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1.结核分枝杆菌去标签Mtb8.4-Hspx和Hspx-Mtb8.4基因克隆及表达 2.FTY720对肾移植受者治疗的安全性和有效性系统评价

吴玉敏  
【摘要】: 目的构建结核分枝杆菌去标签重组蛋白Mtb8.4-Hspx(MH)和Hspx-Mtb8(HM)原核表达载体,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达以作为结核亚单位疫苗备选抗原。 方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,应用PCR法扩增Mtb8.4(含NdeⅠ和SacⅠ位点)、Hspx(含NdeⅠ和SacⅠ位点)基因,产物分别经NdeⅠ和SacⅠ酶切后与质粒pET30a连接,构建重组质粒pET30a-Mtb8.和pET30a-Hspx,并转化大肠埃希菌DH5α。抽提重组质粒,SacⅠ和HindⅢ分别酶切该重组质粒后与同样酶切的PCR产物Hspx(含SacⅠ和HindⅢ位点)和Mtb8.4(含SacⅠ和HindⅢ点)连接,构建重组质粒pET30a-Mtb8.4-Hspx和pET30a-Hspx-Mtb8.4,即pET30a-MH和pET30a-HM。转化大肠埃希菌BL21(DE3)中,以终浓度为0.5mmoL/L的IPTG诱导蛋白表达,收菌、超声破碎仪破菌、离心、PBS液重悬菌体沉淀物,行SDS-PAGE电泳。 结果去标签MH和HM融合蛋白分子质量为28000,经SDS-PAGE蛋白电泳验证与实测相符。 结论去标签结核杆菌重组蛋白MH和HM的成功表达,为进一步研究结核亚单位疫苗免疫原性奠定了基础。 目的评价FTY720对肾移植受者的免疫抑制的有效性和安全性。 方法计算机检索MEDLINE (1966-2010); EMBASE(1974-2010); Cochrane Library(2009年第4期);The National Research Register;中文科技期刊数据库(1989-2010)、中国学术期刊全文数据库(1994-2010)。 结果4个研究共1883个病人符合纳入标准。在6个月和12个月,对比麦考酚酸酯(MMF)加全剂量环孢霉素A (CsA)——(MMF+FDC), FTY720(5.0mg)加减半剂量的环孢霉素A (CsA) [FTY720 (5.0mg)+RDC]急性排斥反应率显著增高[RR=1.45,95% CI (1.17 to 1.79)],而FTY720(2.5mg)加上全剂量CsA[FTY720(2.5mg)+FDC]组无显著变化[P=0.32, P=0.60]。FTY720 (2.5mg)+FDC对比MMF+FDC,在死亡率、移植物丢失率和用抗体治疗的急性排斥反应发生率均无显著差别,其可信区间分别为[RR=0.29,95% CI 0.04 to 2.17], [RR=1.31, 95% CI 0.56 to 3.08] [RR=0.65,95% CI 0.27 to 1.57]。在药物所致副作用方面,FTY720引起患者病毒感染、心动过缓的发生率比MMF高[RR=0.59,95% CI 0.38 to 0.94], [RR=3.58,95% CI 2.08 to 6.24],但在细菌感染(P=0.43)、巨细胞病毒感染(P=0.44)、泌尿道感染(P=0.92)及视网膜水肿(P=0.26)等方面无显著差别。 结论目前的研究表明FTY720 (5.0mg)+RDC致BPAR发生率提高,故不支持CsA减半剂量。而FTY720 (2.5mg)+FDC在预防排斥反应、降低死亡率及BPAR发生率和MMF+FDC作用相似。此外,FTY720组对比MMF组更能降低病毒感染的发生率但却使心动过缓的发生率提高,因此在临床选择用药时应注意药物之间的协同搭配,注意个体差异,做到联合、合理用药。


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