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多溴联苯醚诱导下的细胞间隙连接通讯抑制效应及免疫细胞毒性

严川  
【摘要】: 多溴联苯醚(PBDEs)是一类有机溴化阻燃剂,由于其广泛应用于工业生产及日常生活中,已在多种环境介质及生物体内检测出PBDEs的各种同系物,其生态毒性及健康危害引起公众的广泛关注。然而,目前对于PBDEs的毒性机制研究仍然有限,特别是对免疫毒性及细胞间隙连接通讯的影响研究尤为缺乏。本文分为两个方面,分别研究PBDEs对免疫细胞的凋亡作用及机制和对细胞间隙连接通讯的影响。 第一部分活性氧与线粒体损伤在2,2',4,4'-四溴联苯醚诱导的Jurkat细胞凋亡中的作用 2,2',4,4'-四溴联苯醚(PBDE-47)是PBDEs同系物之一,广泛存在于环境中,在诸多方面危害人类的健康。本文通过PBDE-47对Jurkat细胞的体外染毒实验,研究了PBDE-47对的Jurkat细胞活力、细胞凋亡、ROS水平及线粒体膜电位的影响,并通过加入自由基清除剂NAC以研究ROS与线粒体损伤在凋亡过程的作用及相互关系。结果显示,PBDE-47导致Jurkat细胞活力的显著下降,呈剂量依赖性。通过Hoechst 33258和碘化丙啶(PI)染色结果显示,PBDE-47在25-100 gM浓度时对Jurkat细胞有明显的促凋亡作用,同时出现ROS水平的上升和线粒体膜电位的下降。NAC可通过降低ROS水平和恢复线粒体膜电位而减轻PBDE-47引起的细胞凋亡。以上结果表明,PBDE-47可导致Jurkat细胞凋亡,在此过程中,ROS和线粒体功能的损伤起着重要的作用。 第二部分多溴联苯醚对HL-7702细胞和小鼠皮肤成纤维细胞间隙连接通讯的影响 本实验利用划痕染料示踪标记(SLDT)方法,检测了PBDEs(PBDE-47和PBDE-209)对人肝正常细胞(HL-7702)与小鼠皮肤成纤维细胞间隙连接通讯(GJIC)的影响。结果表明,PBDE-47与PBDE-209均显著抑制HL-7702细胞的GJIC (10-50μmol/L),随着剂量的升高,抑制作用也随之增强。在小鼠皮肤成纤维细胞中,PBDE-47在3.75-50μmol/L范围内对GJIC有显著的抑制作用,而PBDE-209在15-50μmol/L范围内对GJIC有显著的抑制作用,在两种细胞中,PBDE-47的抑制作用都大于PBDE-209。停止染毒后,细胞GJIC可以一定程度的恢复。本实验表明PBDEs对细胞间隙连接通讯有抑制作用,为进一步研究PBDEs的毒性机制提供了科学依据。


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