收藏本站
《兰州大学》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

硫酸镍对小鼠精原细胞Bax和Caspase3 mRNA和蛋白表达的影响

丁皎  
【摘要】: 目的建立小鼠精原细胞体外分离纯化和培养的方法,观察硫酸镍对体外培养的小鼠精原细胞氧化应激效应指标及其Bax和Caspase3 mRNA和蛋白表达的影响,探讨镍致小鼠精原细胞损伤的可能机制。 方法(1)选择6~8d健康雄性小鼠,无菌条件下摘取双侧睾丸,采用酶消化法(1g/L胶原酶Ⅳ、1.5g/L透明质酸酶和0.25%胰蛋白酶)结合Percoll密度梯度离心法分离纯化小鼠精原细胞,置于二氧化碳培养箱(37℃、5%CO2)贴壁培养后进一步纯化,并采用碱性磷酸酶进行纯度鉴定。(2)取对数生长期细胞,设置对照组和染毒组,即硫酸镍(NiSO4)50、100、200、400、800μmol/L组,染毒后分别培养6、12、24和36小时;在各染毒终点收割细胞,超声处理后离心取上清液,采用酶标仪检测总抗氧化能力(T-AOC)、羟自由基(-OH·)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平的变化。(3)取对数生长期细胞,每瓶接种细胞体积10ml(1×107个/ml),设置对照组和染毒组,即硫酸镍200、400μmol/L组,染毒后分别培养12h、24h;染毒结束后,收割各染毒终点细胞分别提取精原细胞总RNA和总蛋白,采用实时荧光定量PCR技术和Western-bilting技术检测小鼠精原细胞Bax和Caspase3 mRNA和蛋白的表达水平。 结果(1)分离纯化的小鼠精原细胞培养24h后,倒置显微镜下可见精原细胞呈散在或成串、成链状生长,部分细胞胞膜相连出现细胞间桥,单个精原细胞胞体较大、胞质少,呈圆形,核大而圆,核中央可见1~3个核仁,细胞饱满发亮,折光性强。碱性磷酸酶染色后,大量精原细胞上有棕褐色沉淀物附着。(2)镍可引起精原细胞-OH·含量升高,T-AOC、GSH-Px(?)力降低。相同染毒时间,NiSO4各浓度组与对照组比较:染毒各时间段,NiSO4200、400和800μmol/L组T-AOC、-OH·含量及其GSH-Px活力与对照组比较差异均有统计学意义(P0.05);染毒36h后NiSO450μmol/L组开始出现-OH·含量升高及T-AOC水平的下降(P0.05),并呈现明显的剂量-效应关系。相同染毒浓度,各染毒时间组与0h组比较:NiSO450μmol/L染毒36h后开始出现T-AOC含量的降低和-OH·含量的升高(P0.05);NiSO4 100μmol/L染毒24h和36h均出现GSH-Px、-OH·和T-AOC的改变(P0.05);NiSO4200μmol/L及其以上组,各时间组T-AOC、-OH、GSH-Px与Oh组比较差异均有统计学意义(P0.05),并呈现一定的时间-效应关系。(3)NiSO4200μmol/L、400μmol/L染毒12h和24h后,各组Bax和Caspase-3 mRNA的表达均上调,与对照组比较差异均有统计学意义(P0.05)。Western-bloting结果显示,硫酸镍各组Bax、Caspase3蛋白表达随着染毒时间和浓度的增加均有表达量上升的趋势。 结论酶消化法结合Percoll密度梯度离心法体外分离纯化和培养精原细胞是可行的,能够获得较高纯度的精原细胞。镍导致小鼠精原细胞的损伤可能与其所致氧化应激效应增强以及Bax和Caspase3 mRNA和蛋白表达上调有关。
【学位授予单位】:兰州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R96

免费申请
【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 张志刚;硫酸镍致原代培养大鼠睾丸间质细胞损伤的实验研究[D];兰州大学;2012年
2 李紫;镍铬联合染毒对雄性小鼠的生殖毒性[D];南华大学;2012年
3 郑菁;硫酸镍致体外培养的大鼠睾丸间质细胞凋亡的机制研究[D];兰州大学;2013年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 赵锐,官大威,杜宇;caspase在疾病与组织损伤中的作用[J];中国法医学杂志;2004年01期
2 郭燕舞,杨鹏飞,徐如祥;caspase-3在脑损伤时的作用[J];广东医学;2004年09期
3 李小明,孙志贤;细胞凋亡中的关键蛋白酶—Caspase-3[J];国外医学(分子生物学分册);1999年01期
4 吕维莉,邓智年,魏源文;镍与生物[J];广东微量元素科学;2003年10期
5 冀元棠;;镍—较新的微量营养元素[J];国外医学(卫生学分册);1986年01期
6 陈婉蓉,傅中滇,端礼荣;金属致畸的体外系统研究[J];环境与健康杂志;1994年01期
7 姜方旭,卢迪生,李玉绿,罗正兰,韩英士;正常小鼠睾丸的酶组织化学及氯化镍对其影响[J];湖南医科大学学报;1989年04期
8 李娟,韩丽华;益气活血中药对心肌细胞凋亡抑制作用的研究进展[J];河南中医;2004年09期
9 张学明,赖良学,李德雪,李子义,文兴豪,杜惜明,岳占碰,王延钊;小鼠精原细胞的分离和纯化[J];解剖学报;2000年03期
10 姜允申;重金属的生殖毒理学[J];化工劳动保护;2000年01期
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 常旭红;硫酸镍对小鼠精原细胞毒作用的实验研究[D];兰州大学;2009年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 戴中华,石年,刘恭平,韦艳宏,李煌元,陈丹,王斌;溴氰菊酯对PC12细胞Fas、FasL、TNFR1蛋白及凋亡的影响[J];癌变.畸变.突变;2005年02期
2 王翠玲;高玉鹏;李青旺;李文烨;黄晶;;小鼠精原细胞体外培养的研究[J];安徽农业科学;2007年06期
3 高晴晴;江和源;张建勇;袁新跃;寇小红;高琪;;大吉岭红茶酯提取物的分离及活性分析[J];安徽农业科学;2008年16期
4 董淑慧;高玉彤;潘彦珞;;瘦素与结直肠腺癌细胞凋亡的关系[J];安徽医药;2009年06期
5 汪铭书;程安春;刘芳;陈孝跃;刘伍梅;;仔猪人工感染猪繁殖与呼吸综合征病毒后宿主细胞凋亡动态变化规律的研究[J];病毒学报;2006年05期
6 蔡亚非,杜娟,张利军,李莲,刘庆华,周磊,杨媛媛,王根林;热应激奶牛外周血淋巴细胞凋亡相关基因表达及血液学分析[J];动物学报;2005年02期
7 李恩中;李德雪;张世庆;王常勇;张学明;王海滨;鲁景艳;王静;;以支持细胞为饲养层培养小鼠精原干细胞[J];动物学报;2006年04期
8 河春姬,胡扬,田野,包大鹏,衣龙彦;急性常氧运动后低氧暴露对体内自由基代谢的影响[J];北京体育大学学报;2005年06期
9 何伟黎;阎洪亮;徐海兴;姚晓敏;;VitE对足球运动员无氧训练血浆自由基水平和抗氧化能力的影响[J];北京体育大学学报;2006年02期
10 李丽;常波;;辽东木忽木对过度训练大鼠肾功能损伤预防作用的研究[J];北京体育大学学报;2009年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 倪鸣;袁志航;李荣芳;邬静;袁莉芸;文利新;袁慧;;醋酸棉酚对小鼠黄体细胞凋亡的影响[A];中国畜牧兽医学会家畜内科学分会第七届代表大会暨学术研讨会论文集(上册)[C];2011年
2 刘庆生;王加启;哈斯额尔敦;杨光;赵国琦;;十二指肠增量灌注游离亚麻酸对乳脂氧化稳定性影响[A];首届中国奶业大会论文集(上册)[C];2010年
3 王娟;沈孝丽;陈同强;ADILBEKOV J.;封士兰;;HPLC同时测定扶正解毒颗粒中5种成分的含量[A];甘肃省化学会第二十七届年会暨第九届甘肃省中学化学教学经验交流会论文摘要集[C];2011年
4 胡建新;何坚;;精原干细胞体外技术的进展[A];2007年贵州省医学会泌尿外科分会学术年会论文汇编[C];2007年
5 成钢;冯书堂;牟玉莲;;五指山猪近交系精原干细胞体外分离、培养实验研究[A];第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会——2005中国畜牧兽医学会学术年会论文集[C];2005年
6 倪鸣;袁慧;;棉酚对小鼠卵巢黄体细胞Bcl-2和Bax基因表达及孕激素影响的研究[A];中国畜牧兽医学会2008年学术年会暨第六届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集[C];2008年
7 岳卓;佘锐萍;田纪景;于品;朱金凤;常玲玲;;3-甲基-4-硝基酚对大鼠睾丸组织的损伤作用[A];中国畜牧兽医学会食品卫生学分会第十一次学术研讨会论文集[C];2010年
8 孙应彪;陈建华;赵健雄;朱玉真;;扶正解毒颗粒对硫酸镍致大鼠睾丸生殖细胞损伤的拮抗作用[A];2007年全国药物毒理学会议论文集[C];2007年
9 黄云梅;陈文列;胡海霞;黄祖芳;黄美雅;郑良朴;林如辉;李钻芳;杜建;;解毒消癥饮对胃癌细胞凋亡相关基因表达的激光共聚焦显微镜研究[A];第九届中国中西医结合实验医学学术研讨会论文汇编[C];2009年
10 张颖;;活血化瘀类中药药理学研究现状简述[A];中华中医药学会第五次眼科学术交流会论文汇编[C];2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 庞敏;虾夷扇贝毒素(Yessotoxins, YTXs)毒性作用的初步研究[D];中国海洋大学;2010年
2 江筠;莲藕中抗氧化成分的抗HIV-1活性及其作用机制研究[D];南开大学;2010年
3 张春敏;Survivin, Caspase-3在皮肤鳞状细胞癌中的表达及雄黄的体外干预研究[D];山东中医药大学;2010年
4 巩丽;人参皂甙Rg1对绝经后妇女阿尔茨海默病细胞模型的神经保护作用及机理研究[D];山东大学;2010年
5 陈朝晖;复方紫归膏在大鼠创口皮肤愈合中的作用及机理研究[D];成都中医药大学;2010年
6 郑锦花;天然抗氧化物拮抗胰岛素抵抗的分子靶点筛选[D];吉林大学;2011年
7 张海宁;血管性认知障碍大鼠脑突触小体的差异蛋白质组学研究[D];吉林大学;2011年
8 张宝石;~(18)F标记小分子肽(~(18)F-CP-18)早期评价肺癌化疗后细胞凋亡的基础研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
9 时素华;电针对大鼠脊髓损伤后细胞凋亡相关因子及神经再生的影响[D];北京中医药大学;2011年
10 杨广珍;肝癌癌蛋白p28~(GANK)增强细胞氧化应激耐受的作用与机制研究[D];第二军医大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张利芳;苦瓜多糖的纯化及其免疫和抗氧化活性作用[D];华中农业大学;2010年
2 刘香江;重金属铜和镉(Cu和Cd)及乙酰甲胺磷对矛尾复虾虎鱼毒性效应的研究[D];华中农业大学;2010年
3 张星刚;双水相萃取光度法测定铬(Ⅵ)、镍(Ⅱ)、锌(Ⅱ)的研究与应用[D];山东科技大学;2010年
4 苏晓东;氯化汞对大鼠睾丸支持细胞雄激素结合蛋白和抑制素表达的影响[D];郑州大学;2010年
5 王丽君;紫石英对排卵障碍大鼠模型卵巢局部FSH、LH影响的机制研究[D];湖南中医药大学;2010年
6 袁宏佳;紫石英中有害元素的研究[D];湖南中医药大学;2010年
7 姜荧安;荧光定量PCR检测哈维氏弧菌活的非可培养状态过程中的基因表达[D];中国海洋大学;2010年
8 柯可;多环芳烃—蒽对紫贻贝(Mytilus galloprpvincialis)生理生化效应的研究[D];中国海洋大学;2010年
9 徐佳丽;白首乌总苷A(CGA)酸水解产物的抗肿瘤作用研究[D];浙江中医药大学;2010年
10 张杨;地黄饮子对快速老化小鼠P8(SAMP8)定位导航学习记忆及氧化应激的影响[D];黑龙江中医药大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 考庆君,吴坤,李红卫,蔺玉华,姜丽英;三价铬和六价铬对小鼠骨髓细胞微核率和精子畸变影响的比较[J];癌变.畸变.突变;2004年03期
2 考庆君;吴坤;邓晶;谢立;孙昼;黄仁杰;;三价铬和六价铬对大鼠长期慢性毒性的比较[J];癌变.畸变.突变;2007年06期
3 张超;马建华;李剑;;改进型模糊数学法在土壤重金属污染分析中的应用[J];安徽农业科学;2009年04期
4 张文彬;刘璠;;铬离子对孕鼠的生理和生殖毒性[J];安徽医学;2011年04期
5 韦友欢;黄秋婵;苏秀芳;;镍对人体健康的危害效应及其机理研究[J];环境科学与管理;2008年09期
6 任福民;周玉松;牛牧晨;许兆义;;污泥中的重金属特性分析和生态风险评价[J];北京交通大学学报;2007年01期
7 刘光伟,龚守良;SCF/c-kit系统对生精细胞发育的调控作用[J];吉林大学学报(医学版);2002年05期
8 李维仁;韩勃萱;刘涛;李广永;周峰;巩艳青;高喆珠;崔万寿;白光一;辛钟成;;老年人睾丸间质细胞结构及StAR和P450scc蛋白表达的变化[J];北京大学学报(医学版);2011年04期
9 张镜清;;谈谈镍的毒性和含镍废水的治理[J];电镀与环保;1987年04期
10 胡勇强,李明;镍毒性的临床反应[J];国外医学(医学地理分册);2000年03期
中国硕士学位论文全文数据库 前9条
1 李成云;硫酸镍对大鼠睾丸细胞能量代谢的影响[D];兰州大学;2011年
2 刘海东;六价铬对大鼠睾丸支持细胞ABP、Tf和INH mRNA转录及蛋白表达的影响[D];郑州大学;2011年
3 王丽娟;硫酸镍诱导大鼠睾丸生精细胞凋亡及其对Bcl-2和Bax表达影响的实验研究[D];兰州大学;2006年
4 王晓辉;硫酸镍致雌性小鼠卵巢早衰毒作用及其机制的实验研究[D];兰州大学;2006年
5 彭景;成都市大气重金属污染特征及环境危害性评价的探讨[D];成都理工大学;2008年
6 常旭红;硫酸镍对小鼠精原细胞毒作用的实验研究[D];兰州大学;2009年
7 卢文艳;扶正解毒颗粒(FJK)对镍诱导大鼠睾丸细胞损伤的拮抗作用[D];兰州大学;2009年
8 张志刚;硫酸镍致原代培养大鼠睾丸间质细胞损伤的实验研究[D];兰州大学;2012年
9 李紫;镍铬联合染毒对雄性小鼠的生殖毒性[D];南华大学;2012年
【二级引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 郑菁;硫酸镍致体外培养的大鼠睾丸间质细胞凋亡的机制研究[D];兰州大学;2013年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陆彝芬,区宝祥,刘国贞,郑国珊,李增禧,盛少禹,叶子枫;微量元素镍在实验大鼠体内的分布[J];癌症;1984年02期
2 贺晓舟,张远强,张金山;大鼠睾丸生精小管上皮精子发生周期的PAS法判定[J];动物学杂志;2004年04期
3 张远强,王红,胡静;雌激素受体β亚型在大鼠睾丸发育过程中的表达和定位[J];第四军医大学学报;2003年04期
4 杜宇,官大威,赵锐;小鼠皮肤切创愈合过程中caspase-6、-7表达的免疫组织化学研究[J];中国法医学杂志;2003年05期
5 陶陆阳,陈溪萍,丁梅,李延阁,官大威;实验性脑挫伤后caspase-1表达的研究[J];法医学杂志;2003年01期
6 吴耀华;性腺细胞的凋亡[J];国外医学.内分泌学分册;1996年03期
7 宋宏文,杨广夫;[J];国外医学(医学地理分册);1998年03期
8 王亚轩;睾丸生殖细胞凋亡及其调控研究进展[J];国外医学(计划生育分册);1999年03期
9 杨筱珍,陈耀星,王子旭,佘锐萍;基因对雄性生殖细胞凋亡调控的研究进展[J];中国畜牧兽医;2004年01期
10 李青仁;苏斌;李胜钏;;微量元素钴、镍与人体健康[J];广东微量元素科学;2008年01期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 任晓娟;颜光涛;王桂琴;郝秀华;林季;邓子辉;薛辉;张凯;;瘦素对小鼠胸腺细胞凋亡的保护机制[J];免疫学杂志;2008年05期
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 丁皎;硫酸镍对小鼠精原细胞Bax和Caspase3 mRNA和蛋白表达的影响[D];兰州大学;2010年
中国知网广告投放
相关机构
>兰州大学
相关作者
>丁皎
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026