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《兰州理工大学》 2010年
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根癌农杆菌介导AtPCS1基因转化甘肃紫花苜蓿的研究

王兆胡  
【摘要】: 利用植物修复重金属污染的土壤是一种“绿色”低成本的环境修复手段。本实验通过遗传转化技术将重金属螯合肽合成酶基因AtPCS1转入生物量大、适应性强的紫花苜蓿中,以期获得能富集重金属的转基因植株,为今后的污染土壤修复工作提供基础材料。 首先,研究了陇东、甘农三号、甘农一号等九个基因型的紫花苜蓿的子叶真叶和胚轴在不同培养基上的愈伤组织形成及分化能力。结果表明:子叶的再生能力强于叶片和胚轴;陇东和甘农一号两个品种分化能力最强,其子叶愈伤组织的形成率分别为95.0%和94.0%,分化率均为45.0%;F培养基和G培养基是子叶和胚轴愈伤组织形成及分化的最佳培养基。进一步比较了陇东、甘农三号和甘农一号的真叶、胚轴、子叶、茎段不同外的植体的分化再生能力,茎段在G培养基上可以直接分化出苗,子叶较胚轴和叶片分化时间短,且丛生芽形成数量多。再生芽可在原培养基上直接分化出苗,并在蔗糖浓度为12.5g/L的1/2MS培养基上完成生根。 其次,用植物表达载体pBI121-AtPCS1转化农杆菌LBA4404和EHA105,经菌落PCR鉴定获得阳性菌,采用叶盘法对陇东和甘农一号两个品种不同类型的外植体遗传转化,通过GUS组织化学染色及对抗性愈伤的形成率分析,结果表明:子叶是适合转化的最佳外植体;陇东和甘农一号苜蓿子叶的转化效率无显著差异。转化后的外植体在含有卡那霉素和头孢霉素的F培养基上分化芽,在1/2MS培养基上顺利完成生根。 取部分转基因苗的叶片进行GUS染色和PCR鉴定,结果表明AtPCS1基因在苜蓿中得以表达。该基因的转录、翻译情况以及转基因植物对重金属耐受性能还需进一步的试验。
【学位授予单位】:兰州理工大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S541.9

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