收藏本站
《甘肃农业大学》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

猪带绦虫六钩蚴TSOL18抗原表位及组织定位的研究

郭爱疆  
【摘要】:囊尾蚴病是由猪带绦虫的幼虫——囊尾蚴寄生于人或猪而引起的人畜共患寄生虫病,该病不仅给畜牧业造成一定的经济损失,而且还威胁着人类健康,是经济落后国家和地区重要的公共卫生问题。TSOL18是猪带绦虫六钩蚴阶段特异性表达的抗原,主要在六钩蚴入侵中间宿主的早期阶段分泌,其免疫血清在体外能有效杀死六钩蚴,体外表达的重组TSOL18能完全保护猪不被猪带绦虫虫卵感染。随着免疫学的发展,人们认识到有效的保护是抗原表位的参与。因此,阐明猪带绦虫TSOL18蛋白的抗原表位和组织分布对于该病的新型诊断试剂以及分子疫苗设计方面意义重大。 本研究挑取实验室保存的重组菌株Pichia pastoris pPIC9K-TSOL18进行5L发酵罐发酵培养,甲醇诱导72 h后将表达上清液进行SDS-PAGE,用薄层扫描分析,目的蛋白约占上清总蛋白含量的80%以上,目的蛋白表达量达2.00g/L。重组蛋白TSOL18经Sephadex G-100分子筛凝胶层析纯化后,其纯度达90%,满足制备单抗的抗原要求。 将纯化的TSOL18作为免疫原,制备了12株可分泌TSOL18单克隆抗体的杂交瘤细胞株,经分型试纸条鉴定,12株单抗分属于IgG1、IgG2a、IgG2b、IgM抗体亚型,轻链均为K型;ELISA叠加试验表明,12株单抗分别识别2个不同抗原表位,2株不同抗原表位单克隆抗体的腹水效价分别达1×102和1×106;杂交瘤细胞株的染色体组型、单抗的稳定性等的分析表明,所获得的12株单抗均能稳定分泌,满足常规实验的要求。 采用次氯酸钠溶液、胆汁和胰酶获得激活的六钩蚴,虫卵的脱壳率为95%,六钩蚴的活力为72%,然后用TSOL18免疫的猪血清和TSOL18单抗对激活的六钩蚴分别进行体外杀伤实验,台盼蓝染色判定六钩蚴活力。结果证实在有补体的情况下,多抗和单抗6天时对六钩蚴的杀伤率分别为73%和52%。 为了分析单抗的抗原结合位点,本研究利用TSOL18单克隆抗体筛选噬菌体随机12肽库,通过四轮“吸附-洗脱-扩增”的亲和筛选,对噬菌体12肽库进行了富集。随机挑取的59个噬斑提取DNA后测序,根据测序结果推导出的TSOL18单抗识别的表位氨基酸序列分别为ETTKLQRFQAML (L1)和DHTLF (L2),两个序列出现频率分别是83%和15%。ELISA方法检测噬菌体克隆与单抗MAb或BSA的结合反应表明,两个表位均与单抗特异性结合。在验证噬菌体蛋白抑制实验中,加入不同滴度的纯化噬菌体Ll或L2克隆,以阻断TSOL18 MAb与TSOL18抗原的结合,结果显示,随着噬菌体滴度的降低,对TSOL18 MAb与TSOL18抗原结合的抑制率也逐渐降低,呈剂量效应关系。 将筛选出的特异性噬菌体克隆大量扩增,纯化蛋白免疫小鼠,检测血清与TSOL18蛋白的反应性。ELISA结果显示,筛选的两个表位均能与TSOL18抗原发生反应。同时用两个表位作抗原检测表位与TSOL18免疫的猪血清的反应性。ELISA结果显示,两个表位均与被检血清反应。用筛选到的表位检测猪囊尾蚴病血清,ELISA敏感性分别为85%(L1)和79%(L2)。利用噬菌体展示技术筛选TSOL18抗原表位为猪囊尾蚴病免疫和诊断技术的进一步研究奠定了基础。 采用胶体金标记技术对猪带绦虫六钩蚴宿主保护性抗原TSOL18进行定位,发现金颗粒沉积于小钩、穿刺腺细胞的细胞质和分泌颗粒周围,而对照血清的六钩蚴胶体金染色未见特异性金颗粒沉积。
【学位授予单位】:甘肃农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R392

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈娜莎;华荣虹;闫丽萍;赵付荣;王斌;杜鹃;王云峰;童光志;;乙型脑炎病毒E蛋白抗原表位多肽序列鉴定及分析[J];中国预防兽医学报;2011年07期
2 邵继平;姜世勃;刘叔文;;基于gp41的HIV亚单位疫苗研究进展[J];细胞与分子免疫学杂志;2011年09期
3 张璇;杲光伟;李大伟;;用于研究人凝血因子Ⅷ重链抗原表位的双色荧光免疫印迹分析法[J];细胞与分子免疫学杂志;2011年09期
4 殷丽天;曹蕾;孟晓丽;王海龙;刘红丽;殷国荣;;刚地弓形虫热休克70基因编码蛋白结构与功能的生物信息学分析[J];中国病原生物学杂志;2011年07期
5 张婷;张学光;瞿秋霞;章良;;计算机模建和点突变分析抗人CD40单克隆抗体5C11识别的抗原表位[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2011年04期
6 毕昊;陆华新;王先广;卢艳军;刘志国;;利用PMCA技术实验不同剂量MCT联合DTT对PrP~(sc)转化的抑制效应[J];中国生物化学与分子生物学报;2011年09期
7 易海涛;刘芳;夏立新;闫浩;刘飞燕;李建杰;刘志刚;;经合理的序列重组制备花生主要过敏原Ara h 2低致敏衍生物[J];中国生物工程杂志;2011年07期
8 曹蕾;毕胜利;;病毒样颗粒疫苗的研究进展[J];病毒学报;2011年04期
9 杨秉芬;刘蓉;刘莹;杨金菊;柳晓兰;高建恩;孙启鸿;;肝癌相关的单克隆抗体的制备及其抗原表位分析[J];细胞与分子免疫学杂志;2011年07期
10 高加梅;宋俐霏;李军;张立志;于丹;国泰;;甲型肝炎病毒单克隆抗体的筛选与初步应用[J];中国生物制品学杂志;2011年09期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 胡晓林;;B细胞抗原表位研究进展[A];天津市核学会2005年学术交流会论文汇编[C];2005年
2 周宇;王永山;范红结;欧阳伟;唐雨德;王忠灿;;IBDV抗原表位与VP2组合基因的分子构建及其在昆虫细胞中的表达[A];第四届第十次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛论文集(下册)[C];2010年
3 李玉娇;王晶;赵慧;贾海英;李博;马秀敏;温浩;丁剑冰;;细粒棘球绦虫Eg95抗原表位的二级结构和表位预测[A];2011新型疫苗与抗体创制关键技术及质量控制研讨会论文集[C];2011年
4 黄革;王德斌;郭黎平;赵念玺;李媛媛;陆士新;;食管癌相关基因2(ECRG2)多肽C末端抗原表位在E.coli和COS-7细胞中的表达分析[A];科技、工程与经济社会协调发展——中国科协第五届青年学术年会论文集[C];2004年
5 王进荣;杨利国;;人卵泡抑制素α亚基抗原表位的预测[A];第四届中国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集[C];2001年
6 陈书明;张秋伟;曹瑞兵;陈溥言;;鸡肾型传染性支气管炎病毒S1抗原表位富集区在毕赤酵母中的表达[A];全国动物生理生化第十次学术交流会论文摘要汇编[C];2008年
7 林祥梅;邓俊花;李雅静;吴绍强;;南非Ⅱ型口蹄疫抗原表位筛选、表达及ELISA检测方法研究[A];动物检疫学分会2010年学术年会论文集[C];2010年
8 李越希;陶开华;张锦海;黄培堂;;SARS病毒的S蛋白和N蛋白抗原表位的分析、基因合成、表达纯化及鉴定[A];科技、工程与经济社会协调发展——中国科协第五届青年学术年会论文集[C];2004年
9 王凌;闭兰;张爱华;;用噬菌体随机7肽库筛选WuT4单抗人CD4 B细胞抗原表位[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年
10 张兴梅;刘刚;孙曼霁;;应用组合化学新技术研究人脑乙酰胆碱酯酶的抗原表位[A];第七届全国生化药理学术讨论会论文摘要集[C];2000年
中国重要报纸全文数据库 前6条
1 陆志城;为AD疫苗研发带来新希望[N];医药经济报;2002年
2 肖鑫 朱晓军;抗体阴性不能排除感染丙肝[N];健康报;2003年
3 本报记者 李天舒 胡德荣;捕捉一等奖“闪光点”[N];健康报;2010年
4 胡德荣;上海:非典病毒特异性抗体制备成功[N];健康报;2003年
5 通讯员 吴志军;我国丙型肝炎疫苗研究进展获突破[N];科技日报;2003年
6 记者 刘欢;同性恋人群艾滋病感染率达7.26%[N];北京日报;2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 郭爱疆;猪带绦虫六钩蚴TSOL18抗原表位及组织定位的研究[D];甘肃农业大学;2010年
2 商绍彬;猪圆环病毒衣壳蛋白抗原表位的精细定位与间接ELISA检测技术[D];浙江大学;2007年
3 王艳华;弓形虫代谢分泌抗原和表面蛋白1抗原表位研究[D];中国农业科学院;2011年
4 李峥;高致病性禽流感H5N1病毒血凝素蛋白中和抗原表位鉴定及其跨物种传播规律的研究[D];北京协和医学院;2009年
5 刘霄卉;JSRV表面蛋白抗原表位的筛选及检测试剂盒的制备[D];内蒙古农业大学;2011年
6 蔡瑞琨;高免疫原性T细胞抗原表位预测方法的研究[D];华中科技大学;2012年
7 张巍;抗人TNF-α单抗Z12识别的抗原表位研究及其人源化改造[D];中国人民解放军军事医学科学院;2003年
8 耿宏伟;蓝舌病病毒群特异性构象抗原表位的初步鉴定及竞争ELISA检测方法的建立与应用[D];东北农业大学;2012年
9 王哲;耶尔森氏菌蛋白在促甲状腺素受体自身抗体产生中分子模拟机制的研究[D];山东大学;2010年
10 辛忠涛;应用细菌表面展示技术快速筛选抗原表位及研制应急疫苗[D];中国人民解放军军事医学科学院;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张志榜;猪流行性腹泻病毒膜蛋白和核蛋白抗原表位的鉴定[D];中国农业科学院;2011年
2 石晓妮;小反刍兽疫病毒H、F蛋白抗原表位的鉴定和免疫学特性研究[D];甘肃农业大学;2011年
3 邱炎;幽门螺杆菌尿素酶B抗原表位的鉴定[D];华中农业大学;2010年
4 张婷;抗人CD40单抗5C11抗原识别表位的初步研究[D];苏州大学;2011年
5 刘畅;抗肾小球基底膜病患者血清抗体的异质性及其临床病理的相关性分析[D];郑州大学;2010年
6 陈欣;副猪嗜血杆菌的分离与单抗制备及其抗原表位鉴定[D];中国农业科学院;2011年
7 黄垭婷;日本乙型脑炎病毒E蛋白单克隆抗体的筛选及其抗原表位的初步鉴定研究[D];四川农业大学;2011年
8 江燕;识别构象型抗原表位抗狂犬病NP单抗研究[D];西南大学;2010年
9 谢红玲;猪细小病毒单克隆抗体的研制及其抗原表位的筛选[D];黑龙江八一农垦大学;2010年
10 郑礼娜;虾类过敏原的活性分析及其抗原表位的研究[D];中国海洋大学;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026