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《甘肃农业大学》 2010年
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番茄E8基因启动子的克隆及其在拟南芥中的表达分析

张艳云  
【摘要】: 果实特异性启动子在利用转基因技术改良果实品质性状中有着重要作用。番茄E8启动子是番茄转基因植物中常用的果实特异性启动子,但未见将其成功用于其他转基因植物果实中的报道。本研究利用E8启动子驱动E8基因小片段,使其在拟南芥长角果成熟期表达。通过E8启动子驱动外源基因E8小片段在拟南芥中的表达调控,探索番茄果实启动子E8是否可用于远源植物果实性状改良。取得的主要结果如下: (1)以番茄基因组DNA为模板,利用PCR技术获得了特异扩增产物。采用DNAman软件对克隆的E8基因启动子进行序列分析表明:该片段长约1088 bp,与GenBank中报道的E8基因启动子区同源性达99.87%,含有E8绑定蛋白结合区,TATA盒等调控元件。将E8启动子代替pCAMBIA2300中的CaMV 35S启动子,成功构建了中间表达载体pCAMBIA-E81.1。 (2)以番茄基因组DNA为模板,利用PCR技术,克隆得到长约517 bp的E8基因第一外显子区。通过DNAman软件分析表明:该片段与GenBank报道的E8基因第一外显子序列同源性达100%。对其氨基酸序列进行推导结果表明:所推导的氨基酸序列与GenBank上报道的氨基酸序列相似性为100%,说明所克隆的E8基因小片段所编码的阅读框正确。在此基础上,从克隆载体上酶切下E8基因小片段,连接到中间表达载体pCAMBIA-E81.1,最终成功构建植物表达载体pCAMBIA-E8,其正确性得到了PCR和酶切验证。 (3)将植物表达载体pCAMBIA-E8,通过农杆菌介导,采用花序侵染法将目的片段导入拟南芥植株,获得了T1代拟南芥种子。将T1代种子种植于含有卡那霉素的1/2MS培养基上进行抗性初筛。对初筛后的植株进行PCR和斑点杂交检测均呈阳性,最终确定为转基因植株。运用RT-PCR方法,对转基因拟南芥植株的根、茎、叶、长角果中E8基因的表达量进行分析,发现E8基因在拟南芥长角果中有较强的表达,而在其他组织中表达量很低,几乎检测不到。研究结果表明番茄果实特异性启动子E8具有在拟南芥中特异性表达的潜力。
【学位授予单位】:甘肃农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S641.2;Q943.2

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