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《兰州大学》 2009年
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抗草甘膦aroAM1基因转化烟草的研究

闫广为  
【摘要】: 草甘膦是70年代开发的世界上最为成功的一种除草剂。由于具有广谱性,对环境无污染,对人和动物的健康几乎不影响,能除掉其他除草剂难以铲除的多种多年生植物等优点,这种除草剂被广泛使用。 近年来,抗草甘膦转基因作物的研究进展迅速。从1996年美国种植抗草甘膦转基因大豆开始,全球转基因作物的数量在逐年增加,然而这些品种几乎都是孟山都公司的专利,因此开发自主知识产权的、商业化的抗草甘膦作物,成为当前国内研究的重点。 5-烯醇式丙酮酸-3-磷酸莽草酸合成酶(EPSPS)是草甘膦作用机理中的关键酶之一,它由aroA基因所编码。本实验所用基因为沙门氏菌(Salmonella typhimurium)和大肠杆菌(Escherichia coli)中aroA基因的重组基因aroAM1。本实验通过农杆菌介导法,用农杆菌感染受伤的烟草叶片细胞,使外源基因aroAM1转化到烟草基因组中。最后,利用组织培养技术,再生出转基因烟草植株。 获得转aroAM1基因的农杆菌后,在优化的含有0.1μg/ml IAA,2μg/ml 6-BA,500μg/ml CB,24μmol/L草甘膦的培养基上培养烟草叶片,获得再生烟草植株。然后在三个不同水平上对再生烟草植株进行检测:在分子水平上,PCR检测阳性率为100%;在器官水平上,转基因的离体烟草叶片对草甘膦的抗性增加了12倍;在植株水平上,用5mmol/L草甘膦涂抹非转基因烟草和转基因烟草叶片,前者叶片枯黄,而后者变化不明显。本实验结果表明在优化的草甘膦抗性培养基上筛选烟草,可获得有明显抗性效果的转基因烟草植株。由于草甘膦的安全无污染等特点,以及本实验对aroAM1基因转入模式植物烟草中功能的验证,今后可深入的研究此基因在转基因植物的定位、目的蛋白EPSPS的表达以及草甘膦耐受机制等方面奠定基础。
【学位授予单位】:兰州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:S572

【参考文献】
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