收藏本站
《甘肃农业大学》 2009年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

猪传染性肝炎病毒的基因克隆及分子特征研究

姜中毅  
【摘要】:猪乙型肝炎病毒(Hepatitis B liked Virus of swine,swHBV)和猪戊型肝炎病毒(Swine Hepatitis E Virus, sw HEV)是当今影响人和动物健康的两种重大人畜共患传染病,两病的广泛流行和蔓延已给人类和动物的健康造成了严重威胁。在现代化规模养猪场中,HBV与HEV往往混合感染,发病率呈上升趋势。为了了解这两种病原在猪群中的感染状况及病原特征,本实验以HBV和HEV当地流行毒株为研究材料,进行了流行病学调查、基因克隆、基因图谱绘制、分子结构特征分析、分子诊断及免疫研究,主要研究成果如下: 1.应用ELISA技术,对兰州及周边地区的屠宰场、养殖场和散养猪采集血样976份,进行流行病学调查,并对猪HBV进行检测。结果如下: (1)猪类乙肝的各项检测结果显示,猪群中类乙肝阳性率较高,其中大三阳和小三阳率总体占到1.5%,病毒发现复制(e抗原)的猪占5.9%;产生抗体(表面抗体)的猪达16%。 (2)在甘肃的靖远和景泰地区猪类乙肝的阳性率比较高,分别达到25.7﹪和20.5﹪。 (3)八月龄以上的猪与八月龄以下的猪相比,类乙肝阳性率偏高,分别为14.6﹪和4.5﹪。 (4)泔水猪比集约化猪场猪乙类肝阳性率高,分别为23.2﹪和5.9﹪。 2.分段克隆了swHBV的S、C、P基因片段,绘制基因图谱和系统进化树,结果表明,扩增的swHBV-S基因长251bp,与国内外参考毒株CHN-QH5、Tibet127等12个毒株核苷酸序列的同源性分别为99.0%~99.6% ,其中与CHN-QH38株遗传距离较近;扩增的swHBV-C基因长550bp,与国内外参考毒株SK300、NSS-2等12个毒株核苷酸序列的同源性分别为99.0%~99.8%,其中与CHN-L45株遗传距离关系较近;扩增的swHBV-P基因长1414bp,与国内外参考毒株G683-1、S245-A2等10个毒株核苷酸序列的同源性分别为94.8%~95.8%,其中与S245-A2株遗传距离较近; 3.采集甘肃、青海部分地区养殖场的猪粪便和胆汁556头份,进行了猪戊型肝炎病毒(swHEV)的RT-PCR检测,粪便和胆汁中猪戊型肝炎阳性率高达4.2%和10.7%。 4.设计7对巢氏PCR引物,利用RT-RCR技术,分段克隆了涵盖swCH146株基因组的cDNA片段,并对swHEV146株全基因特征进行了分析,绘制了swCH146株全基因图谱和系统进化树,结果表明,该毒株全基因组长7284bp,与HEVG-4(AJ272108.1)和swCH25(AY594199.1)两株病毒亲缘关系最近,同属于HEV基因IV型,其中与新疆swCH25株同源性最高,达到89.5%。 对swCH146株各基因的核苷酸同源性进行分析显示,swCH146株包含3个阅读框(ORF1、ORF2、ORF3),swHEV146株ORF1与己报道的HEVⅠ型株(D11093 )、Ⅱ型mexican strain株( M74506.1)和Ⅲ型SWKOR-2株(FJ426404)的ORF1核苷酸同源性分别为87.5%、83.2%和91.0%,而与Ⅳ型KNIH-hHEV4株(FJ763142.1)的同源性高达97.2%;swHEV146株ORF2与以上I~III型毒株的核苷酸同源性分别为92.6%、92.4%和94.9%,与IV型KNIH-hHEV4株同源性为98.9%;swHEV146株ORF3与以上I~III型毒株的核苷酸同源性分别为87.5 %、90.0%和90.6%,与IV型KNIH-hHEV4株同源性为98.4%。 5.构建了HEV swCH146株ORF2的重组腺病毒质粒,转染AD-293细胞,经荧光检测表明获得了AD-E复制缺陷型腺病毒。该项研究为swHEV重组腺病毒疫苗的研制奠定了良好的基础。
【学位授予单位】:甘肃农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:S852.65

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 谭诗文,黄贵平;畜禽乙型肝炎研究进展[J];贵州畜牧兽医;2001年06期
2 沈柏青,任政华,孙连贵,董跃,王宝生,孙昌荣,曹占国,刘伟林,曲颖,贾琳,赵丽泽,杨福林,童文德,孙长春,王志泉,黄创海;猪源乙型肝炎病毒样病毒的提纯与鉴定[J];黑龙江畜牧兽医;1993年07期
3 闻玉梅,何丽芳,瞿涤,马张妹,姚忻;重组治疗性乙型肝炎疫苗(YIC)的实验研究[J];中国工程科学;1999年01期
4 吴玉章;针对病毒感染的治疗性疫苗研究评述[J];第三军医大学学报;2002年10期
5 丁壮,金宁一,陈创夫,邹啸环,王承宇;羊源乙肝病毒与人乙肝病毒S基因序列同源性研究[J];动物医学进展;2001年04期
6 李决,邢钊,孟培武,包文奇,李红,张鹏举,程方程,祝玉侠;PCR和ELISA法检测畜禽类乙型肝炎病毒的研究[J];郑州牧业工程高等专科学校学报;1997年01期
7 张庶民 ,马霄 ,侯启明 ,梁争论 ,雷殿良 ,王安绪 ,马玉珍 ,陈庚军 ,魏顺远 ,杜恩慧 ,王鹏富 ,崔玉梅 ,于洪涛 ,裴晓春 ,刘志强;吸附百白破乙肝(CHO)四联疫苗接种反应及血清学效果观察[J];中国生物制品学杂志;2004年05期
8 多海刚,田克恭;人与动物感染戊型肝炎病毒的研究进展[J];实验动物科学与管理;2002年02期
9 王川庆,阎玉河,左新桐,熊书海,苏莉,王相根,范庆高,宋云海;用ELISA和PCB对猪、牛血清中HBV抗原、抗体及DNA的检测[J];畜牧兽医学报;1996年01期
10 董庆鸣,庄辉;戊型肝炎病毒基因型的研究进展[J];中国公共卫生;2001年05期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 许亚娜,汪寿鹏;中医风寒病因实质探讨[J];安徽中医临床杂志;2000年01期
2 童英!230061,张留喜!230061,江志勤!230061,范琼!230061,韩吉玉!230061;合肥市二次供水卫生10年监测结果与分析[J];安徽预防医学杂志;2001年03期
3 宋金钟;;环磷酰胺与山莨菪碱联合应用治疗顽固性哮喘的疗效观察[J];安徽医学;1987年01期
4 张训海,陈溥言,蔡宝祥;基因探针技术检测血清1型马立克氏病病毒的研究[J];安徽农业技术师范学院学报;1997年03期
5 李杰,张启英,郭才,刘军;PCR检测淋球菌的临床应用价值[J];蚌埠医学院学报;1996年01期
6 高峰,郭可謇,阮力,伊瑶,刘崇柏,朱既明;甲型肝炎重组痘苗病毒(VMS11HAV25)的构建及其某些生物学性质[J];病毒学报;1992年02期
7 曾庆,金冬雁,金奇,胡钢,周圆,李玉英,王珣章,侯云德;人α2b型干扰素基因的修饰合成及其在大肠杆菌中的表达[J];病毒学报;1992年03期
8 万晓余,吴淑华,黄利文,张求旺,张丽兰,侯云德;应用痘苗病毒载体在动物细胞中高效表达人α-瘤坏死因子cDNA及其特性的研究[J];病毒学报;1993年01期
9 周圆,金冬雁,张智清,王伟,黎志良,迟捷,李玉英,侯云德;一种重组人α1型干扰素突变体IFN-α1/86D的纯化与鉴定[J];病毒学报;1993年01期
10 单祥年,蒋清,麻晓迁,郑惠方,李明发,茅一萍,谢维,王照明,刘季和,张建民;应用PCR对尖锐湿疣和外耳道乳头状瘤中HPV DNA的分型检测[J];病毒学报;1993年04期
中国重要会议论文全文数据库 前6条
1 林裕龙;兰萌;龙国进;彭永正;冯桂湘;;HBV基因型在不同乙型肝炎疾病组中的分布[A];广东省肝脏病学会2007年年会论文集[C];2007年
2 吴晓娟;冷梅;赵大鹏;崔颖杰;张岩;汪春义;戚凤春;郭新;付学奇;;带有IL-2基因佐剂的乙肝病毒DNA疫苗构建及其免疫效果的观察[A];2006年全国生化与生物技术药物学术年会论文集[C];2006年
3 谭诗文;冉懋韬;艾玉萍;金志强;杨粤勇;王凡;;贵州奶牛乙型肝炎的调查和病理形态学观察[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十三次学术讨论会和中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十二次学术讨论会论文集[C];2005年
4 周胜生;王永忠;;乙型肝炎病毒基因分型与拉米夫定临床应用反应[A];第十二次全国中西医结合肝病学术会议论文汇编[C];2003年
5 饶和平;蒋峻梅;吴秀仙;陈月卿;汪苏亚;兰岳云;;高职大学生接种重组酵母乙型肝炎疫苗效果观察[A];第九次浙江省中西医结合肝病学术会议论文汇编[C];2006年
6 沃恩康;陈勇;;实时荧光PCR定量检测戊型肝炎病毒的方法研究[A];2007年浙江省医学病毒学、医学微生物与免疫学学术年会论文汇编[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 姜永厚;新城疫病毒F基因与鸡IL-2重组DNA疫苗的研究[D];东北农业大学;2000年
2 林同;舞毒蛾NPV多角体蛋白基因的克隆、测序和表达[D];东北林业大学;2001年
3 王凤阳;重组逆转录病毒-精原干细胞介导的转基因研究[D];中国人民解放军军需大学;2001年
4 李雪梅;鹅细小病毒和番鸭细小病毒部分基因组克隆、序列分析及VP2-VP3基因的表达[D];中国人民解放军军需大学;2001年
5 李新红;汉滩病毒西安分离毒株84FLi的全基因序列测定与分析及G1和G2糖蛋白杆状病毒表达载体的构建[D];第四军医大学;2002年
6 郝春秋;HCV结构蛋白腺病毒表达载体的构建及T细胞疫苗对HCV清除作用的研究[D];第四军医大学;2002年
7 成子强;禽白血病病毒J亚群(ALV-J)内蒙株的建立及致瘤机理的研究[D];内蒙古农业大学;2002年
8 石建党;普通棉耳狨猴死亡病毒病因及与人群关系的研究[D];天津医科大学;2002年
9 马英;乙肝病毒表面抗原(HBsAg)、戊肝病毒ORF2基因片段NE_2在番茄中的表达及免疫活性[D];福建农林大学;2002年
10 凌宁;截短的乙型肝炎表面抗原分子的表达及其抗原特性的研究[D];重庆医科大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李淑珍;乙型肝炎病毒基因型及“a”决定簇变异与HBV宫内传播关系的研究[D];山西医科大学;2005年
2 庞志钊;HBV感染标志的血清流行病学研究及重组酵母乙肝疫苗成人近期免疫效果研究[D];河北医科大学;2005年
3 王艳;粘虫核型多角体病毒高毒力克隆株的筛选[D];东北农业大学;2000年
4 韩继刚;小球藻病毒的分离提纯及其几丁质酶基因的克隆[D];河北大学;2000年
5 孙磊;对虾白斑杆状病毒的分离纯化、超微结构及形态发生的研究[D];河北大学;2000年
6 刘德忠;抗HPV-6b/11 E1通用核酶—Rz1198和Rz1282的体外制备、活性鉴定及鸟枪型核酶pRE1的构建[D];第一军医大学;2000年
7 张晓娟;生长抑素基因工程疫苗相关检测方法的研究[D];南京农业大学;2000年
8 夏学春;人乙肝前表面抗原preS1和重组表面抗原SS1在家蚕中的表达[D];浙江大学;2001年
9 王淑颖;戊型肝炎病毒结构区ORF2基因的克隆与表达[D];浙江大学;2001年
10 刘玉良;PCR技术诊断猪伪狂犬病的应用研究[D];广西大学;2001年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 尹格平,李强,陈诵芬,孙晓明,吴战英,朱彤宇;流式细胞术检测化疗前后卵巢癌细胞凋亡的临床意义[J];癌症;2000年04期
2 倪方锷,甘人宝,杜传书,李载平段恕诚,徐志一;一个表面抗原144位Asp→Ala的新乙型肝炎病毒变异株[J];病毒学报;1994年01期
3 吴玉章;免疫识别、分子设计与抗原工程[J];第三军医大学学报;2000年10期
4 吴玉章,刘茂昌,贾正才,邹丽云;HBV新型免疫原的设计、合成及免疫原性研究[J];第三军医大学学报;2000年10期
5 吴玉章;针对病毒感染的治疗性疫苗研究评述[J];第三军医大学学报;2002年10期
6 丁壮,金宁一,陈创夫,邹啸环,王承宇;羊源乙肝病毒与人乙肝病毒S基因序列同源性研究[J];动物医学进展;2001年04期
7 闻玉梅,何丽芳,瞿涤,马张妹,姚忻;重组治疗性乙型肝炎疫苗(YIC)的实验研究[J];中国工程科学;1999年01期
8 唐红,周思亮,赵连三,王锦蓉,雷秉钧,曹钟樑;家畜家禽中类乙型肝炎病毒存在的初步血清学调查[J];四川大学学报(医学版);1990年02期
9 冯宗铭,周翊钟,吴祥甫,甘人宝,李载平;一个带有新的Hind Ⅲ切点的HBVadr基因组克隆株[J];中国科学B辑;1985年03期
10 李决,邢钊,孟培武,包文奇,李红,张鹏举,程方程,祝玉侠;PCR和ELISA法检测畜禽类乙型肝炎病毒的研究[J];郑州牧业工程高等专科学校学报;1997年01期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张显升,赵启祖,刘在新,江鹏斐,常惠芸,陈应理,李冬,魏怀录,谢庆阁;口蹄疫病毒株China/99 P3区一级结构及与参考毒株的比较分析[J];畜牧兽医学报;2002年06期
2 张相萍;林瑛;屈艾;孟清;;自我剪接内含子结构与剪接的关系[J];生命科学;2009年04期
3 白慕群;周旭;安静;姜英;;输血传播病毒ORF2基因的克隆和原核表达[J];中国生物制品学杂志;2007年03期
4 马德星;刘胜旺;李广兴;;鸡传染性支气管炎病毒SC株mRNA5及mRNA6 cDNA分子特征[J];中国兽医杂志;2007年08期
5 李志勇;易咏竹;殷相平;张志芳;柳纪省;;亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒全长可读框的表达及其产物免疫原性分析[J];科学通报;2007年16期
6 刘雅婷,李正跃,朱有勇,李成云,李永忠;植物病原细菌Pseudomonas syringae pv.tomato基因组中的信号肽分析[J];遗传;2005年06期
7 朱贞;;2007年风疹野病毒标准命名的更新[J];中国计划免疫;2007年06期
8 高敏;;H1N2亚型猪流感病毒NS1基因的克隆与序列分析[J];现代农业科技;2008年22期
9 张显升,赵启祖,刘在新,江鹏斐,常惠芸,陈应理,李冬,魏怀录,谢庆阁;口蹄疫病毒基因组内部核糖体进入位点一级和二级结构分析[J];病毒学报;2002年02期
10 磨美兰;韦正吉;韦平;仇兴华;陈秋英;张胜斌;黄百花;韦天超;;传染性支气管炎病毒的分离及其S1基因高变区Ⅰ的遗传变异性分析[J];中国兽医杂志;2006年08期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 肖爱欢;赵武;梁家幸;秦毅斌;何颖;李茂宁;李斌;侯韶毅;苏乾莲;梁保忠;黄伟坚;;广西猪戊型肝炎病毒ORF2扩增及抗原性分析[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会论文集[C];2010年
2 唐娜;曲光刚;王金良;苗立中;肖跃强;张倩;沈志强;;山东地区猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及ORF4、ORF5基因遗传特性分析[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
3 杜平;刘学荣;黄银君;牟克斌;;猪繁殖与呼吸综合征病毒NX-1株ORF5基因的克隆与分析[A];中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2010年学术年会(第三届中国兽药大会学术论坛)论文集[C];2010年
4 ;The ORF4a of Human Coronavirus 229E Encodes an ion channel protein[A];第十一次中国生物物理学术大会暨第九届全国会员代表大会摘要集[C];2009年
5 王泽霖;柴丽娜;李和平;王新卫;;H9N2亚型河南分离毒株HA基因的扩增及序列分析比较[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集(下册)[C];2009年
6 陈建飞;王承宝;时洪艳;陈小金;张志榜;冯力;;猪流行性腹泻病毒的分子流行病学研究[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集[C];2010年
7 毕鹏;吴志新;苏念;李莉娟;;斑点叉尾鮰病毒(CCV)的纯化及其结构蛋白的质谱鉴定[A];渔业科技创新与发展方式转变——2011年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
8 赵钦;孙亚妮;赵冀楠;王鑫杰;周恩民;;禽戊型肝炎病毒衣壳蛋白的抗原表位分析[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
9 马德星;李广兴;;鸡传染性支气管炎病毒地方分离株mRNA5及mRNA6遗传变异特征[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十四次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十三次学术研讨会论文集[C];2006年
10 袁小远;徐怀英;王友令;秦卓明;;山东新城疫病毒分离株的F和HN基因的遗传进化分析[A];禽类新发传染病高层论坛论文集[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 孟涛;国检局严把猪肉进口关[N];中国食品质量报;2000年
2 李妲娜;奥尔夫在中国[N];音乐周报;2000年
3 胡德惠;从喊“狼来了”到“与狼共舞”[N];新华日报;2002年
4 小殊;注射疫苗是预防流感的好方法[N];新疆科技报(汉);2000年
5 尔冬尘;福费廷款款登陆[N];中国城乡金融报;2001年
6 洪静仪 陈欣 罗进;最大福费廷成交[N];中国城乡金融报;2001年
7 秦友国 黎锦云 毕纲;镇江成功办理首笔福费廷业务[N];中国城乡金融报;2002年
8 记者姜业庆;福费廷业务[N];中国经济时报;2002年
9 张国华 葛建新;贸易融资新途径[N];金融时报;2001年
10 记者 贾勤文;拓展国际金融新业务[N];上海金融报;2001年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 姜中毅;猪传染性肝炎病毒的基因克隆及分子特征研究[D];甘肃农业大学;2009年
2 姜中毅;猪传染性肝炎病毒的基因克隆及分子特征研究[D];甘肃农业大学;2010年
3 王晶晶;戊型肝炎病毒ORF3蛋白的功能研究[D];华中科技大学;2012年
4 何嘉玲;猪圆环病毒2型编码蛋白4的鉴定及其感染后的宿主免疫器官基因表达谱分析[D];浙江大学;2012年
5 耿彦生;戊型肝炎病毒在家禽、家畜中的流行及其ORF3蛋白与人肝细胞蛋白相互作用的研究[D];北京协和医学院;2011年
6 赵钦;国内禽戊型肝炎病毒的分离鉴定及其抗原性的研究[D];山东农业大学;2011年
7 李志勇;AsiaⅠ型口蹄疫病毒空衣壳抗原的表达与免疫研究[D];中国农业科学院;2007年
8 邢福珊;PCV-2 ORF2蛋白在杆状病毒表面的展示及动物免疫试验[D];西北农林科技大学;2011年
9 姜一峰;高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒强弱毒毒力差异的分子基础研究[D];中国农业科学院;2012年
10 盛晔;斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型(SpltMNPV Ⅱ)BV、ODV组成型蛋白质谱分析和4种ORF的基因分析[D];苏州大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 魏宗;鸭圆环病毒ORF3基因的序列分析及基因表达[D];山东农业大学;2011年
2 朱永豹;武汉地区戊型肝炎病毒基因型及ORF3基因变异的分析[D];华中科技大学;2011年
3 胡守彬;禽戊型肝炎病毒中国分离株ORF3蛋白抗原表位分析[D];山东农业大学;2012年
4 郭亮;戊型肝炎病毒ORF3的表达及其相互作用蛋白的筛选和鉴定[D];上海交通大学;2013年
5 刘志伟;上海和内蒙古地区输血性传播病毒的流行病学调查及ORF1基因的克隆表达[D];内蒙古农业大学;2011年
6 何乃珠;猪圆环病毒2型ORF2基因的克隆与序列分析及其真核表达[D];扬州大学;2012年
7 董玲娟;TGEV Real-time PCR检测方法的建立及ORF7蛋白亚细胞定位和对病毒增殖影响的研究[D];西北农林科技大学;2012年
8 石瑞英;斜纹夜蛾核型多角体病毒ⅡORF56基因的特性分析[D];苏州大学;2010年
9 闵丹;斜纹夜蛾核型多角体病毒ⅡORF50基因的研究[D];苏州大学;2010年
10 倪方锐;草莓镶脉病毒中国分离物全基因组结构特征及其ORF VI基因功能鉴定[D];安徽农业大学;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026