收藏本站
《兰州理工大学》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

液相-SELEX方法的建立及变形链球菌葡糖基转移酶催化区特异适配体的筛选

李慧  
【摘要】: 葡糖基转移酶(Glucosyltransferase, GTF)是变形链球菌合成的重要致龋因子,催化蔗糖合成包括葡聚糖在内的多种胞外多糖。GTF结构包括催化区(Catalytic, CAT)和葡聚糖结合区(Glucan binding, GB或GLU)两个功能区段,其中催化区(CAT)是它的重要功能区段。 本实验首先利用基因工程的方法在大肠杆菌中分别诱导表达了带NusA的rNusA-CAT融合蛋白和NusA对照蛋白。菌体经超声破碎后,重组蛋白存在于菌体超声上清液中。利用载体上C端的His标签对重组蛋白进行了金属螯合层析纯化。蒽酮-硫酸法证明重组rNusA-CAT蛋白具有良好的催化活性。 由于传统SELEX技术筛选靶分子时,首先需要将靶分子进行纯化和固定,因而以天然构象存在于液相中的非纯化靶蛋白不能通过传统的方法进行筛选。为解决这一问题,本研究将凝胶阻滞(EMSA)的基本原理引入消减SELEX筛选过程,初步建立了一种基于凝胶阻滞的新筛选方法,实现了非纯化靶标蛋白的液相筛选(液相-SELEX技术)。实验采用随机区为35个碱基、全长78nt的ssDNA文库,以表达rNusA-CAT蛋白的未纯化上清为目的靶,以表达NusA蛋白的未纯化上清为消减靶,利用液相-SELEX技术进行了十轮的筛选。放射性同位素检测发现:随着筛选轮次的增加,ssDNA文库逐渐富集,富集的ssDNA配基可特异的识别rNusA-CAT蛋白,而不识别NusA蛋白。该结果的取得为今后GTF功能抑制剂的获得和龋齿病防治奠定基础。 液相-SELEX技术的建立实现了非纯化的、天然构象蛋白的筛选,为今后以病人血清、唾液、体液等作为筛选靶标,快速、有效地获得疾病的血清或体液标志物及分子探针提供一种新的技术方法,从而为疾病的诊断和治疗带来新的思路。
【学位授予单位】:兰州理工大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R378

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张春娟;曹槐;;适配体的研究进程与思考[J];云南农业大学学报;2007年04期
2 张达矜,邵宁生,范明;SELEX技术的应用及前景[J];生理科学进展;2001年04期
3 王琛,金由辛,王德宝;SELEX法筛选特异亲和淀粉的小分子RNA[J];生物化学与生物物理学报;1998年04期
4 陈莉,刘全胜,金由辛,王德宝;枯草杆菌TrpRS的固定化及亲和RNA筛选[J];中国生物化学与分子生物学报;2000年04期
5 林育芳,赵迎社;适体技术:疾病治疗和药物研究的新方向[J];生命的化学;2002年03期
6 董婉妮;廖伟娇;林勇平;;核酸适配子及其筛选进展[J];热带医学杂志;2009年11期
7 朱旭东,顾长国,邸雁飞;SELEX技术与适体[J];生命的化学;2002年03期
8 郭克泰,严馨蕊,黄国锦,徐春晓,柴映爽,张智清;抑制肿瘤坏死因子-α的DNA适配子的筛选与鉴定[J];生物工程学报;2003年06期
9 罗正良;严鹏科;;SELEX技术及其应用的研究进展[J];中国现代医生;2008年33期
10 冯香玲;许杨;;SELEX技术及其应用研究[J];食品科技;2008年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 秦莲花;柏文娟;胡忠义;刘忠华;杨华;;利用SELEX技术筛选获得结核患者血清IgG抗体适体[A];2011年中国防痨协会全国学术会议论文集[C];2011年
2 陈凡;刘君炎;潘勤;马运峰;刘胜武;屈雪菊;章晓联;;SELEX技术筛选的小分子核苷酸适配子特异性抑制结核杆菌(H37Rv)在小鼠体内的感染[A];第二届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会论文集[C];2006年
3 薛利云;周小明;邢达;;基于核酸适配体探针和酶辅助荧光信号扩增的等温高灵敏度蛋白检测方法[A];中国光学学会2011年学术大会摘要集[C];2011年
4 周宇凡;张桂梅;冯作化;;H22肿瘤细胞aptamer的筛选与结构分析[A];湖北省暨武汉生物化学与分子生物学学会第八届会员代表大会和第十五次学术年会论文摘要汇编[C];2004年
5 梁好均;刘伟;;核酸适配体链构象转变的研究[A];2011年全国高分子学术论文报告会论文摘要集[C];2011年
6 汪海林;章大鹏;;单核苷水平核酸适配体与蛋白质相互作用分析[A];中国化学会第28届学术年会第9分会场摘要集[C];2012年
7 邹如杏;娄新徽;;基于三段式适配体探针的可卡因的检测[A];中国化学会第28届学术年会第9分会场摘要集[C];2012年
8 谭蔚泓;;核酸适配体在肿瘤分子分型中的应用[A];中国化学会第28届学术年会第3分会场摘要集[C];2012年
9 蔡立;陈泽忠;唐宏武;;适配体连接的二氧化硅包裹钌吡啶荧光纳米探针用于乳腺癌细胞检测[A];中国化学会第28届学术年会第4分会场摘要集[C];2012年
10 唐吉军;郭磊;申睿;余涛;徐华;刘合珠;马小溪;谢剑炜;;基于适配体的实时定量PCR检测尿液中的人促红细胞生成素[A];中国化学会第27届学术年会第09分会场摘要集[C];2010年
中国重要报纸全文数据库 前3条
1 潘文;核酸适配体在医药领域应用前景广阔[N];中国医药报;2010年
2 记者 连雅婕 通讯员 于柏林 于洋;长春应化所 检测蛋白质有了新方法[N];长春日报;2010年
3 于洋 田野;蛋白质检测有了新方法[N];吉林日报;2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 马立强;体外SELEX技术筛选SpA适配子的研究及初步应用[D];第二军医大学;2012年
2 刘雪梅;随机RNA文库技术的建立及其应用[D];中国人民解放军军事医学科学院;2003年
3 廖世奇;核酸信标配基的构建、合成、活性鉴定及检测技术的研究[D];西北师范大学;2008年
4 胡燕;MUC1核酸适配体的筛选及其在肿瘤靶向治疗方面的初步应用研究[D];北京协和医学院;2012年
5 方念;AFP-L3核酸适配子的筛选鉴定及其对肝细胞癌诊断价值的初步研究[D];南昌大学;2008年
6 李安敏;识别艾滋病毒(Ⅰ型)核心抗原p24的核酸高分子配基的制备、活性鉴定及应用[D];西北师范大学;2009年
7 申睿;基于功能寡核苷酸分子的蛋白质检测新方法研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年
8 刘喆;基于核酸适配体的乳腺癌靶向治疗系统的构建及多壁碳纳米管间接毒性的体外研究[D];北京协和医学院;2012年
9 周桂萍;DNA杂交信号的介质调控和酶法放大研究[D];山东大学;2010年
10 刘俊;脂肪细胞特异性核酸适配体的筛选、分子识别及应用初探[D];中南大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李慧;液相-SELEX方法的建立及变形链球菌葡糖基转移酶催化区特异适配体的筛选[D];兰州理工大学;2010年
2 刘星;SELEX技术筛选弓形虫与巨细胞病毒抗体适配子及其SPR传感器快速检测抗体的方法学研究[D];第三军医大学;2012年
3 张书芹;急性髓系白血病M_2CD33~+/CD34~+细胞表面核酸适体的筛选与克隆及序列分析[D];中南大学;2010年
4 郭克泰;肿瘤坏死因子的寡核苷酸拮抗剂的筛选及其功能研究[D];安徽医科大学;2003年
5 马文静;适体筛选方法及分离方法的探讨[D];西南大学;2010年
6 王晓清;HBsAg特异性核酸适配体的筛选[D];兰州大学;2012年
7 刘晓静;SELEX技术筛选人TGF-β RⅡ亲和核酸库方法的建立[D];第三军医大学;2004年
8 张贝;随机单链寡核苷酸文库的PCR扩增特点及其在适配子筛选条件优化中的价值[D];南昌大学;2007年
9 周静;SELEX法筛选果蝇神经特异性拼接因子Dxl6的配体[D];东南大学;2006年
10 张慧卿;SELEX筛选技术的改良与创新[D];南昌大学;2008年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026