPG的初步测定

何雯婷  
【摘要】:本文以甘肃马先蒿、牛蒡、王不留行、华西委陵菜四种中草药为实验材料,首次完整建立了其组织培养再生体系,并且用薄层层析初步检测了甘肃马先蒿中的抗癌有效成分苯丙素甙(PPG,Phenylpropanoid Glycosides)的含量。 1.建立了甘肃马先蒿(Pedicularis kansuensis Maxim)的再生体系,这也是马先蒿属植物中首次离体培养成功。采用低温浸泡,激素处理等手段提高了甘肃马先蒿种子的萌发率。以甘肃马先蒿无菌苗的子叶、下胚轴和根做外植体,以MS为基本培养基,在不同激素成分及其浓度配比的培养基中诱导愈伤组织和不定芽的分化,发现根是诱导愈伤组织的最佳外植体,由下胚轴来的愈伤组织易分化,而子叶和根诱导的愈伤组织几乎不分化。组织学观察发现其愈伤组织表面或内部有胚性细胞团,证明甘肃马先蒿再生体系有一部分是通过胚状体途径建立的。将长2~3cm的芽转移到生根培养基后大概有60%生根。经过渡移栽最终成活率为41.6%。甘肃马先蒿的愈伤组织中葡萄糖和蔗糖含量较高,目前还未检测到抗癌有效成分苯丙素甙,完整的再生苗中含有少量的苯丙素甙。 2.通过对牛蒡(Arctium lappa L.)不同外植体、不同激素配比的比较研究,建立了牛蒡离体培养高效植株再生体系。牛蒡子叶与下胚轴切段在含2.0mg/L2,4-D和0.5~2.0mg/L BA的MS培养基中愈伤组织诱导率可以达到87%~100%;在1.0~3.0mg/L NAA和0.5~2.0mg/L BA的MS培养基上通过愈伤组织间接分化或外植体直接分化形成不定芽,其中愈伤组织分化率可达100%;下胚轴的分化率明显高于子叶,在1.0mg/L NAA和1.0mg/L BA的MS培养基上下胚轴直接分化率达77.3%。组织学观察发现牛蒡再生有器官发生和体细胞胚发生两种途径。将生长状态良好的不定芽转至含1.0mg/L IBA和1.0mg/L NAA的1/2MS培养基上生根,移栽,成活率达到93.3%。从愈伤组织诱导到再生苗栽培成活,大约需要13周。组培苗次年开花并结实,生长形态特征正常。 3.成功地建立了王不留行(Vaccaria segetalls)的高频再生体系。以王不留行的子叶、下胚轴为外植体诱导形成愈伤组织,在低浓度NAA下(0.1mg/L和0.2mg/L)高频分化出不定芽,且这些不定芽在无激素的1/2MS培养基上极易生
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