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《兰州大学》 2010年
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独一味环烯醚萜苷镇痛抗炎作用及其机理研究

尚小飞  
【摘要】: 目的 1.从独一味药材中富集提取总环烯醚萜苷,研究其在小鼠体内的镇痛、抗炎活性及可能机理。 2.研究独一味总环烯醚萜苷抑制脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞RAW264.7释放一氧化氮(NO)和前列腺素(PGE2)等炎症因子的作用,探讨其体外抗炎活性及机理。 3.研究独一味中三个环烯醚萜苷单体化合物8-O-乙酰山栀子苷甲酯、PhloyosideⅡ和山栀子苷甲酯抑制LPS诱导巨噬细胞RAW264.7释放NO和PGE2等炎症因子的作用,探讨其体外抗炎活性及机理。 4.研究比较独一味和其近属植物糙苏不同药用部位中的环烯醚萜苷类成分及含量,为独一味代用品的寻找提供借鉴。 方法 1.运用大孔吸附树脂结合聚酰胺柱色谱的方法,从独一味药材中富集分离总环烯醚萜苷,并运用紫外分光光度法(UV)和高效液相色谱法(HPLC)对其进行定性、定量分析。采用硅胶柱层析结合聚酰胺色谱从独一味总环烯醚萜苷中分离得到三个单体化合物8-O-乙酰山栀子苷甲酯、PhloyosideⅡ和山栀子苷甲酯。 2.独一味总环烯醚萜苷小鼠尾静脉一次注射给药后,采用醋酸扭体实验、热板实验、福尔马林实验、角叉菜胶诱导足肿胀实验、二甲苯诱导耳肿胀实验和醋酸诱导小鼠腹膜血管通透性等实验评价其体内镇痛、抗炎作用。 3.培养巨噬细胞RAW264.7,测定独一味总环烯醚萜苷对脂多糖诱导细胞释放NO和PGE2的抑制率,并通过MTT实验研究独一味总环烯醚萜苷的细胞毒性。 4.培养巨噬细胞RAW264.7,测定独一味中三个环烯醚萜苷单体化合物8-O-乙酰山栀子苷甲酯、PhloyosideⅡ和山栀子苷甲酯对脂多糖诱导细胞释放NO和PGE2的抑制率,并通过MTT实验研究药物的细胞毒性。 5.采用薄层色谱法(TLC)鉴别比较独一味与糙苏不同药用部位的环烯醚萜苷类成分,并建立高效液相色谱法(HPLC)测定其中的8-O-乙酰山栀子苷甲酯的含量。 结果 1.独一味总环烯醚萜苷的的定性、定量分析结果表明,从独一味中富集提取的总环烯醚萜苷和8-O-乙酰山栀子苷甲酯具有相似的紫外吸收,最大吸收波长为237nm,总环烯醚萜苷中环烯醚萜苷的含量为66.92%。HPLC分析显示,独一味水提取物和总环烯醚萜苷中的主要成分为8-去羟基山栀子苷、PhloyosideⅡ、山栀子苷甲酯、Loganin和8-O-乙酰山栀子苷甲酯。 2.小鼠体内实验结果表明,独一味总环烯醚萜苷能显著减少小鼠腹腔注射醋酸引起的扭体疼痛反应和足部注射福尔马林所致疼痛反应第二阶段的舔足次数(P0.05),且具有良好的剂量依赖性。但不能延长小鼠热板痛阈值,也不能减少足部注射福尔马林所致疼痛反应第一阶段的舔足次数;在抗炎实验中,总环烯醚萜苷能显著抑制角叉菜胶引起的足肿胀、二甲苯引起的耳肿胀,减少醋酸引起的血管通透性和白细胞游走数目增加,具有显著性差异(P0.05)。 3.独一味总环烯醚萜苷体外抗炎实验结果表明,高、中、低(25、10、1μg/ml)三个剂量组均能显著降低LPS刺激细胞释放NO的含量(P0.01),但剂量依赖性不强;50μgml、10/μg/ml、1μ/ml组能显著抑制LPS刺激细胞释放PGE2的含量(P0.01),具有剂量依赖性。MTT实验结果表明,除超高剂量(400μg/ml)外,独一味总环烯醚萜苷没有表现出对巨噬细胞RAW264.7的细胞毒性。 4.独一味总环烯醚萜苷三个单体化合物的体外抗炎活性实验结果表明,10、1μg/ml山栀子苷甲酯和10μg/ml 8-O-乙酰山栀子苷甲酯对LPS诱导NO释放的抑制率分别为30%、44%和21%,特别是山栀子苷甲酯的抑制NO释放作用更强。同时8-O-乙酰山栀子苷甲酯、PhloyosideⅡ和山栀子苷甲酯(10μg/ml)均能抑制PGE2的释放,具有显著性差异。MTT实验结果表明,三个单体化合物的高、低剂量组均没有明显的细胞毒性。 5.独一味与糙苏具有十分相似的薄层色谱图;独一味、糙苏地上部分及独一味、糙苏根中8-O-乙酰氧基山栀子苷甲酯含量分别为17.41、0.5、6.81和8.50 mg/g。上述结果表明,独一味中的8-O-乙酰氧基山栀子苷甲酯含量高于糙苏。同时独一味地上部分中8-O-乙酰氧基山栀子苷甲酯含量高于根,而糙苏的地上部分含量低于其根。 结论 1.大孔吸附树脂结合聚酰胺柱法可以更好的富集分离独一味总环烯醚萜苷。 2.在体内实验中,独一味总环烯醚萜苷表现出良好的外周镇痛、抗炎活性。 3.在体外实验中,独一味总环烯醚萜苷能显著抑制脂多糖诱导巨噬细胞释放NO和PGE2等炎症因子,具有良好的抗炎活性。在实验剂量内,未见明显细胞毒性。 4.8-O-乙酰山栀子苷甲酯、PhloyosideⅡ和山栀子苷甲酯三个独一味环烯醚萜苷单体化合物均能抑制LPS诱导巨噬细胞释放NO和PGE2等炎症因子。相比于模型组,山栀子苷甲酯的高、低剂量均有极显著性差异,表现出了良好的体外抗炎活性。在实验剂量内,三种单体化合物没有细胞毒性。 5.糙苏含有与独一味相近的环烯醚萜苷类成分,但含量较低,不宜作为独一味的代用品。
【学位授予单位】:兰州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R285

【引证文献】
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【参考文献】
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【共引文献】
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【同被引文献】
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中国重要报纸全文数据库 前1条
1 刘 斌;萜类化合物--中药化学(十七)[N];中国中医药报;2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 朴龙;草苁蓉环烯醚萜苷的肝损伤保护作用及抑瘤作用的研究[D];延边大学;2011年
2 李茂星;藏药独一味止血活性部位的研究[D];兰州大学;2008年
3 李静;镇坪产玄参的化学成分及应用研究[D];西北大学;2009年
4 刘小红;基于组合化学的萜类生物碱的制备与生物活性研究[D];山东大学;2008年
5 周婷婷;栀子化合物组与代谢物组的多维色谱—质谱法研究[D];第二军医大学;2007年
6 孙佳明;破骨风和山梗菜化学成分研究[D];中国协和医科大学;2007年
7 王东辉;环境要素对玄参次生代谢的影响[D];中国科学院研究生院(教育部水土保持与生态环境研究中心);2010年
8 宋卫霞;金银花水溶性化学成分研究[D];中国协和医科大学;2008年
9 樊慧;三种植物和一种真菌的天然活性成分研究[D];华东师范大学;2011年
10 许惠仙;草苁蓉环烯醚萜苷对大鼠肝脏癌前病变保护机制的实验研究[D];延边大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 贺娟妮;山茱萸中三种环烯醚萜苷的微波提取及高效液相色谱测定[D];陕西师范大学;2011年
2 褚思娟;山茱萸环烯醚萜苷对乙酰胆碱代谢酶系统的影响[D];首都医科大学;2013年
3 赵成城;栀子总环烯醚萜苷提取物的工艺及质量研究[D];成都中医药大学;2011年
4 金延华;草苁蓉环烯醚萜苷对肝癌前病变大鼠肝脏标志酶及抗氧化酶的影响[D];延边大学;2011年
5 王玉磊;巴戟天中主要环烯醚萜苷的研究[D];北京中医药大学;2011年
6 郝婷;素馨花总环烯醚萜苷提取纯化工艺及质量标准的研究[D];承德医学院;2011年
7 刘志勤;环烯醚萜苷治疗原发性膝骨关节炎的临床观察与血清学分析[D];中南大学;2012年
8 陈芳;栀子总环烯醚萜苷纯化及成型工艺研究[D];重庆医科大学;2010年
9 刘建斌;杜仲种子的化学成分研究[D];西北大学;2006年
10 李异政;桂花种子和酸浆全草的化学成分研究[D];广西师范大学;2007年
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